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CBP est un co-Facteur de p53
Stress Cellulaire
Gènes Arrêt Cycle
Gènes Apoptotiques
CBP
p53
Etc..
Ouverture
Ouverture de la Chromatine Des Gènes de Réponse à
p53
Gu W. Nature (1997) 387, 819 - 823
10
Régulation de p53 par Acétylation/Déacétylation
LAcétylation Régule la Liaison à lADN
p53
Stress
Acétylation CBP Activation
DéAcétylation Sirt1 Inhibition
Pol
p53
p21waf1
Bax, Puma
p53
Arrêt Du Cycle
Apoptose
Lys 382 Lys 320
CBP
Sirt1
11
p53 et Arrêt du Cycle Cellulaire
Stress Mutations Oncogènes
Activation de la Protéine p53
?
?
Sénescence
Apoptose
Sénescence
PROTECTION
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?
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Contrôle de la Transformation Cellulaire Le
Système p53-p19ARF
p53/p19ARF Contrôle le Développement Oncogénique
I. Les Oncogène Induisent la Sénescence L Oncogè
ne ras ras Bloque le Cycle Cellulaire et Induit
la Sénéscence L Effet de ras ne s Observe plus
en p53-/- c-myc Induit la Sénéscence si p53 est
Présent

II. La Protéine p19ARF p16 INK4, Gène
Suppresseur de Tumeur? Le Locus INK4/ARF p19ARF
est un Gène Suppresseur de Tumeur p19ARF Dégrade
mdm2 et Active p53
III. Activation de p19ARF par les
Oncogènes c-myc est un Oncogène si ARF est
Inactivé ras est un Oncogène si ARF est Inactivé
E2F Active p19ARF? II. Le Modèle de
Tranformation Humain, Les Télomères
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p53, Surveillance Tumorale Et Cassure de lADN
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(sénescence)
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35
Régulation de l Ubiquitination de p53 par mdm2
(UbcH5 est une des enzymes d ubiquitination)
EMBO Journal (1999) 18, 2227
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38
D Autres Fonctions pour ARF ?
ARF est Localisé dans le Nucléole
Nature Cell Biology  1, 20 - 26 (1999)
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ARF Séquestre mdm2 dans le Nucléole
Noyau
Nucléole
ARF
ARF
mdm2
mdm2
Pol
p53
p21waf1
Bax, Puma
Apoptose
Arrêt Du Cycle
Nature Cell Biology  1, 20 - 26 (1999)
40
Rappel Les Différents Types d ARN Ribosomiaux
Maturation
41
D Autres Fonctions pour ARF ?
p19ARF Inhibe le Processing des ARN Ribosomiaux
Mol Cell November 2003 11 (2) 415
42
Régulation de lExpression des ARNs Ribosomiaux
par ARF
ARF
p53
Ribosome ?
Les Fonctions Sont Indépendantes de p53
43
Quel Mécanisme ?
IP De la Protéine
Gel Acrylamide Coloration Nitrate dArgent
Excision de la Bande, Digestion
Spectrométrie de Masse
Mol Cell November 200312(5) 1151-1164
44
Analyse des peptides
4148.1061 3221.5113 3392.5756 2993.3522 2468.2415
2325.0207 2144.9770 1948.9585 2005.9800 1906.8817
1883.0497 1721.7765 1618.7577 1732.8006 1508.7889
1288.7259 1134.6742 1008.5360 1008.5295 1065.5509
950.4499 1007.4714 880.4159 832.3658 792.3709 759.
4247 715.4348
Cartographie massique par MALDI-TOF
La carte massique obtenue est lempreinte
massique de la protéine. Elle est très spécifique.
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Interrogation des banques de données
Liste de masses expérimentale
Sélection de la protéine la plus probable.
