Jako referencn

1
Role Th17 bunek u plicní sarkoidózy Fillerová
R1, Kriegová E1, Žurková M2, Kolek V2, Petrek M1
1Laborator imunogenomiky a proteomiky, Ústav
imunologie LF UP Olomouc. 2Klinika respiracní
medicíny LF UP a FN Olomouc
Záver
Cíl Sledování expresních profilu vybraných
cytokinu produkovaných Th17 bunkami, vcetne
jejich aktivátoru a inhibitoru, u plicní
sarkoidózy.

• V BAL bunkách pacientu se sarkoidózou byla
  zvýšená mRNA exprese cytokinu IL-21 ve
  srovnání s kontrolami, exprese dalších cytokinu
  IL-17A, IL-17F a IL-22 produkovaných Th17 bunkami
  nebyla zvýšená mezi studovanými skupinami.
• Detekovali jsme zvýšené množství transkriptu 4
  aktivátoru Th17 bunek ( IL-6, TGF-ß, ROR?t a
  IL-23) a 2 inhibitoru Th17 bunek ( IL-27, T-bet)
  u sarkoidózy ve srovnání s kontrolními jedinci.
• Naše pilotní výsledky naznacují, že Th17 bunky se
  nepodílí na iniciaci a rozvoji zánetu u plicní
  sarkoidózy. Budeme dále studovat jejich úlohu v
  plicích pacientu se sarkoidózou.

Úvod
Výsledky
Plicní sarkoidóza

• Ze 4 sledovaných cytokinu produkovaných Th17
  bunkami byla mRNA exprese v BAL bunkách zvýšena u
  pacientu se sarkoidózou ve srovnání s kontrolami
  pouze u cytokinu IL-21 (p0,001) (Obr.1)
• Pri sledování profilu exprese aktivátoru Th17
  bunek, byla mRNA exprese u pacientu ve srovnání
  s kontrolami zvýšena u IL-6 (p0,0001), ROR?t
  (p0,001) IL-23 (p0,0003) a TGF-ß (p0,02)
  (Obr.2 a 3)
• Dále pri sledování profilu exprese inhibitoru
  Th17 bunek, byla mRNA exprese zvýšena u T-bet
  (p0,00001) a IL-27 (p0,002) u pacientu ve
  srovnání s kontrolami (Obr.4)

• Plicní sarkoidóza je zánetlivé granulomatózní
  onemocnení, jehož etiologie je zatím stále
  nejasná.
• V patogenezi sarkoidózy hrají duležitou roli
  CD4 T-lymfocyty, zejména pak bunky Th1 typu a
  jejich produkty.

Cytokiny produkované Th17 bunkami
Inhibitory cytokinu produkované Th17 bunkami
Th17 bunky

• Th17 bunky vznikají také diferenciací CD4
  T-lymfocytu a podílí se na rozvoji zánetu u rady
  onemocnení produkcí specifických cytokinu, které
  mohou indukovat expresi dalších molekul (napr.
  CXCL9, CXCL10 a CXCL11).
• Role Th17 bunek u sarkoidózy je zatím
  neobjasnena.

Obr. 4 mRNA exprese inhibitoru cytokinu
produkovaných Th17 bunkami v BAL bunkách pacientu
se sarkoidózou (S) a kontrol (C). Data jsou
prezentována jako prumerné hodnoty relativní
exprese. p lt 0.05
Obr. 1 mRNA exprese cytokinu produkovaných Th17
bunkami v BAL bunkách pacientu se sarkoidózou (S)
a kontrol (C). Data jsou prezentována jako
prumerné hodnoty relativní exprese. p lt 0.05
Diferenciace Th17 bunek
Aktivátory cytokinu produkované Th17 bunkami I
Aktivátory cytokinu produkované Th17 bunkami II


Obr. 2 a 3 mRNA exprese aktivátoru cytokinu
produkovaných Th17 bunkami v BAL bunkách pacientu
se sarkoidózou (S) a kontrol (C). Data jsou
prezentována jako prumerné hodnoty relativní
exprese. p lt 0.05
Immunol Res. 200841(2)88
Merený soubor
Charakteristika merení

• Jako referencní gen byl použit PSMB2 gen
  (Kriegova et al. BMC Mol Biol. 2008).
• Použité Intron-spanning primery
  Assays-on-Demand Gene Expression (Applied
  Biosystems) nebo LNA primers/probes (Roche,
  Universal Probe Library)
• Relativní exprese byla vypocítána metodou druhé
  derivace (RotorGene Software 6.1.71, Corbett
  Research).

• Pacienti se sarkoidózou (S, n58), (klinické
  projevy výskyt granulomu v biopsiích CD4
  lymfocytární alveolitida)
• Kontrolní jedinci (C, n20) (pacienti bez
  infekce s normálním bronchoalveolárním bunecným
  profilem)

Studované molekuly

• Cytokiny produkované Th17 bunkami IL-17A,
  IL-17F, IL-21, IL-22
• Aktivátory produktu Th17 bunek IL-6, ROR?t,
  IL-23, TGF-ß, STAT-3
• Inhibitory produktu Th17 bunek T-bet, IL-27

Metody

• Metodou kvantitativní RT-PCR (RotorGene 3000
  system, Corbett Research) byla merena mRNA
  exprese studovaných molekul v bunkách
  bronchoalveolární laváže (BAL).

Grantová podpora IGA MZCR NR/9037-4,
MSM6198959205., IGA MZCR NS/10267-3.