Les anarobies

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Les anaérobies
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Aspect microscopique
Bacilles Gram
présentant une spore
À lEF mobiles le plus souvent par ciliature
péritriche
Spore très résistante, non détruite à 100C
pendant 3 à 5 heures.
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Classification

• Elle se fait selon leur habitat, leurs caractères
  morphologiques et culturaux et leur pouvoir
  pathogène. On distingue
• la flore tellurique bactéries saprophytes du sol
  et commensales des cavités naturelles de l'homme
  et des animaux. Exemple  le genre Clostridium.
  Règle appliquée pour les conserves
  industrielles  10 min à 120C.
• la flore de Veillon bactéries commensales des
  voies respiratoires, digestives et génitales de
  l'homme et des animaux et qui ne peuvent survivre
  dans le sol, non sporulées. Exemples  nombreux
  genres comme Bacteroides, Peptococcus,
  Mobiluncus, Fusobacterium.

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Pouvoir pathogène
Clostridium tetani
Forme végétative bacilles à bouts carrés en
chaînettes plus ou moins longues Gram
Forme de résistance spore dans un environnement
favorable permet le développement dun nouveau
Clostridium tetani. Présent dans le sol et les
poussières ? tétanos
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• Le tétanos est secondaire à l'introduction dans
  l'organisme de spores de Clostridium tetani
  consécutive à un traumatisme.
• Si l'anaérobiose est suffisante (plaies
  profondes, multiplication de bactéries aérobies
  associées), les formes végétatives apparaissent
  par germination des spores.
• Cependant, la multiplication bactérienne reste
  localisée à la porte d'entrée, la maladie est
  uniquement due à la toxine.
• La toxine, libérée au cours de la multiplication
  entre par endocytose par les terminaisons
  nerveuses du site infecté.
• Elle empêche la libération d'inhibiteurs du
  motoneurone (glycine, GABA) et provoque une
  paralysie spastique. (muscle restant en
  contraction)

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Clostridium botulinum
Observation microscopique

• Grand bacille (5 µm de long, 1 µm de large),
• Gram ,
• Formant une spore ovalaire terminale déformante.

Caractères biochimiques ANS, glucose , mobile.
Clostridium botulinum est l'agent d'une
intoxication alimentaire, le botulisme. La
maladie nest pas due à la bactérie mais à
lingestion de sa toxine présent dans un aliment
mal stérilisé. Cest une toxine thermolabile
(sensible à la chaleur), il y a risque de
contamination uniquement lors de lingestion
daliments non chauffés. L'intoxication se
traduira par une paralysie des muscles lisses
essentiellement.
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Clostridium perfringens
Observation au MEB

• Grand bacille (5 µm de long, 1 µm de large),
• Gram ,
• Formant une spore ovalaire terminale déformante.

Responsable de gangrènes gazeuses
post-traumatiques, de toxi-infections
alimentaires et d'entérites nécrosantes. C'est
l'anaérobie le plus répandu dans l'environnement
(sol, eau, air, poussières). C'est aussi un
commensal des flores de l'intestin, du vagin ou
des voies aériennes supérieures de l'Homme et des
animaux. Sa présence dans les eaux est un critère
de contamination fécale.
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Angine fuso-spirochétienne de Vincent

• Angine ulcéro-nécrotique accompagnée d'une
  fièvre élevée et d'une réaction ganglionnaire de
  voisinage.
• Le diagnostic est bactérioscopique avec la
  présence d'une bactérie de type Fusobacterium et
  d'une bactérie de type spirochète.
• Le traitement de cette angine est simple à base
  de pénicilline G.

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Les milieux de culture des Clostridium
Milieu de SCHAEDLER
Bouillon trypticase soja 10 g Polytone Sg
glucose 5 g Extrait de levure 5
g Tris-hydroxyméthylaminométhane 3 g
Hémine 0,01 g L-cystéine 0,40 g
ED qsp 1 L
Source N et de C, de vitamines
Tampon (maintien du pH constant)
Facteur de croissance (synthèse des cytochromes)
Acide aminé, réducteur
pH 7,6

• Ce milieu peut-être 
• enrichi par addition de vitamine K3.
• sélectif par addition d'inhibiteurs .
• solide par addition d'agar gélose Schaedler.

