Title: Laboratorio di Microbiologia
1- Laboratorio di Microbiologia
- Aspetti microbiologici nella sepsi
- dalla raccolta dei campioni alla corretta
interpretazione dei risultati - 7 Novembre 2005 dott.ssa Claudia Venturelli
2(No Transcript)
3Batteriemie e sindromi settiche
- 842 episodi di batteriemia
- Gram positivi (n47355) sepsi
sepsi severa - S.aureus
19,3 19,8
- S.coagulasi T
11,2 6 - Enterococchi
5,5 3,6 - Gram negativi (n40745)
- E.coli
28,1 22,6 - Klebsiella spp
3,4 5,2 - Enterobacter, Citrobacter spp
2,5 4,4 - Ps.aeruginosa
2,7 5,6 - Acinetobacter spp
0,6 2 - Candida ed altri miceti
1,2 2,4
Brun-Buisson C
4- Gram-negative bacteria account for about 60 of
cases, Gram-positive for the remainder - The commonest sites of infection are the lungs,
abdominal cavity, the urinary tract and primary
infections of the blood stream. - A microbiological diagnosis is made in about half
the cases - Nature 420, 885 - 891 (19 December 2002)
doi10.1038/nature01326 ltgt The
immunopathogenesis of sepsis JONATHANÂ COHEN
5- Gram-negative septic shock comprende la metà dei
casi totali di sepsi, 115,000 morti/ anno. E il
gruppo di batteri che causano il maggior numero
di morti per sepsi (30-50). - Gram-positive septic shock lincremento di casi
di shock settico da gram-positivi è dovuto
allaumento di polmoniti per batteri gram
positivi e alluso di dispositivi intravascolari.
La metà dei casi di sepsi è da attribuirsi a
gram-positivi.
6- Nosocomial, late onset sepsis occurs in up to
50 of infants of less than 1000gm at birth. The
commonest organism isolated is coagulase negative
staphylococcus (CoNS). - The Cochrane Libary, Issue 4, 2001.
- The microorganisms most commonly associated with
early-onset infection include group B
Streptococcus (GBS), Escherichia coli,
Haemophilus influenzae, and Listeria
monocytogenes - Organisms that have been implicated in causing
late-onset sepsis syndrome include
coagulase-negative staphylococci, Staphylococcus
aureus, E coli, Klebsiella, Pseudomonas,
Enterobacter, Candida, GBS, Serratia,
Acinetobacter, and anaerobes. - Neonatal Sepsis June 23, 2004 Author Linda L
Bellig, RN, NNP, Neonatal Nurse Practitioner
Program, Medical University of South Carolina,
College of Nursing
7(No Transcript)
8(No Transcript)
9(No Transcript)
10(No Transcript)
11Policlinico di Modena Nido-Neonatologia
12(No Transcript)
13Policlinico di Modena Nido-Neonatologia
14Policlinico di Modena Nido-Neonatologia Streptococ
cus agalactiae
15(No Transcript)
16(No Transcript)
17CVC
Staphylococcus coaug.neg Aerobic gram negative
bacilli
18- Microbial triggers of disease
- gram-negative bacteria endotoxin, formyl
peptides, exotoxins, and proteases - gram-positive bacteria exotoxins, superantigens
(toxic shock syndrome toxin (TSST), streptococcal
pyrogenic exotoxin A (SpeA)), enterotoxins,
hemolysins, peptidoglycans, and lipotechoic acid - fungal cell wall material.
19Patogenesi
- la sintomatologia clinica è di solito dovuta a
prodotti tossici di origine batterica, alla
risposta dellospite a questi o ad entrambe. - Nei gram-negativi la porzione lipidica A
dellendotossina, sita nella membrana
lipopolisaccaridica esterna, innesca una catena
di reazioni, comprensivi della produzione del
tumor-necrosis factor (TNF), interleuchina1
(IL-1) ed attivazione del complemento. - I gram-positivi (in particolare Streptococcus
pneumoniae, Streptococcus pyogenes,
Stafilococchi) sono privi di lipopolisaccaride ,
ma sono dotati di altri componenti della parete
batterica, come il peptidoglicano, che producono
effetti simili.
20(No Transcript)
21(No Transcript)
22(No Transcript)
23(No Transcript)
24(No Transcript)
25(No Transcript)
26(No Transcript)
27- Quale è il contributo del Laboratorio di
Microbiologia nella diagnosi e trattamento della
sepsi? - Quali indagini microbiologiche richiedere,
attualmente, nel caso di sospetta sepsi ? - Quando e come raccogliere i campioni?
28(No Transcript)
29(No Transcript)
30- Diagnosis
- Appropriate cultures should always be obtained
before antimicrobial therapy is initiated. To
optimize identification of causative organisms,
at least two blood cultures should be obtained
with at least one drawn percutaneously and one
drawn through each vascular access device, unless
the device was recently (lt48 hrs) inserted.
