CAPACIDAD ANTIOXIDANTE DE PLANTAS MEDICINALES

1
USAL
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE DE PLANTAS
MEDICINALES Dra. Lucy A. Ibáñez,Mg,Dr Lima-Perú 2
008
2
INVESTIGACION EN PLANTAS MEDICINALES
La Investigación etnobotánica y
etnofarmacológica de las especies vegetales para
su posible utilizaciòn fitoterapèutica, exige un
delicado protocolo de trabajo que incluye toda la
escala de pruebas y ensayos que van desde la
selección de una determinada planta de acuerdo a
ciertos criterios hasta una exhaustiva gama de
ensayos farmacològicos, químicos fitoquímicos,
toxicológicos y clínicos. Manual de Técnicas
Experimentales . Proyecto X.10 . CYTED
3
(No Transcript)
4
Ensayos Clínicos en Plantas Medicinales?

ESTUDIOS PRE-CLÍNICOS
ESTUDIOS CLINICOS
A U T O R I D A D R E G U L A D O R A
ESTUDIOS TOXICOLÓGICOS
ESTUDIOS FASE I
ESTUDIOS FASE II
ESTUDIOS FARMACÓLOGICOS
ESTUDIOS FASE III
ESTUDIOS QUIMICO-FARMACÉUTICOS
AUTORIDAD REGULADORA
ESTUDIOS FASE IV
ESTUDIOS ETNOBÓTANICOS, AGRONÓMICOS
5
FASES DE ESTUDIO DE UN NUEVO MEDICAMENTO
Selección y estandarización del material activo
Estudos pre-clínicos FASE II
Estudos pre-clínicos FASE I

• Eficacia
• Efectos colaterales
• Toxicologia aguda
• Doses repetidas

• Farmacocinética
• Toxicologia especial

Test clínicos FASE II
Test clínicos FASE I
Test clínicos FASE III
Test clínicos FASE IV

• VOLUNTÁRIOS
• limites de dosis
• farmacocinética
• efectos inesperados

• PACIENTES
• eficacia

• MULTICÉNTRICO
• efectos colaterales
• interacciones
• ventajas
• limitaciones

• USO GENERAL
• vigilancia médica

6
INVESTIGACION EN PLANTAS MEDICINALES (EQUIPO
MULTIDISCIPLINARIO)
CULTIVO (ING. FORESTAL, ING. AGRONOMO, ETC)
PATENTES
SÍNTESIS
QUÍMICA COMBINATORIAL
FARMACOLOGÍA MOLECULAR
QUÍMICA ORGÁNICA (QUIMICOS INGENIEROS QUÎMICOS,
FARMACÉUTICOS, ETC)
PROCESO DE VALIDACIÓN
BOTÁNICA (BOTANICOS, TAXONOMOS FARMACEUTICOS
BIOLOGOS, ETC)
ETNOFARMACOLOGIA (FARMACÓLOGOS
ANTROPÓLOGOSFARMACÉUTICOS BIOLOGOSMEDICOS,
ETC).
7
VALIDACIÓN DE PLANTAS MEDICINALES
Test in vitro, preclínicos Y clínicos
PLANTA
Perfil farmacológico Análisis toxicológico
EFICACIA
SEGURIDAD
PLANTA MEDICINAL
Síntesis química de derivados activos
NUEVOS MEDICAMENTOS
Fracciones purificadas
Principios activos aislados e identificados
Extracto total de la planta
8
INCIDENCIA DE ENFERMEDADES DE CRONICO
DEGENERATIVAS
Numerosos estudios en nutrición humana
demuestran una estrecha correlación entre el
consumo de frutas y verduras y la menor
incidencia de enfermedades crónico degenerativas
debido a su bajo contenido en calorías,
colesterol y a la presencia de vitaminas, fibras,
antioxidantes naturales y minerales. Así
mismo el estrés oxidativo ha sido asociado a la
patogénesis de muchas enfermedades humanas, como
arterioesclerosis, artritis, demencia, cáncer,
etc es por ello que el uso de antioxidantes en
farmacología es estudiado de forma intensiva,
particularmente en el tratamiento de accidentes
cerebrovasculares y enfermedades
neurodegenerativas.
9
INCIDENCIA DE ENFERMEDADES DE CRONICO
DEGENERATIVAS
El oxígeno es esencial para la mayoría de los
organismos que viven bajo condiciones aerobicas.
Este es utilizado por la célula , la cual posee
diversos sistemas que producen radicales libres
de oxígeno(RLO). Frente al poder agresivo
de estos RLO, la célula posee un arsenal
defensivo de mecanismos neutralizantes formado
por enzimas y compuestos que evitan la formación
incontrolada y excesiva de RLO y producen la
neutralización, eliminación y bloqueo de su
actividad en cadena
10
INCIDENCIA DE ENFERMEDADES DE CRONICO
DEGENERATIVAS
La enzima superóxido dismutasa remueve el
anión superóxido (O2º) convirtiéndolo en H2O2, el
cual es transformado por la enzimas catalasa y
Glutatión peroxidasa en agua (H2O) . Así
mismo también posee moléculas que remueven los
radicales libres por reacción directa (no
catalítica) tales como el glutation reducido,
los tocoferoles (vitamina E) y el ácido ascórbico
(Vitamina C).
11

