Plateforme de Criblage de Marseille Luminy

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Plateforme de Criblage de
Marseille Luminy

• De linhibiteur de complexes de réplication
  viraux à lantiviral

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Virus Virus émergents Nouveaux
virus Nouvelle émergence
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Virus Virus émergents Nouveaux
virus SARS.. Nouvelles émergences Chikungu
nya, Dengue, West Nile
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Problèmes de santé publique, si pathogène chez
lhumain - pas de vaccins - pas de
chimiothérapie
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Problèmes de santé publique, si pathogène chez
lhumain - pas de vaccins - pas de
chimiothérapie
Problèmes de santé publique, si pathogène chez
lhumain - pas de vaccins - pas de
chimiothérapie
Problèmes de santé publique, si pathogène chez
lhumain - pas de vaccins - pas de
chimiothérapie
Réponse I- Génomique Virale expression
et production à haut débit de protéines
virales, détermination de la structure
3D (SPINE, VIZIER, EVA)
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Available structures for crystal soaking
Arenavirus PAR V1
WN polymerase 2
100 mm
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Problèmes de santé publique, si pathogène chez
lhumain - pas de vaccins - pas de
chimiothérapie
Problèmes de santé publique, si pathogène chez
lhumain - pas de vaccins - pas de
chimiothérapie
Problèmes de santé publique, si pathogène chez
lhumain - pas de vaccins - pas de
chimiothérapie
Réponse I- Génomique Virale expression
et production à haut débit de protéines
virales, détermination de la structure 3D II -
Criblage et caractérisation dinhibiteurs.
- Etude et inhibition dinteractions
protéine/protéine.
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Problèmes de santé publique, si pathogène chez
lhumain - pas de vaccins - pas de
chimiothérapie
Problèmes de santé publique, si pathogène chez
lhumain - pas de vaccins - pas de
chimiothérapie
Problèmes de santé publique, si pathogène chez
lhumain - pas de vaccins - pas de
chimiothérapie un exemple le virus de
la Dengue
Réponse I- Génomique Virale expression
et production à haut débit de protéines
virales, détermination de la structure 3D II -
Criblage et caractérisation dinhibiteurs.
- Etude et inhibition dinteractions
protéine/protéine.
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Le virus de la dengue dans le monde
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Le virus de la dengue dans le monde
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Le virus de la dengue dans le monde
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La recherche contre le virus de la dengue
1999
2002
2007
3D pol Dengue, Yap et al.
3D pol (WN), Malet et al.
3D Mtase, Egloff et al.
3D Envelope, Kuhn RJ et al.
3D Protéase, Murthy et al.
Activité polymérase, You et al.
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La recherche contre le virus de la dengue
1999
2002
2007
2004
3D pol Dengue, Yap et al.
3D pol (WN), Malet et al.
Plateforme
Département virologie AFMB
3D Mtase, Egloff et al.
3D Envelope, Kuhn RJ et al.
3D Protéase, Murthy et al.
Activité polymérase, You et al.
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Lhistorique de la plateforme
Ecoles de criblage
Strasbourg
Toulouse
Autrans
Roscoff
2002
2004
2006
2008
2010
Marseille

• Financements
• Conseil régional PACA
• ARC
• BQR

Débuts dune activité criblage
- Espace criblage - Achat des robots

• ANR  Dengue 
• Contrats pharma/criblage

CRVOI
Label IBISA
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Une cible privilégiée la polymérase.
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La structure 3D de la polymérase
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Les chimiothèques

• - Prestwick - 880 composés
• Institut Curie - 7680 composés
• - Strasbourg UMR 7081 - 4800 composés
• Institut de Chimie des substances naturelles de
  Gif - 2720 produits de synthèse et 5300 extraits
  de substances naturelles
• Caen- 400 composés
• NCI - (Diversity) 1981 composés
• Chimiothèque  maison  - 50 composés
• Chembridge 30 000 composés

Total /- 50 000 composés
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Stockage des composés

• 80 composés par plaque de 96 puits
• Plaques identifiées par code barre

? Stockage à - 20 C, 100 DMSO

• Système de dilution
• plaque mère ----gt plaque fille ----gt plaque
  expérience

• 1 campagne de criblage  semi-automatisée  6
  plaques
• 1000 composés par jour

4 contrôles bruit de fond
8 contrôles positifs (réaction sans inhibiteur)
2 contrôles négatifs inhibiteur de référence
(3-dGTP)
2 contrôles négatifs EDTA (inhibition de la
réaction enzymatique)
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Plateforme de criblage
Chimiothèques
Base de données
Test Criblage
Résultats bruts
Robotique
Lecture

• Traitement des résultats
• détermination inhibition
• détermination IC50

Scintillation Fluorescence
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La campagne de criblage 1- Criblage Iaire
50µM 2- Criblage IIaire 10µM, triplicate 3-
Obtention des poudres 4- Criblage validation
10µM, triplicate 5- Détermination des IC50
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La campagne de criblage 1- Criblage Iaire
50µM 2- Criblage IIaire 10µM, triplicate 3-
Obtention des poudres 4- Criblage validation
10µM, triplicate 5- Détermination des IC50
SAR Chimie
Réplicon TC50
Isolats cliniques
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Exemple de résultats
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PCML HTS selected hit
IC50 11 µM
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Les activités de la plateforme

• Criblages dinhibiteurs denzymes
• Criblages de chimiothèques sur  nos  enzymes
• Mise en place dessais HTS

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Les activités de la plateforme

• Criblages dinhibiteurs denzymes
• Criblages de chimiothèques sur  nos  enzymes
• Mise en place dessais HTS
• Criblages dinhibiteurs dinteractions de
  protéines
• Formatage et fournitures de chimiothèques
• Distribution de chimiothèques
• Fournitures de chimiothèques ciblées
• Synthèses de chimiothèques ciblées et études SAR
• Criblages in cellulo, détermination TC50
• -Criblage contre isolats cliniques (UVE)

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La Plateforme de Criblage de Marseille-Luminy AFMB
, UMR6098 et UVE, La Timone

• Responsable JC Guillemot,Pr U2-ESIL
• Conseil Scientifique
• K. Alvarez, CR CNRS, Chimie
• B. Canard, DR CNRS, Directeur du département
  virologie AFMB
• JC Guillemot.
• JL Romette, Pr U2 ESIL, responsable valorisation
• UVE X. de Lamballerie, R. Charrel.
• B. Selisko, IR-CDD
• M. Blemont AI-CDD

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Ecoles de criblage
Marseille
Strasbourg
Toulouse
Autrans
Roscoff
2002
2004
2006
2008
2010
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Ecoles de criblage
Marseille
Strasbourg
Toulouse
Autrans
Roscoff
2002
2004
2006
2008
2010
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Merci Stéphane Bach Cyril Couturier Marc
Blondel Laurent Meijer
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(No Transcript)