Cultures of other sites such as urine,
cerebrospinal fluid, wounds, respiratory
secretions, or other body fluids should be
obtained before antibiotic therapy is initiated
as the clinical situation dictates. Grade of
Recommendation D - Diagnostic studies should be performed promptly
to determine the source of the infection and the
causative organism. Imaging studies and sampling
of likely sources of infection should be
performed however, some patients may be too
unstable to warrant certain invasive procedures
or transport outside of the ICU. Bedside studies,
such as ultrasound, may be useful in these
circumstances. Grade of Recommendation E
31(No Transcript)
32- Antibiotic Therapy
- Intravenous antibiotic therapy should be started
within the first hour of recognition of severe
sepsis, after appropriate cultures have been
obtained. - Grade of Recommendation E
- Initial empirical anti-infective therapy should
include one or more drugs that have activity
against the likely pathogens (bacterial or
fungal) and that penetrate into the presumed
source of sepsis. The choice of drugs should be
guided by the susceptibility patterns of
microorganisms in the community and in the
hospital. - Grade of Recommendation D
33(No Transcript)
34- The antimicrobial regimen should always be
reassessed after 4872 hrs on the basis of
microbiological and clinical data with the aim of
using a narrow-spectrum antibiotic to prevent the
development of resistance, to reduce toxicity,
and to reduce costs. Once a causative pathogen is
identified, there is no evidence that combination
therapy is more effective than monotherapy. The
duration of therapy should typically be 710 days
and guided by clinical response. - Grade of Recommendation E
- Some experts prefer combination therapy for
patients with Pseudomonas infections. - Grade of Recommendation E
- Most experts would use combination therapy for
neutropenic patients with severe sepsis or septic
shock. For neutropenic patients, broad-spectrum
therapy usually must be continued for the
duration of the neutropenia. - Grade of Recommendation E
- If the presenting clinical syndrome is determined
to be due to a non-infectious cause,
antimicrobial therapy should be stopped promptly
to minimize the development of resistant
pathogens and superinfection with other
pathogenic organisms. - Grade of Recommendation E
35(No Transcript)
36- Every patient presenting with severe sepsis
should be evaluated for the presence of a focus
on infection amenable to source control measures,
specifically the drainage of an abscess or local
focus on infection, the debridement of infected
necrotic tissue, the removal of a potentially
infected device, or the definitive control of a
source of ongoing microbial contamination. (See
Appendix A in the original guideline document for
examples of potential sites needing source
control.) - Grade of Recommendation E
- The selection of optimal source control methods
must weigh benefits and risks of the specific
intervention. Source control interventions may
cause further complications such as bleeding,
fistulas, or inadvertent organ injury in
general, the intervention that accomplishes the
source control objective with the least
physiologic upset should be employed, for
example, consideration of percutaneous rather
than surgical drainage of an abscess. - Grade of Recommendation E
SOURCE OF CONTROL
37- When a focus of infection amenable to source
control measures, such as an intra-abdominal
abscess, a gastrointestinal perforation,
cholangitis, or intestinal ischemia, has been
identified as the cause of severe sepsis or
septic shock, source control measures should be
instituted as soon as possible following initial
resuscitation. - Grade of Recommendation E
- If intravascular access devices are potentially
the source of severe sepsis or septic shock, they
should be promptly removed after establishing
other vascular access. - Grade of Recommendation E
38(No Transcript)
39- Causes
- Sepsis or septic shock may be associated with the
direct introduction of microbes into the blood
stream via intravenous infusion (eg, IV line,
other device-associated infections). - There may be perforations, compromise, or rupture
of an intra-abdominal or pelvic structure. - Bacteremia from bacteruria (urosepsis) may
complicate cystitis in compromised hosts.