• Así mientras que niveles moderados de RLO
  constituyen y modulan vías fisiológicas de
  funciones celulares, incluyendo señalización en
  cascadas y el control de la expresión génica
  transcripcional y post-transcripcional, el estrés
  oxidativo severo induce daño celular que puede
  conducir a apoptosis o a la necrosis.
• Por tanto el estrés oxidativo se deriva de la
  falta de equilibrio entre los mecanismos de
  defensa antioxidante y los fenómenos
  favorecederos de la oxidación.

12
PROCESOS OXIDATIVOS

• Dos fenómenos muy importantes en nuestra vida son
  procesos oxidativos la combustión y la
  respiración. Ambos se asemejan, ya que son
  procesos a través de los cuales sustratos
  combustibles se transforman en energía
  consumiéndose oxígeno y liberándose agua y
  dióxido de carbono.
• Así, la combustión, es un proceso oxidativo en el
  cual un combustible se transforma en energía en
  forma de luz y calor, produciéndose además
  dióxido de carbono (CO2) y agua. Pero si el
  proceso no es perfecto, la oxidación no es total
  y produce contaminantes, como el monóxido de
  carbono.

13

• En la respiración ocurre lo mismo La glucosa y
  ácidos grasos - se transforman en energía. Esta
  transformación se realiza al interior de la
  célula, en la mitocondria y exactamente, se
  produce ATP, la molécula clave para la síntesis
  de los componentes celulares y para la mayoría de
  los procesos celulares, y que se conoce también
  como la "moneda" energética de la célula.
• En la respiración se consume oxígeno, se genera
  ATP, y quedan como residuos dióxido de carbono y
  agua. Pero, este proceso no es perfecto ya que se
  producen también otras moléculas contaminantes,
  las Especies Reactivas del Oxígeno (EROs). Entre
  el 1 y 3 del oxígeno que respiran nuestras
  células al oxidar sus sustratos se transforma en
  EROs, que, o bien son radicales libres, o llevan
  a su formación.