Comparaison avec tous les profils théoriques
des séquences de protéines connues présentes dans
les banques
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Un Nouveau Partenaire, la Protéine B23
B23
Mol Cell November 2003 12(5) 1151-1164
47
Le Mécanisme de lARN Interférence
ARN Double Brin
Clivage du Double Brin par Dicer
Génération dun Petit ARN Interférant (siRNA)
Génération dun ARN Simple Brin Au Sein du RISC
et Ciblage par le siRNA (hybridation) Vers lARN
cible à Dégrader
48
Régulation de lExpression des ARNs Ribosomiaux
par ARF
ARF
B23 Est Nécéssaire à la Synthèse Des ARNs
Ribosomiaux
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Régulation de lExpression de B23 par ARF
Western Blot
Votre Conclusion ?
Northern Blot
Mol Cell November 200312(5) 1151-1164
50
Régulation de la Stabilité de B23 par ARF
Pulse Chase Methionine S35 1h
IP
Suivi du Marquage Radioactif de la Protéine
Mol Cell November 2003 12(5) 1151-1164
51
Ubiquitination de B23 par ARF
MG132 Inhibiteur du Protéasome
Mol Cell November 2003 12(5) 1151-1164
52
Résumé des Fonctions de ARF
ARF
Stress
Dégradation mdm2
Séquestration Mdm2 Nucléole
Dégradation B23
Pol
p53
Blocage Assemblage Ribosome Synthèse Protéique
p21waf1
Bax, Puma
Apoptose
Arrêt Du Cycle
53
(No Transcript)
54
(No Transcript)
55
(No Transcript)
56
Régulation de ARF par E2F
ChIP
Votre Conclusion ?
Western Blot
GENES DEVELOPMENT 181413-1422, 2004
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(No Transcript)
59
Cyclines/cdk E2F
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(No Transcript)
65
Oncogènes et Arrêt du Cycle Cellulaire
Stress Mutations Oncogènes
Activation de la Protéine p53
?
?
Sénescence
Apoptose
Sénescence
PROTECTION
66
(No Transcript)
67
L Erosion des Chromosomes Induit l Apparition
de Cassures de l ADN et la Fusion des Chromosomes
68
La Télomérase chez lHomme
La Télomérase est Constituée dune partie
Protéique, hTERT, et dun brin dARN, hTR, qui
sert de matrice pour la synthèse des répétitions
Ajout de TTAGGG
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(No Transcript)
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(No Transcript)
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73
La Sénescence Réplicative
Erosion des Télomères
Démasquage Cassures ADN ?
Sénescence Réplicative
Annual Review of Biochemistry Vol. 73 177-208
(July 2004)
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La Télomérase chez lHomme
La Télomérase est Constituée dune partie
Protéique, hTERT, et dun brin dARN, hTR, qui
sert de matrice pour la synthèse des répétitions
Ajout de TTAGGG
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Le Complexe Shelterin
Un Complexe de Six Protéines S Associe avec les
Séquences TTAGGG pour Protéger l Extrémité des
Chromosomes TRF1, TRF2, Pot1 TINN2, TPP1, Rap1
Titia de Lange, Genes And Dev. (2005) 192100
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Le Complexe Shelterin
Domaine Myb/Sant qui Permet À TRF1, TRF2 et
Rap1 D Interagir avec les Séquences TTAGGG
Un Complexe de Six Protéines S Associe avec les
Séquences TTAGGG pour Protéger l Extrémité des
Chromosomes TRF1, TRF2, Pot1 TINN2, TPP1, Rap1
Titia de Lange, Genes And Dev. (2005) 192100
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Le Mécanisme de Protection
1. Formation d une Boucle 2. Invasion du Double
Brin
Titia de Lange, Genes And Dev. (2005) 192100
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La Sénescence Réplicative
Htert est absente de cellules du stroma et par
conséquent on a une érosion de 100/150 paires de
bases a chaque division
Erosion des Télomères
Démasquage Cassures ADN ?
Sénescence Réplicative
Annual Review of Biochemistry Vol. 73 177-208
(July 2004)
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Télomères et Cassure de l ADN
80
Deux Types de Sénescence ?
p53
Stress
Télomères
Pol
p53
p21waf1
Bax, Puma
Sénescence Réplicative
Apoptose
Arrêt Du Cycle Sénescence  Oncogénique