Intrarenal infection (pyelonephritis), renal
abscess (intrarenal or extrarenal), acute
prostatitis, or prostatic abscess may cause
urosepsis in immunocompetent hosts. - Sepsis is not a random occurrence and usually is
associated with the aforementioned conditions. - In addition, sepsis may be caused by overwhelming
pneumococcal infection in patients with
impaired/absent splenic function. - Meningococcemia from a respiratory source also
may result in sepsis with or without associated
meningitis
40Le regole generali
- La raccolta del campione deve avvenire
possibilmente prima della terapia antibiotica - La raccolta del campione deve essere effettuata
nella sede anatomica dellinfezione - Prelevare una quantità sufficiente di materiale
- Evitare ogni contaminazione esogena ed endogena
- Utilizzare appropriati sistemi di raccolta
- Contrassegnare il contenitore del paziente, il
numero di identificazione, la data e lora del
prelievo - Consegnare prontamente i campioni al laboratorio
- Adottare, quando possibile idonee alternative
alla consegna immediata - Richiedere adeguate notizie cliniche
41- Obiettivo
- Garantire la sopravvivenza e lisolamento dei
microrganismi patogeni, prevenendo la
sovracrescita di batteri resistenti con cinetica
di crescita piurapida e garantendo la vitalitÃ
dei microrganismi fastidiosi per riprodurre
in-vitro lecosistema batterico del sito di
sospetta infezione, al fine di fornire al clinico
risultati attendibili e non inutili o dannosi per
il paziente
42- Criticità del prelievo per le indagini
microbiologiche - Preparazione del paziente
- Ora del prelievo rispetto allora
dellaccettazione - Modalità di prelievo
- Modalita di conservazione
- Tempo impiegato per il trasporto
43 44(No Transcript)
45BACTEC
- AUTOMAZIONE COMPLETA
- Lo strumento è
- Lettore in continuo
- Incubatore
- Agitatore
Tecnologia di lettura
La tecnologia di lettura del Sistema Bactec è
basata su un metodo fluorimetrico sensibile alla
produzione di CO2 da parte del microrganismo
presente. Il Sensore, posto sul fondo del flacone
allinterno di una matrice protettiva, contiene
composti fluorescenti che reagiscono in presenza
di CO2 prodotta dal microrganismo. Tale matrice
consente la diffusione selettiva della CO2 dal
brodo di coltura.
46- Perché lemocoltura puo essere falsamente
positiva? - I principali fattori sono-Contaminazione al
momento del prelievo per batteri presenti sulla
cute del paziente-Contaminazione al momento del
prelievo per batteri presenti sulla mani di chi
esegue il prelievo-Contaminazione al momento
dellinoculo per batteri posti sulla membrana di
protezione del flacone - -Contaminazione al momento dellinoculo per
batteri transitoriamente in circolo, ma non
responsabili della sepsi
47Blood culture is the criterion standard for
identifying patients with bacteriemia. However,
elevated false positive rates are common and are
associated with substantial health care costs In
the real world of clinical microbiology
laboratories, nearly half of all positive blood
cultures represent contamination. Complete
laboratory workup of contaminant isolates is
associated with increased technologist workload
and institutional cost.
.
,
Weinstein M.P., et al. Clin Infect Dis.
199724584-602
48- Indicatore di qualità del prelievorilevabile
nella fase post-analitica - di Stafilococchi coaug.negativiisolati da
emocoltura,
49- Dati della letteratura attestano che gli
Stafilococchi coaug.negativi sono responsabili di
batteriemie/sepsi significative per il 10 - 30,
variabilmente in relazione alla casistica
dellospedale (paziente con accessi vascolari,
immunodepressi etc.).In questi microrganismi la
meticillino resistenza varia dal 34 al 90
50- Il problema maggiore del prelievo riguarda la
possibilità di contaminazioni esogene del
campione con - conseguenti difficoltà interpretative del
risultato - Trattamenti antibiotici inutili
- Impossibilità di continuare liter diagnostico di
quel stesso prelievo di emocoltura. - .
51- Perché lemocoltura puo essere falsamente
negativa ? - I principali fattori sono-Volume insufficiente
-Numero di serie -Timing -Trattamento
antibiotico prima del prelievo-Momento del
prelievo rispetto al rialzo termico -
52- Lefficacia ed il significato clinico dell'
emocoltura dipendono da diversi fattori
metodologici ed interpretativi, dipendenti
soprattutto dalla fase pre-analitica, fra cui
principalmente - 1) il volume del campione,
- 2) il momento del prelievo,
- 3) l'intervallo ed il numero dei prelievi,
- 4) l'accuratezza del prelievo
- 5) le caratteristiche del mezzo di coltura
53(No Transcript)
54Gruppo di lavoro
M.Barbieri (Uff.Infezioni Ospedaliere)
P.Scannavini (Uff.Infezioni Ospedaliere)
A.Berardi, S.Cattani (Nido
-
Neonatologia)
M.Codeluppi (Ch.Trapianti TIPO)
A.Donelli (Unita Trapianti Midollo)
G.Guaraldi (Mal.Infettive )
A. Semeraro (Malattie Infettive)
M.Luppi (Ematologia)
P. Bevini
G.Longo (
Cure Palli
ative
Hospice)
P.Marchegiano (dir.Sanitaria)
L.Lucchi (Nefrologia
-
Dialisi)
E.Rubbiani (Nefrologia Intensiva)
R. Sa
bbatini (Oncologia
)
BPetocchi (Farmacia)
C.Vaccari (Rianimazione)
O. Fratti (Rianimazione/TIPO)
I. Generali (Rianimazione/TIPO)
C.Venturelli (Microbiologia) Referente
Gruppo di Lavoro
55- Suggerimenti per una corretta esecuzione
dellesame - Effettuare il prelievo il prima possibile e
prima dellinizio di eventuali terapie
antibiotiche. - Nel corso di malattia acuta febbrile (meningite,
polmonite batterica) che rende necessaria la
terapia empirica non mirata, o in pazienti con
malattie infettive (osteomielite, artriti
suppurative), per i quali è necessario un
intervento chirurgico durgenza, occorre eseguire
subito due prelievi in entrambe le braccia.