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ESPECIES OXIGENO REACTIVAS (ROS)
Por causas ambientales (radiación), así como
por la ingesta de algún contaminante o incluso
como consecuencia de nuestro propio metabolismo,
surgen algunas moléculas que nos pueden provocar
daño. A estas se les conoce como especies
oxigeno reactivas (ROS), que se asocian a
enfermedades como cáncer, problemas cardiacos o
al natural envejecimiento humano. Entre
los problemas que originan figuran destrucción
de paredes celulares, inactivación de enzimas,
debilitamiento de la capacidad defensiva,
alteración del sistema inmunológico e incluso
daño del material genético .
15
RADICALES LIBRES
Además la radiación cósmica y la radiación
electromagnética de baja longitud de onda (por
ejemplo los rayos gama) pueden dividir el agua en
el cuerpo para generar el radical hidroxilo, OH?.
Este radical débilmente reactivo una vez
producido ataca a cualquier cosa que este cerca,
siendo su vida media extremadamente pequeña y
reaccionando en su punto de formación dejando
tras de si una secuela de reacciones en cadena de
radicales libres en propagación.
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SUPLEMENTACION NUTRICIONAL
Es así que un estudio realizado en China
demostró la eficacia de una suplementación
nutricional" con ß-caroteno, vitamina E y Selenio
sobre la mortalidad total y por cáncer
(especialmente carcinoma de esófago en una
población deficitaria). Sin embargo un
estudio Finlandés realizado sobre una población
de alto riesgo (fumadores importantes) mostró que
la suplementación con dosis elevadas de ß
-caroteno aumentaba el riesgo de padecer un
carcinoma de pulmón. Es muy importante que
una dieta diaria debe proveer cantidades
adecuadas de nutrientes esenciales naturales
para el mantenimiento de una salud óptima. Estos
antioxidantes naturales se encuentran presentes
en prácticamente todas las plantas,
microorganismos, hongos e incluso en los tejidos
animales.
17
TENDENCIAS MUNDIALES DE LA ALIMENTACION
Las tendencias mundiales de la alimentación en
los últimos años indican un interés acentuado de
los consumidores hacia ciertos alimentos que
además de contener nutrientes contengan
sustancias fisiológicamente activas que cumplan,
al igual que los nutrientes esenciales, una
función de beneficio en la reducción de ciertas
enfermedades.
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TENDENCIAS MUNDIALES DE LA ALIMENTACION
A estos alimentos se les ha denominado
alimentos funcionales y se vienen realizando la
identificación de ciertos principios activos, a
fin de evaluar su seguridad y las dosis
respectivas a utilizar, estableciéndose en la
mayoría de casos marcadores analíticos,
marcadores farmacológicos, realizándose además
ensayos clínicos controlados a doble ciego y la
demostración de sus efectos bioquímicos,
fisiológicos, farmacológicos y toxicológicos.
19
ALIMENTOS FUNCIONALES
El término Alimento Funcional fue propuesto
por primera vez en Japón en la década de los 80s
con la publicación de la reglamentación para los
"Alimentos para uso específico de salud" ("Foods
for specified health use" o FOSHU). Aunque
el término alimentos funcionales no es una
categoría de alimento legalmente reconocida por
la Administración de alimentos y Drogas (FDA) de
los Estados Unidos, sin embargo se han dado
recientemente algunos cambios legislativos acerca
de la información que deben contener las
etiquetas de los productos relacionados con
beneficios funcionales de los alimentos.
20
REGULACIONES
Las regulaciones de la NLEA (Ley de Etiquetado
y Regulación Nutricional) y de la DSHEA (Ley de
Suplementos Dietéticos Salud y Educación) se
encaminan a preparar el camino legal en que se
debe fundamentar el uso de estos productos. La
posición oficial de la U.S. Food Drugs
Administration (FDA) es "Las sustancias
específicas de los alimentos pueden favorecer la
salud como parte de una dieta variada".
21
Antioxidantes

• Se define como cualquier sustancia que, a bajas
  concentraciones en comparación con el sustrato
  oxidable, retrasa o inhibe significativamente la
  oxidación de dicho sustrato. Para lograrlo los
  antioxidantees entregan un electron a los
  radicales libres, con lo cual los desactivan,
  apagando el proceso de oxidaciòn y
  transformandose ellos en radicales libres
  inactivos o poco reactivos.
• La importancia de un antioxidante depende de su
  concentración, del medio donde actúa y de su
  habilidad para interaccionar con sistemas
  regeneradores.
• Ciertas enfermedades como la arterioesclerosis,
  degeneraciones ligadas al envejecimiento y el
  cáncer, podrían estar unidas al fenómeno de la
  oxidación celular mediada por radicales libres.

