ADIAPURE MILK PARATB Dtection de Mycobacterium avium subsp' Paratuberculosis dans le lait

1
ADIAPURE MILK PARATBDétection deMycobacterium
avium subsp. Paratuberculosis dans le lait
Dr Béatrice BLANCHARD
2
ADIAPURE MILK PARA TB
Billes magnétiques
Billes de broyage Ref ADPBI1
Tampons de lyse L0, L1 and L2
3
Protocole
10 ml de lait infecté
Capture avec billes magnétiques
Amplification et lecture
Aimantation
Lyse
Extraction dADN par broyage
La PCR peut détecter des laits infectés par 80
bactéries/ml
4
Infection dun lait négatif avec une suspension
de fèces
Choix du lait négatif Fourni par le
laboratoire du Dr Philipp Hammer Federal Dairy
Research Center - Kiel (Germany) Lait de tank (75
vaches) Elevage protégé depuis 1993 Aucun cas de
paratubercuulose Séronégatif Prélèvements
régulièrement effectués à labattoir sur
intestins et nodules lymphoïdes
5
Infection dun lait négatif avec une suspension
de fèces
Choix du fèces positif Echantillon de fèces
positif pour MAP fourni par Dr Jan RADEMAKER Nizo
Food Research Ede (Netherlands) Titre estimé à
106,5 copies de MAP / g de fèces
6
Infection dun lait négatif avec une suspension
de fèces
Solution S0 de base 1g de fèces (5. 106
bactéries ) 5ml deau Dilutions sériées dans
du lait pour obtenir des solutions à 0
bactérie / ml de lait 0,3 bactéries /ml de lait 3
bactéries /ml de lait 30 bactéries /ml lait 300
bactéries /ml lait Chaque infection a été
répétée 4 fois. Extraction et amplification par
PCR classique et PCR temps réel pour définitir
le seuil de détection.
7
Résultats
8
Conclusion
Nous avons développé un protocole pour la capture
de MAP dans le lait. En combinaison avec les
kits PCR Adiavet ParaTB classique et realtime, le
seuil de détection est 3 bactéries /ml
déchantillon de lait.