56- Quando il paziente è in trattamento antibiotico
eseguire lemocoltura prima della
somministrazione dellantibiotico - Il momento del prelievo puo non essere
critico nelle batteriemie di tipo continuo (es.
Endocardite, brucellosi, febbre tifoide) perchè
sono caratterizzate da crescita e moltiplicazione
dei microrganismi direttamente nel corrente
circolatorio, dove si ritrovano in carica
discretamente alta.
57- Il momento del prelievo risulta fondamentale nei
casi di batteriemia intermittente (situazione
piufrequente) perchè I batteri entrano nel
torrente circolatorio ad intervalli, da un sito
di infezione (polmoni, vie genito-urinarie,
tratto gastro-intestinale, ascessi, ..) occorre
effettuare il prelievo prima del rialzo febbrile
in quanto la batteriemia (maggiore concentrazione
di batteri nel sangue) puo precedere di oltre
unora il rialzo termico E importante studiare
la curva termica ed effettuare il prelievo prima
di tale rialzo. - Se questo non è prevedibile allora prelevare
all'inizio del picco. - nel caso di endocardite eseguire i prelievi
durante il picco (LG sulla prevenzione, diagnosi,
e terapia delledocardite infettiva Task-force
sullendocardite infettiva della Società europea
di Cardiologia 2004)
58Il volume di sangue
- Il volume di sangue posto in coltura rappresenta
lelemento piu critico nel rilevamento di una
infezione del torrente circolatorio.IL N di
microrganismi presenti in una batteriemia
delladulto e frequentemente circa 1 x103 UFC/L.
Esiste una correlazione diretta fra volume di
sangue e positività con un incremento
diapprossimativo del 3 di riscontro per ml di
sangue inoculato. Si raccomanda linoculo di
20-30 ml di sangue. Nei neonati e nei bambini
lentità della batteriemia è di solito maggiore
di quella degli adulti, sebbene possono
riscontrarsi livelli ridotti di batteriemia
(circa 4x103 UFC/L.). Per i neonati si raccomanda
un volume di 1-2 ml
59La maggior parte delle batteriemie, ad eccezione
di quelle
ricorrenti dei
bambini
presentano bassa carica microbica, per cui dovr
Ã
essere raccolto
per ogni set di emocolture un adeguato volume di
sangue
Da uno studio condotto su pazienti con fungemia,
fu dimostra
to che la
sensibilit
Ã
del
test aumentava del 3
per
ogni mL
di sangue prelevato
in pi
ù
Attualmente c
è
la tendenza ad effettuare
un minor numero di
prelievi
, ciascuno costituito da una
quantit
Ã
congrua di sangue
,
piuttosto che un maggior numero di prelievi,
ciascuno costituito
da pochi
mL di sangue
60(No Transcript)
61- Il momento del prelievo e il Numero di set
Il momento ideale per il prelievo è circa
30 minuti dopo la puntata febbrile, poiché in
questo periodo sembra essere maggiore la
concentrazione di microrganismi in circolo.
Se il rialzo febbrile
è
preceduto da brividi
bisognerebbe eseguire il
prelievo
al momento del
brivido.
62Emocoltura dovrebbe essere raccolta prima del
rialzo termico.
63 In corso di endocardite infettiva pare
non vi sia alcun vantaggio nelleffettuare
prelievi in corrispondenza di particolari
variazioni della temperatura corporea, essendovi,
di fatto, una batteriemia continua anche in
presenza di fasi di apiressia.
In corso di endocardite infettiva acuta è
consigliabile eseguire tre prelievi in una o due
ore, nelle prime 24 ore.