22
ENFERMEDADES CRONICODEGENERATIVAS
EL ENVEJECIMIENTO
23
.
Envejecimiento celular Peroxidación de los ácidos grasos de la membrana celular y daño del ADN.
Ateroesclerosis Peroxidación de lípidos en las partículas de LDL con daño de otros de sus componentes.
Cáncer Daño del ADN.
Cataratas Modificaciones irreversibles en las proteínas.
Cuadros Inflamatorios Crónicos Activación de genes relacionados con la respuesta inflamatoria.
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OXIDACION DE MOLECULAS BIOLOGICAS
La oxidación de las moléculas biológicas,
membranas y tejidos es inducida por el oxigeno
activo y mediada por radicales libres, lo cual
esta relacionado con un aumento en la incidencia
de enfermedades digestivas en los seres humanos.
El metabolismo oxidativo, proceso biológico
normal, es capaz de generar radicales libres
oxigenados, altamente reactivos. Estas especies
con oxígenos activos incluyen el radical
superóxido (O2º), el peróxido de hidrógeno
(H2O2), el radical óxido nítrico (NO?) y el
oxígeno singulete (1O2).
25
Sustancias propias del organismo, enzimas
antioxidantes

• Tambièn cierta parte de los superóxidos son
  producidos por accidentes químicos en los que
  muchas moléculas del cuerpo reaccionan
  directamente con el Oxigeno para producir
  súperóxido. Ejemplos de ello incluyen las
  catecolaminas, tetrahidrofolatos y algunos
  componentes de la cadena mitocondrial y otras
  cadenas de transporte de electrones.
• Esta producción de superóxido es inevitable.
  Además cierta cantidad de súper óxido se produce
  deliberadamente por ejemplo los fagocitos
  activados (neutrófilos, monocitos, macrófagos,
  eosinófilos) dan lugar a grandes cantidades
  superóxido como parte del mecanismo a través del
  cual exterminan a los organismos extraños durante
  las inflamaciones crónicas este mecanismo
  protector normal puede afectarse.

26
Sistemas antioxidantes del organismo

• . ANTIOXIDANTES ENZIMATICOS.
• INTRACELULAR. ENDOGENOS
• Catalasa
• Glutation peroxidasa
• Gutation reductasa
• Superoxido dismutasa
• Complejo reparador de ADN
• ANTIOXIDANTES NO ENZIMATICOS.
• EXTRACELULAR. ENDOGENOS
  DIETARIOS EXOGEBNOS
• Glutation
  B Caroteno
• Urato
  Vit C y E
• Ubiquinol
  Polifenoles
• Poteínas plasmáticas
  Flavonoides
• 
  Químicos sintéticos

27
Sustancias propias del organismo, enzimas
antioxidantes
Además de las enzimas glutatión peroxidasa,
catalasa y superóxido dismutasa, hay otras
sustancias antioxidantes como la coenzima Q-10,
que ayuda a las enzimas a realizar su función, y
participa en numerosos procesos corporales.
Se ha comprobado una gran similitud entre las
propiedades antioxidantes de la vitamina E y las
de la coenzima Q-10, que juega un muy importante
papel en la generación de energía celular, y a su
vez es un estimulante inmune, mejora la
circulación y ayuda a proteger el sistema
cardiovascular.
28
Sustancias propias del organismo, enzimas
antioxidantes
Entre los principales antioxidantes dietarios
esta la vitamina E que se ha demostrado posee
actividad antioxidante in vivo. La vitamina
C in vitro regenera a la vitamina E, lo que
probablemente ocurra tambien in vivo. Los
carotenoides estàn presentes en zanahorias ,
berros, espinacas, tomates , mangos y damascos.
Los polifenoles son un grupo de compuestos
presentes en la naturaleza, en su mayoría
potentes antioxidantes necesarios para el
funcionamiento de las células vegetales, que se
encuentran en frutas y verduras, principalmente
manzanas y cebollas y en bebidas como el té y el
vino.
29

• Los principales polifenoles identificados en
  la dieta son àcidos fenólicos, derivados de
  tirosina, estilbenos, flavonoides y compuestos
  poliméricos como los taninos.
• En estudios in vitro, muchos polifenoles
  naturales son mejores antioxidantes que la vit C
  y E, siendo la quercetina la sustancia más
  abundante.
• Los citroflavonoides presentes en algunos
  cítricos, como el hesperidósido y el rutósido,
  son eficaces antioxidantes.