Utilisation
Bouillon ou gélose Schaedler simple bactéries
non exigeantes du genre Clostridium . Bouillon
ou gélose enrichi(e) bactéries exigeantes de la
flore de Veillon. Milieu de culture utilisé pour
les bactéries anaérobies exigeantes gélose
Schaedler vitamine K3 sang frais à une
concentration de 5.
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Milieu de Rosenow cystéine
Composition
Peptone trypsique 10 g Extrait de viande de
buf 3 g Chlorure de sodium 2 g
Chlorhydrate de Cystéine 0,3 g Glucose 2
g Indicateur dAndrade 10 mL (fushine acide
dans de lED) ED qsp 1 L
Source N et de C
Sources minérales
Acide aminé, réducteur
Source énergétique carbonée
Indicateur doxydo réduction
pH 7,2
Ajouter dans le tube Un morceau de marbre Un
morceau de cervelle de boeuf
Ensemencement

• Régénérer le milieu 20 min au BM à 100C pour
  assurer lanaérobie
• La présence dun réducteur renforce lanaérobie
• Ensemencer en profondeur le tube en évitant les
  bulles dair
• Recouvrir de paraffine fondue
• Incuber 24 heures à 37C.

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Milieu MRS
Composition
Peptone trypsique de caséine 15 g Macération de
viande 500 mL Extrait de
levure 5 g Acétate de sodium 5 g Citrate
dammonium 2 g Phosphate bipotassique
2,4 g Tween 80 1 mL Sulfate de
magnésium 0,2 g Sulfate de
manganèse 0,05 g Glucose
20 g Agar 12 g ED qsp 1 L
Source N et de C, vitamines et minéraux,
dacides aminés
Inhjbiteurs (concentrations ?)
Source minérale
Apport dacides gras
Sources minérales
Source énergétique de C
pH 6,5 inhibiteur
Cest un milieu disolement sélectif et enrichi
des Lactobacillus utilisé pour lisolement et le
dénombrement de ces bactéries dans les produits
laitiers.
Ensemencement

• Isolement par la technique des quadrants et
  incubation sous atmosphère à CO2 .

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Lecture des milieux
Milieu de Rosenow Cystéine
Coloration rose à rouge carmin au niveau de la
cervelle ? fermentation du glucose
Pas de coloration rose ? glucose -
Décoloration du milieu voir virage au vert ? les
bactéries sont réductrices
Apparition de bulles, décollement de la paraffine
? production de gaz par les bactéries
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Type respiratoire
Gélose de Schaedler en anaérobiose
Culture sur la hauteur du tube, à lexception de
la surface en contact avec lO2 de lair ?
bactéries ANS.
Colonies blanches contours réguliers,
bombées,type S ? culture sur milieu riche en
anaérobiose
n impair Bacilles Gram - ? culture sur milieu
riche , bactéries exigeantes faisant partie de la
flore de veillon
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Colonies blanches contours réguliers, bombées,
type S ? culture sur milieu riche en anaérobiose
n pair Bacilles Gram sporogène ? bactéries
faisant partie de la flore tellurique.
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Gélose MRS
Petites colonies blanches ? caractéristiques des
Lactobacillus
Culture sur les boîtes mises en anaérobiose et
sous atmosphère à CO2 ? bactéries cultivant en
absence dO2 nécessaire à la fermentation du
lactose du lait ? production dacides
responsables de lapparition du caillé.
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Frottis du yaourt
Coques en chaînette Gram ? caractéristiques des
Lactococcus
Bacilles Gram ? caractéristiques des
Lactobacillus
La fermentation du yaourt est due à deux types de
bactérie provoquant le caillé du lait par
production dacides lors de lutilisation du
lactose.