In corso di endocardite batterica subacuta
occorre effettuare 3 prelievi in 24 ore, oppure
se persiste negatività dopo 48 ore,
bisogna eseguire altre 3 emocolture nello spazio
di 24-48 ore
64- Un solo prelievo può non evidenziare una
batteriemia intermittente e rende difficile
interpretare il significato clinico
dellisolamento di certi microrganismi - Raramente è giustificato il prelievo di piu di
tre set di emocolture, in quanto la sensibilitÃ
del metodo non è ulteriormente aumentata. - Quando il prelievo viene eseguito da sangue
periferico, nel caso di sospetta sepsi e di
febbre di origine sconosciuta, i prelievi vanno
eseguiti da siti separati
65- Modalità di esecuzione dellemocoltura
- E' necessario il rigoroso rispetto delle norme di
asepsi durante il prelievo emocolture falsamente
positive comportano interpretazioni diagnostiche
erronee, con conseguenti terapie inutili. - Prima di procedere con manovre per lesecuzione
del prelievo è opportuno predisporre il materiale
occorrente verificando lintegrità delle
confezioni e le relative date di scadenza - Arcella pulita
- Laccio emostatico
- Cerotto di tela o di carta a seconda del
paziente - Disinfettante
- Guanti sterili
- Agocannula e butterfly per prelievo di diverse
dimensioni - eventuale doppia via o microgocciolatore
- Flaconi per emocolture
66(No Transcript)
67- Effettuare un lavaggio sociale delle mani
(secondo le linee guida) - Indossare la mascherina
- Reperire la vena ed effettuare, solo se
necessario una tricotomia localizzata - applicare il laccio lontano dal punto di
inserzione dellago cannula - Indossare i guanti sterili
- Dopo aver identificato la sede da raggiungere si
esegue una asepsi della cute per unarea di 5 cm,
strofinando in maniera circolare per almeno 2
con cotone imbevuto in una soluzione alcolica di
clorexidina gluconata 0,5 (tipo neoxinal
alc.0,5) il sito cutaneo viene poi disinfettato
con una soluzione di iodio povidone al 10 o
tintura di iodio al 2 con movimento circolare.
Evitare di toccare la cute, dopo la disinfezione,
nel punto di introduzione dellago. - Lasciare asciugare completamente prima di
eseguire la venipuntura (1-2 min) avendo
laccortezza di non toccare nuovamente col dito
la sede da pungere. - Evitare per quanto possibile lintroduzione
dellagocannula negli arti inferiori o in quelli
plegici. - In caso di presenza di dispositivi di accessi
venosi o centrali il prelievo deve essere
eseguito in tale sede e in altra sede periferica.
Nel caso in cui si sia intenzionati all
inserimento di una nuova ago-cannulla per
accesso venoso periferico seguire le indicazioni
precedenti già procedurate.
68- Eseguire la venipuntura (laccesso alla vena deve
essere distale rispetto al punto definitivo) - Fermare lago cannulla o il butterfly con
cerotto, raccordarlo in asespi con un raccordo a
due vie con camicia per prelievo vacutainer,
rimuovere il tappo metallico dal flacone
anaerobio dellemocoltura e inserirlo
allinterno della camicia. - verificare laspirazione del sangue allinterno
del flacone per emocoltura e prelevare 10 ml - Rimuovere prontamente il flacone dallapposito
contenitore di plastica - collegare al set di prelievo il flacone aerobio
- prelevare 10 ml di sangue
- Rimuovere il secondo flacone dal connettore di
prelievo - estrarre lago dalla vena e scartare il set in
contenitore per rifiuti sanitari a rischio
infettivo - attaccare su ogni flacone il barcode del
nosologico del paziente verticalmente e senza
coprire il codice a barre del flacone. - Indicare su ogni flacone la tipologia di prelievo
(sangue da vena periferica o sangue da catetere)
e lora del prelievo - Non scrivere assolutamente e non attaccare
cerotti, etichette o altri adesivi nella zona del
flacone occupata dal codice a barre.
69- non si raccomanda il cambio degli aghi fra la
puntura venosa e linoculo dei flaconi in quanto
ciocomporta il rischio di punture ed inoltre
dagli studi di una meta-analisi la pecentuale di
contaminazione sarebbe ridotta in modo moderato.
70(No Transcript)
71- Tutti i flaconi sono addizionati con CO2.
- I flaconi anaerobi sono preridotti ed addizionati
con CO2 e N2. - LSodioPolianetolSulfonato è un anticoaugulante
che risulta tossico per alcuni tipi di
microrganismi - Nei flaconi Bactec la concentrazione di SPS è
pari allo 0,025 sufficientemente corrispondente
al minimo valore possibile di tossicità per gli
eventuali microrganismi presenti. - Nel caso di liquidi biologici diversi dal sangue
occorre aggiungere FOS o fattore di arricchimento
utile per migliorare la crescita di microrganismi
esigenti come Neisseria, Haemophilus ecc - Contiene anche fattori che neutralizzano
leffetto tossico dellSPS. - I flaconi contengono resine che sono le uniche
sostanze ad avere proprietà mirata alla
neutralizzazione specifica degli antibiotici
72- Tipologia di flaconi da utilizzare
- BACTEC
- TAPPO BLU (aerobi)
- TAPPO ARANCIONE (anaerobi)
- TAPPO BIANCO (micobatteri / miceti particolari)
- Volumi raccomandati
- Adulti aerobio / anaerobio
- Adeguato da 3 a 10 ml. per flacone
- Ottimale da 8 a 10 ml per flacone
- Adulti MicoLytic
- Adeguato/Ottimale da 3 a 5 ml per flacone
- Pediatrico
- Adeguato/Ottimale da 1 a 3 ml. per flacone
- Luso di volumi più bassi puo prolungare il
tempo di rilevamento / isolamento dei
microrganismi.