30
Moléculas con actividad antioxidante
Flavonoides
31
Investigación de plantascon actividad
antioxidante
32
OBTENCION DEL MATERIAL VEGETAL(MV)
El MV que serà utilizado para la
investigación se debe recolectar de acuerdo con
cada especie, la época de recolección, la parte
que es utilizada, la naturaleza, cantidad y tipo
de principio activo, los mismos que varían
considerablemente de acuerdo a la familia, género
y especie de cada planta medicinal y se debe
proceder de forma rigurosa a su correcta
identificación, posterior preservación,
conservación y preparación.
33
Plantas peruanas nativas e introducidas evaluadas
34
EXTRACCION DEL MATERIAL VEGETAL

• Una vez seleccionada y recolectada la especie que
  se quiere estudiar se dispondra de una cantidad
  apropiada de material vegetal seco que puede
  triturarse en mayor o menor grado,según el caso y
  posteriormente someterse a la acción del
  disolvente oportuno en las condiciones y con la
  duración adecuadas para conseguir la extracción
  más completa posible de las sustancias activas
  en el MV.

35
SCREENING FITOQUIMICO

• El objetivo de la primera extracción se centra en
  la obtención de una pequeña porción de extracto,
  en cantidad suficiente que permita por un lado,
  la realización de los bioensayos preliminares
  programados , encaminados a demostrar la
  presencia de sustancias bioactivas en él y por
  otro disponer de materia para obtener
  cromatogramas (CF) en diversas condiciones de
  elución, espectros de infrarojo(IR) y de
  Resonancia Magnetica Nuclear de protón (RMN), que
  sirvan para caracterizar suficientemente el
  extracto y proporcionar información sobre su
  probable composición.
• Manual de Técnicas Experimentales . Proyecto
  X.10 . CYTED

36
CARACTERIZACION PRELIMINAR DE LOS EXTRACTOS
Para conseguir el aislamiento y purificaciòn
de los principios activos , se recomienda
utilizar algunas técnicas fisicoquímicas e
instrumentales que puedan informar sobre la
naturaleza y composición de los extractos y
fracciones que se estén analizando y puedan
permitir detectar la presencia de algunos tipos
de metabolitos, alcaloides, flavonoide,
esteroides, saponinas. Como herramienta
fitoquímica se utiliza un conjunto de técnicas
muy bien establecidas, que están basadas en
reacciones coloreadas, selectivas o específicas y
que mediante reactivos de diverso tipo, aplicados
generalmente de forma directa sobre el extracto o
sus fracciones o sobre placas cromatográficas
desarrolladas, proporcionan información sobre la
presencia de distintos grupos de
metabolitos. Manual de Técnicas Experimentales
.
37
OXIDACION DE MOLECULAS BIOLOGICAS
Otro grupo de herramientas muy útiles se
basan en la aplicación de técnicas
espectróscopicas generalmente disponible.
Es conveniente obtener espectros IR (neto) y
RMN1H (Preferentemente en CDCl3 o DMSO-d6) del
extracto o la fracción, para tratar de detectar y
estimar particularmente la presencia y la
proporción de componentes lineales y otros tipos
de metabolitos secundarios definidos.
38
CARACTERIZACION PRELIMINAR DE LOS EXTRACTOS
La estimación de la presencia de componentes
lineales se consigue directamente mediante
observación simple de la intensidad y proporción
de las absorciones hacia 720 cm-1(IR) y 1,25 ppm
(RMN 1H). La estimación de componentes
funcionalizados se puede llevar a cabo tambien
mediante la observación del espectro de IR, a
través de las absorvaciones que aparezcan en las
regiones de 3,500-3000 cm-1(funciones NH y OH,
olefinas y sistemas aromáticos), 1800-1500 cm-1
(carbonilos, carboxilos e insaturaciones ) y
1100-800 cm-1 (éteres e insaturaciones)
complementandola con la observación del espectro
de RMN1H , en las zonas 13-8 ppm (H puente,
aldehidos, amidas), 8-6 ppm (aromáticos y
olefínicos conjugados)), 6-3 ppm (olefínicos,
alcoholes, ésteres, grupos metoxilo, azúcares) y
3-0,5 (metilos) ppm. Manual de Técnicas
Experimentales . Proyecto X.10 . CYTED (pag 37)
39
VALIDACION EXPERIMENTAL

