Diapositive 1

1
Approches neurochimiques in vitro - ex vivo -
in vivo Pourquoi la libération et pas
 simplement  lélectrophysiologie ? Une
augmentation de lactivité électrique du neurone
est-elle liée à une augmentation de la libération
du neurotransmetteur ? Une diminution de
lactivité électrique du neurone est-elle liée à
une diminution de la libération ?
2
Ex vivo Mesure, après sacrifice de lanimal, des
niveaux des métabolites et du neurotransmetteur Le
s index  neurotransmetteurs/métabolites
renouvellement In vitro perfusion/échantillonnag
e ou échantillonnage

• In vivo
• Push-pull canula
• Voltamétrie
• Microdialyse intracérébrale
• Bio-senseur (à létude)
• PET-scan (primates sub-humain et humain)

3
Voltammétrie
4
Push-Pull cannula
Fig. 1.   Inner delivery cannula (A) and outer
guide cannula (B). The inner delivery cannula has
an inner diameter of 0.1 mm and an outer diameter
of 0.2 mm. The outer guide cannula has an inner
diameter of 0.29 mm and an outer diameter of
0.56 mm.
5
(No Transcript)
6
Joint-tournant
Pousse-seringue
Cellules photo-électriques (mesures
comportementales)
7
Fig. 1.   Neuropeptide Y (NPY) release in
paraventricular nucleus (PVN mean  SE) in 12-h
food-deprived (FD) and refed Long-Evans rats ( ).
A subgroup was infused with 55 mM KCl after
refeeding ( ). Baseline release was measured in
ad libitum (ad lib)-fed rats ( ).
8
Enregistrements extracellulaires protocole
expérimental
électrode denregistrement en verre 4-7 Megaohms

Striatum
NAc
SNc
ATV
Dr Esposito, E., Consorzio Mario Negri Sud,
Chieti, Italie
9
Microdialyse Intracérébrale protocole expérimental
Pompes de Perfusion 2 µl/l

• Ringer de perfusion
• 1.2 mM Ca2
• 1 mM Mg2
• 154.1 mM Cl-
• 2.7 mM K
• 147 mM Na

Canule de Microdialyse
Striatum
NAc
SNc
ATV
10
Libération exocytotique

• Libération basale de dopamine (DA)
• 12 pg/30ul striatum
• 6 pg/30ul noyau accumbens- 1 pg/30ul cortex
  préfrontal

120
100
80
DA ( de la libération basale)
60
40
témoins
20
0
-30
0
30
60
90
120
150
Temps (min)
11
400
témoins

• Ringer de perfusion
• 1.2 mM Ca2
• 1 mM Mg2
• 154.1 mM Cl-
• 2.7 mM K
• 147 mM Na

300
DA ( de la libération basale)
200
100
0
-30
0
30
60
90
120
150
Temps (min)
12
K
400
K (30 mM)
300
DA ( de la libération basale)
200
100
0
-30
0
30
60
90
120
Temps (min)
13
Blocage de linflux nerveux par la tétrodotoxine
(TTX)
120
100
80
DA ( de la libération basale)
60
TTX
40
témoins
20
0
-30
0
30
60
90
120
150
Temps (min)
14
Régulation tonique de lactivité électrique des
neurones DA par les récepteurs D2
SNc
Substance Noire compacte
Aire Tegmentale Ventrale
Fréquence de décharge des neurones
dopaminergiques suite à ladministration i.v. de
doses cumulées dhalopéridol
Fréquence de décharge des neurones
dopaminergiques suite à ladministration i.v.. de
doses cumulées dhalopéridol


HAL




change in rate

change in rate
Dose cumulée (µg / kg)
Dose cumulée (µg / kg)
15
(No Transcript)
16
Régulation de lactivité des neurones
dopaminergiques par les autorécepteurs D2
17
Mécanisme daction de drogues dabus
1- morphine
2- cocaïne
3- amphétamine
18
Mécanisme daction de drogues dabus
1- morphine
2- cocaïne
3- amphétamine
19
(No Transcript)
20
Effet dun agoniste des récepteurs opiacés µ, la
morphine, sur lactivité électrique des neurones
DA
Aire Tegmentale Ventrale
Substance Noire compacte
Fréquence de décharge des neurones
dopaminergiques suite à ladministration i.v. de
doses cumulées de morphine
Fréquence de décharge des neurones
dopaminergiques suite à ladministration i.v. de
doses cumulées de morphine





0.1
1
10
Dose cumulée (µg / kg)
Dose cumulée (µg / kg)
21
ATV
Cellule principale
NAc
GABA
DA
Agoniste DOR
Cellule secondaire
22
Mécanisme daction de drogues dabus
1- morphine
2- cocaïne
3- amphétamine
23
Effet de la cocaïne (i.p.) sur la libération de
DOPAMINE
Cocaine 3
24
Effet de la cocaïne (i.v.) sur lactivité des
neurones DA
25
GBR Inhibiteur recapture DA
APO Agoniste R. DA
NOM Inhibiteur recapture DA
26
Réserpine cocaïne
Cocaïne
Réserpine déplétion des monoamines
27
Pre-synaptic
DAT
DA
R. DA
R. DA
R. DA
R. DA
Post-synaptic
28
Mécanisme daction de drogues dabus
1- morphine
2- cocaïne
3- amphétamine
29
(No Transcript)
30
(No Transcript)
31
Pre-synaptic
DAT
DA
R. DA
R. DA
R. DA
R. DA
Post-synaptic