73- Penetrazione del microrganismo attraverso una
porta dentrata - Formazione di un focolaio sepsigeno, in vicinanza
della porta dentrata, ove i microrganismi si
moltiplicano (tromboflebitico o linfangitico) - Immissione di gittate batteriemiche in circolo
- Eventuali localizzazioni metastatiche, da cui
possono originare altre gittate batteriemiche
74- Invio e Conservazione
- Dopo il prelievo inviare i flaconi in
laboratorio (dalle 8 alle ore 16 dal lunedi al
venerdi e dalle 8 alle ore 13 del sabato). Al di
fuori di questo orario le emocolture vanno
conservate a temperatura ambiente fino al momento
dellinvio. - Protocolli di prelievo
- Protocollo. 1 Pazienti Neutropenici /Oncologici
- Protocollo 2 Unità Intensiva
- Protocollo 3 Pazienti Oncologici
- Protocollo 4 Malattie Infettive
- Protocollo 5 Chirurgia Trapianti
- Protocollo 6 Nefrologia
- Protocollo 7 Nido-Neonatologia.
- Protocollo 8 Tab riepilogo
75INDICAZIONI ALLA SCELTA DEI VIALS DA EMOCOLTURA
BACTEC IN FUNZIONE DELLE VARIE SITUAZIONI
EPIDEMIOLOGICHE e/o CLINICHE
76(No Transcript)
77(No Transcript)
78(No Transcript)
79(No Transcript)
80(No Transcript)
81(No Transcript)
82(No Transcript)
83- Principali modalità diverse dalla routine
- Brucellosi, Istoplasmosi, Endocardite.
- Segnalare il sospetto clinico sulla   richiesta
in modo che venga prolungata l'incubazione per 3
settimane - Consegna al laboratorio
- I flaconi per lemocoltura devono essere
trasportati in laboratorio nel piu breve tempo
possibile - Se non possono essere consegnati in tempi rapidi
devono essere tenuti a T amb.
84(No Transcript)
85(No Transcript)
86in caso di segni o segnali di positivitÃ
- PREPARATO MICROSCOPICO (gram) comunicazione
telefonica e nel referto - Semina
- Flacone aerobio su agar sangue, agar cioccolato,
mk conkey - Flacone anaerobio su su agar sangue, agar
cioccolato, mk conkey, schaedler - Identificazione di specie secondo i metodi in uso
in laboratorio - allestimento prove di sensibilità secondo i
metodi in uso in laboratorio
87EMOCOLTURA in caso di segni o segnali di
positivitÃ
- ANTIBIOGRAMMA DIRETTO
- Metodi più utilizzati manuali
- Evidenziare i principali meccanismi di resistenza
- Attualmente non esistono metodi standardizzati
e/o approvati - IDENTIFICAZIONE DIRETTA DEI MICRORGANISMI
- Attualmente non esistono metodi standardizzati
e/o approvati - NO
88Sensibilità delle emocolture
- Nella sepsi da polmonite da Staphylococcus aureus
le emocolture sono spesso falsamente negative
(80) per trattamento antibiotico in atto. - Nella sepsi da osteomielite da Staphilococcus
aureus le emocolture sono positive nel 50 dei
casi - Solo il 3-8 delle colture dimostrano la sepsi
nei neonati
89- EMOCOLTURA interpretazione risultati come
identificare i falsi positivi (aspetti clinici) - Decorso clinico non tipico
- Non riscontrata linfezione primaria con lo
stesso isolato - Assenti i fattori di rischio per batteriemia
correlata al microrganismo isolato - I segni/sintomi dellinfezione non regrediscono
con trattamento antibiotico adeguato rispetto al
profilo di sensibilità - altro
90- Interpretazione dei risultati (1)
- Virtualmente qualunque microrganismo , compreso i
batteri della normale flora, possono essere causa
di infezione del sangue - Un risultato negativo non esclude necessariamente
una batteriemia risultati falsamente negativi si
hanno quando i patogeni falliscono di crescere - Un risultato positivo non necessariamente indica
lisolamento del patogeno risultati
falsi-positivi si hanno quando crescono i
contaminanti - I batteri gram-negativi, gli anaerobi e i miceti
dovrebbero essere considerati patogeni, fino a
dimostrazione del contrario - I maggiori problemi interpretativi di hanno se si
isola un microrganismo che normalmente colonizza
la flora cutanea
91- dove
- Gli isolati sono considerati lo stesso ceppo se
le prove biochimiche e il pattern di sensibilitÃ
sono gli stessi - tecniche molecolari sarebbero richieste per
confermare che isolati multipli sono veramente
identicio la di omologia - Raramente ci sono pazienti che hanno vera
batteriemia con specie di Stafilococchi
coaug.negativi diverse. Nei casi di pazienti con
sepsi clinica e a cui non è stata trovata altra
eziologia, è appropiato riportare lantibiogramma
- References
- Weinstein MP. Blood culture contamination
Persisting problems and partial progress. J Clin
Micro. 2003 41 2275-2278.