• Tamizaje In vitro (céluas , órganos aislados)
• / In vivo preclínica (animales) y
  clínica (humanos) antiinflamatoria, antitumoral,
  antiviral espasmolítica, analgésica, diurética,
  hipoglicémica, sedante, antioxidante,
  antiinfecciosa, cicatrizante, etc.
• Extracción fraccionada ( gt ó lt polaridad)
• Fraccionamiento dirigido.
• Elucidación estructural a) Universidad de
  Salamanca.
• (Departamento de Química
  Farmacéutica
• Dr. Arturo San Feliciano)
• b)
  Universidad Autónoma de Mexico
• (Instituto de Química. Dr.
  Ricardo Reyes Chilpa).

40
Plantas con acciónantioxidante
41

• Aunque el rutósido es relativamente
  frecuente en la naturaleza, solo un pequeño
  número de plantas lo contienen en cantidad
  suficiente para permitir su extracción
  industrial.
• Se obtiene fundamentalmente a partir de la
  sófora (Sophora japonica L., Fabaceae), el trigo
  sarraceno (Fagopyrum esculentum Moench.,
  Fagopyrum tataricum L. Gaertn., Polygonaceae),
  Eucalyptus macrorrhyncha F. Muell., (Myrtaceae),
  y Dimorphandra spp. (Caesalpinaceae).
• Por su contenido en flavonoides, la hoja de
  ginkgo (Ginkgo biloba, Ginkgoaceae) , también
  llamado árbol de los cuarenta escudos, es un
  excelente captador de radicales libres, lo que
  explica sus propiedades antioxidantes.

Ginkgo biloba.
42

• Otras plantas utilizadas como antioxidantes en
  productos cosméticos por su contenido en
  flavonoides son la manzanilla (Chamomilla
  recutita L. Rauschert, Asteraceae), la
  caléndula (Calendula officinalis L., Asteraceae)
  y el lúpulo (Humulus lupulus, Cannabaceae), si
  bien también se emplean flavonoides puros, como
  el hesperidósido y el rutósido.
• En el caso de la vid roja (Vitis vinifera
  L., Vitaceae)su utilización como antioxidante en
  la industria de los cosméticos se debe a la
  presencia de proantocianidoles.

Vitis vinifera.
43

• Los flavanolignanos presentes en el fruto del
  cardo María (Silybum marianum L. Gaertn.,
  Asteraceae) inhiben la peroxidación lipídica de
  la membrana y actúan como captadores de radicales
  libres.
• El principio activo mayoritario se conoce como
  silimarina, y está constituido por una mezcla de
  silibina, silicristina y silidianina.

Silibina, silicristina, silidianina
44
OTROS PRODUCTOS CON ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE

• Las ceramidas (esfingosinas N-aciladas por un
  ácido graso) y glicosilceramidas del trigo y del
  arroz, que constituyen una alternativa de las
  ceramidas animales la industria cosmética las
  utiliza por su posible capacidad en la prevención
  o atenuación del envejecimiento cutáneo.
• Los ácidos grasos insaturados (aceites). Como
  ejemplo podemos citar el aceite de sésamo
  (semillas de Sesamum indicum, Pedaliaceae), el
  aceite de maíz (estigmas de Zea mays L.,
  Gramineae), aceite de oliva (frutos de Olea
  europaea, Oleaceae) y aceite de cacahuete
  (semillas de Arachis hypogaea, Leguminosae).