92Aspetti clinici e laboratoristici proposti per
aiutare il microbiologo ed il clinico nella
talora difficile interpretazione di un'emocoltura
positiva, nel decidere se il microrganismo
isolato dal sangue è da considerarsi patogeno o
contaminante.
- lidentificazione del microrganismo
- gli aspetti clinici quali la febbre, la
leucocitosi, i risultati di - indagini radiologiche (disponibili per il
clinico ma solitamente - non per il microbiologo)
- il numero di set positivi di emocolture rispetto
al numero di - set prelevati
- il tempo necessario per la rivelazione della
crescita dal - momento del ricevimento del campione in
laboratorio - il numero di flaconi positivi allinterno di un
unico set di - emocolture.
93(No Transcript)
94(No Transcript)
95Una corretta identificazione del microrganismo
isolato da unemocoltura può fornire importanti
informazioni per linterpretazione.
- Altri microrganismi, al contrario, sono
responsabili - di vere batteriemie solo raramente ed
includono - Corynebacterium spp.
- Bacillus spp. diversi da B. anthracis
- Propionibacterium acnes
- Lisolamento di Stafilococchi coagulasi-negativi,
i microrganismi più frequentemente isolati da
emocolture, può rappresentare un difficile
problema interpretativo. - Questi batteri sono spesso contaminanti, ma sono
anche stati riconosciuti come agenti eziologici
di batteriemie catetere-correlate e batteriemie
in pazienti con protesi vascolari o altri tipi di
protesi.
96Una corretta identificazione del microrganismo
isolato da unemocoltura può fornire importanti
informazioni per linterpretazione.
Per gli Stafilococchi coagulasi-negativi il
significato clinico non può essere basato solo
sulla loro corretta identificazione, e questo
vale anche per altri microrganismi. Enterococchi
e Streptococchi del gruppo viridans che in
recenti studi sono stati considerati patogeni nel
78 e 38 delle volte rispettivamente. Clostridiu
m perfrigens che spesso (77) è stato considerato
un contaminante, mentre Clostridium spp. diversi
da C. perfrigens molto spesso (80) sono stati
considerati come patogeni. Weinstein M.P. et al.
CID. 1997 24584-602
97SCN storia
- 1958 prime osservazioni di sepsi causate da SCN
(Smith) - 1962 Pereira ipotizza il ruolo patogeno di S.
saprophyticus nelle infezioni delle vie urinarie
- 1965 Wilson e Stuart segnalano lisolamento di
SCN da infezioni di ferita nel 4,4 dei casi
(1200 campioni, 53 colture pure) - 1965 Pulverer tenta di pubblicare il primo
lavoro relativo alle endocarditi causate da SCN.
Il lavoro verrà accettata solo nel 1967 - 1971 prima descrizione della colonizzazione di
shunt ventricolo-atriali da SCN (Holt) - anni 80 SCN prima causa di endocarditi su
valvola protesica - anni 1990-oggi SCN prima causa di sepsi
nosocomiali in reparti critici. Prime descrizioni
di cassetti genici di resistenza. Evidenza di
ceppi con diminuita suscettibilità ai
glicopeptidi.
E.C., 2004
98SCN studi di patogenicitÃ
- Gli SCN causano infezioni per la loro capacità di
aderire a biomateriali. La patogenicità di SCN è
stata valutata nel modello animale, valutando la
capacità di produrre ascessi dopo
cateterizzazione con dispositivi infettati - S. schleiferi è risultato in grado di causare
infezione in tempi brevissimi, altri studi
successivamente hanno dimostrato che questo
microrganismo può causare infezione anche
indipendentemente dal biomateriale - S. epidermidis e S. lugdunensis causano ascessi
di grado severo o di media gravità il primo può
causare infezione indipendentemente dal
biomateriale - S. hominis, S. warneri e S. capitis sembrano
essere dotati di minori patogenicità S.
epidermidis e S. capitis sono quelli in grado di
colonizzare per maggior tempo la cute sana (oltre
due mesi) - Alcuni SCN sono correlati a peculiari problemi di
resistenza agli antibiotici il 20 dei ceppi di
S. haemolyticus, ad esempio, presenta una ridotta
sensibilità alla teicoplanina
E.C., 2004
99SCN meccanismi di patogenicitÃ
- Più frequentemente infezioni associate a
biomateriali - Adesina polisaccaridica/capsulare (PS/A) è un
polimero di galattosio e arabinosio, 11).