45
Efecto antioxidante del hidroxitirosol
procedente de la hoja de olivo (Olea europaea L)

• El hidroxitirosol(2-(3,4-dihidroxifenil)etanol)
  es un compuesto fenólico presente en la hoja del
  olivo en forma libre y esterificada y que destaca
  del resto de polifenoles por sus múltiples
  actividades farmacológicas como antimicrobiano
  con actividad in vitro frente a bacterias gram
  y gram -, inhibidor de la formación del
  leucotrieno B4 a nivel de la 5-lipooxigenasa
  implicadas en el proceso antiinflamatorio e
  inductor de apoptosis en células HL-60. La
  actividad antioxidante del hidroxitirosol es una
  de las más elevadas entre los polifenoles, siendo
  incluso superior a la de la Vitamina E.
• 
  P. de la Fuente, P Chamorro, M. Moreno.
  M.A Poza.
• 
  Revista de Fitoterapia
  20044(2)PI-PF 139,140

46
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE ANTI-ESTRES DE MACA
47
EVALUACIÓN DE LA CAPACIDAD ANTIOXIDANTE DE
PLANTAS MEDICINALES PERUANAS NATIVAS E
INTRODUCIDAS.Dr. Castañeda C. B.1, Q.F. Ramos
LL. E. 2, Dra. Ibáñez V. L. 3

• RESUMEN
• Se evaluó la capacidad antioxidante de
  veintinueve extractos de las siguientes plantas
  medicinales Cinnamomum zeylanicum canela,
  Calophyllum brasiliense lagarto caspi,
  Myrciaria dubia camu camu, Minthostachys mollis
  muña, Alchornea castaneifolia hiporuro,
  Smallanthus sonchifolius yacón, Lepidium
  peruvianum y Lepidium meyenii maca, por el
  método de la decoloración del radical
  2,2-difenil-1-picrilhidrazilo (DPPH).
• Los resultados obtenidos al evaluar la
  capacidad antioxidante a las concentraciones de
  1 ug/mL, 50 ug/mL, 100 ug/mL y 200 ug/mL fueron
  canela (Extracto etanólico de la corteza) 97.59
  a una concentración de 1 ug/mL, lagarto caspi
  (E. Metanólico de hojas) 99.76 a 50 ug/mL, camu
  camu (E. Metanólico del fruto) 98.09 a 50 ug/mL,
  muña (E. Acuoso de hojas) 92.41 a 50 ug/mL,
  hiporuro (E. Metanólico de hojas) 100.57 a 100
  ug/mL, Lagarto (E. Acuoso de hojas) 110.56 a 100
  ug/mL, Lepidium peruvianum (E. Acuoso de
  hipocótilo) 95.55 a 200 ug/mL y Lepidium meyenii
  (E. Metanólico de hipocótilo) 88.21 a 200 ug/mL,
  en comparación con el al ácido ascórbico
  (Vitamina C) que presentó una actividad
  antioxidante en promedio de 92.82.

48
DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE POR
EL METODO DEL DPPH
El Fundamento del método desarrollado por
Brand-Willams et al , DPPH, consiste en que este
radical tiene un electrón desapareado y es de
color azul-violeta, decolorándose hacia amarillo
pálido por la reacción de la presencia de una
sustancia antioxidante siendo medida la
absorbancia espectrofotométricamente a 517 nm.
La diferencia de absorbancias permite obtener
el porcentaje de captación de los radicales
libres .
199 3.0
49
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE

• Procedimiento
• 1. Se preparó 100 ml una solución de DPPH
  (2,2-difenil-1-picril hidrazilo) en metanol
• de 20 mg/L.
• 2. Luego se preparó una solución metanólica de
  los extractos en una concentración de
• 300 ug/ml (Solución A) y de
  600 ug/mL (Solución D)
• 3. El Blanco se preparó con metanol agua 21
  para ajustar el espectrofotómetro a
• cero.
• 4. El Blanco de muestra se preparó con 0.75 mL de
  muestra (solución A) y 1.5 mL de
• metanol.
• 5. Se preparó el patrón de referencia con 1.5 mL
  de DPPH y 0.75 mL de agua.
• 6. Luego se procedió a preparar la muestra con
  0.75 mL de solución A y 1.5 mL de
• DPPH, obteniéndose una
  concentración final de 100 ug/mL, dejándose x 5
  min. Y se
• leyó a 517 nm en un
  espectrofotómetro.
• 7. Se midió la absorbancia del patrón de
  referencia y del blanco de la muestra.
• 8. Luego se diluyó la solución A con metanol en
  una proporción 12 (solución B) para
• obtener una concentración
  final de 50 ug/mL, y en una proporción de 110
  (solución
• C) para obtener una
  concentración final de 1 ug/mL.
• 9. Con las soluciones B, C y D se procedió igual
  a los puntos 6 y 7.

50
(No Transcript)
51

• Los extractos fueron evaluados por triplicado a
  diferentes concentraciones de 1, 25, 50, 100 y
  200 ug/mL utilizando como fármaco control,
  vitamina C.
• Posteriormente con los valores de las
  absorbancias obtenidas se determinó el de
  captación de radicales libres (DPPH) mediante la
  siguiente formula
• Capacidad Antioxidante 1 (A2
  A3) / A1 x 100
• Captación de Radical Libre
• Donde
• A1 Absorbancia del patrón de referencia
• A2 Absorbancia de la muestra
• A3 Absorbancia del blanco de muestra

52
Preparación de soluciones antioxidantes
53
Medición de absorbancias de las soluciones en el
Espectrofotómetro
54
Tabla 1. Capacidad Antioxidante por el método del
DPPH
MUESTRA Extracto CAPTACION DE RADICAL LIBRE (R.L.)
MUESTRA Extracto CAPTACION DE RADICAL LIBRE (R.L.)
VITAMINA C (Control )(Acido Ascórbico)  ----- 92,82
Canela, corteza(Cinnamomum zeylanicum) 10 Etanol 97.59 a
Lagarto, hoja(Calophyllum brasiliense) 20 Metanol 99.76 b
Camu- camu, fruto(Myrciaria dubia) 10 Metanol 98.09 b
Muña, hoja(Minthostachys mollis) 10 Acuoso 92.41 b
Hiporuro, hoja(Alchornea castaneifolia) 10 Metanol 75.96 b
Lagarto, hoja(Calophyllum brasiliense) 10 Acuoso 110.56 c
Yacón, hoja(Smallanthus sonchifolius) 10 Etanol 103.19 d
MACA KOKEN, hipocótilo (Lepidium peruvianum) 10 Acuoso 95.55 d
MACA AMAZON, hipocótilo(Lepidium meyenii) 10 Metanol 88.21 d

a 1 ug/mL, b 50 ug/mL c 100 ug/ mL d 200 ug/
mL
55
Porcentaje de Captación de Radical Libre x DPPH
56
AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE PRINCIPIOS
ACTIVOS DE PLANTAS CON ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
57
LAGARTO CASPI , CALOPHYLLUM BRASILIENSE
UNIVERSIDAD DE SALAMANCA
(ESPAÑA)
58
LAGARTO CASPI , CALOPHYLLUM BRASILIENSE
UNIVERSIDAD DE SALAMANCA
(ESPAÑA)
59
LAGARTO CASPI , CALOPHYLLUM BRASILIENSE
UNIVERSIDAD DE SALAMANCA
(ESPAÑA)
60
Lepidium peruvianum Ch. MACA
UNIVERSIDAD DE SALAMANCA
(ESPAÑA)
61
Lepidium peruvianum Ch. MACA
UNIVERSIDAD DE SALAMANCA
(ESPAÑA)
62
(No Transcript)
63
(No Transcript)
64
MUCHAS GRACIAS

• http//www.usal.es
• (BECAS INTERNACIONALES)
• Dra. Lucy A. Ibáñez Vásquez
• lu_cy1964_at_yahoo.com
• libanezv_at_hotmail.com

199 3.0