Sintesi assai precoce (entro 15 minuti dopo il
contatto con il biomateriale) - PS/A altamente immunogena MA in infezioni
sperimentali NO risposta immune (probabilmente
per gli effetti immunomodulanti degli acidi
teicoici) - Altre adesine matrice proteica, tardive
- Adesività mediata da fibronectina, fibrinogeno,
collagene, vitronectina. Il meccanismo
patogenetico non è dissimile rispetto a SA, con
produzione finale di ESS (extracellular slime
substance)
E.C., 2004
100SCN significato clinico intrinseco
- SCN per i quali è stato riconosciuto un possibile
ruolo patogeno S. epidermidis, S. capitis, S.
sacchorolyticus, S. warneri, S. haemolyticus, S.
hominis, S. lugdunensis, S. auricolaris, S.
cohnii, S. saprophyticus, S. xylosus, S.
simulans, S. schleiferi, S. pasteuri, S. caprae. - Una significatività clinica sembra correlarsi
agli isolamenti di S. epidermidis, S.
haemolyticus, S. lugdunensis, S. simulans, S.
schleiferi, S. saprophyticus ( distretto
urinario)
E.C., 2004
101Interpretazione dei risultati (4)
- il numero di set di emocolture puo altresì
essere utilizzato per interpretare il significato
di un emocoltura positiva - I contaminanti spesso crescono in 1solo set su
2/3 set prelevati il numero dei set positivi/set
eseguiti è predittivo del significato clinico.
(Weinsten1983-1997)
102N di set di emocolture positive valutato in
funzione del N di set di emocolture eseguite
Nei pazienti con endocardite o altre infezioni
ematiche tutte le emocolture o la maggioranza di
queste risultano positive. I pazienti le cui
emocolture sviluppano contaminanti solitamente
hanno una singola emocoltura positiva (quando 2 o
più emocolture sono eseguite). Se 1 singola
emocoltura viene eseguita quanto detto
precedentemente non ha più senso. Eccellente
ragione per cui almeno 2 set di emocolture devono
essere raccomandati come pratica
standard. Eseguire gt 1 set di emocolture aiuta
nellinterpretazione del significato clinico di
unemocoltura in virtù del seguente calcolo in
unistituzione con di contaminazione baseline
delle emocolture del 3, la probabilità di
ritrovare lo stesso microrganismo (come
contaminante) in 2 set di emocolture dello stesso
paziente è lt 1 su 1000 (0.03 x 0.03 0.0009).
103- Altri studi recentemente pubblicati
- (Mirrett J.Clin.microbiol.2001) dimostrano che il
numero di flaconi positivi non è uninformazione
utile per distinguere un microrganismo da
patogeno a contaminante
104(No Transcript)
105(No Transcript)
106(No Transcript)
107Valutazione del numero di flaconi positivi
allinterno di un set di emocolture
I Dati pubblicati, almeno per gli Stafilococchi
coagulasi-negativi (CoNS), dimostrano che questa
tecnica non è utile clinicamente. CoNS
clinicamente significativi possono crescere più
spesso in flaconi multipli allinterno di un set
di emocolture, mentre i contaminanti più spesso
crescono in un solo flacone del set, tuttavia il
grado di sovrapposizione è tale che per una data
coltura questa informazione non è in grado di
predirne in modo attendibile il significato
clinico.
108(No Transcript)
109(No Transcript)
110(No Transcript)
111(No Transcript)
112(No Transcript)
113(No Transcript)
114Il tempo necessario perchè lemocoltura venga
rilevata come positiva
Necessaria premessa la crescita dei patogeni,
che normalmente sono presenti in grandi quantità ,
dovrebbe essere rivelata in tempi più brevi
rispetto ai contaminanti, che solitamente sono
presenti in quantità più piccole. Tuttavia, pur
avendo questo concetto una certa validità , il
grado di sovrapposizione del tempo di rilevazione
tra i veri patogeni ed i contaminanti è tale che
questa variabile non può essere utilizzata come
fattore predittivo di una coltura
vera-positiva. Inoltre, con il largo utilizzo
dei sistemi colturali automatici a monitoraggio
continuo dei flaconi di emocolture e la
concomitante riduzione dei tempi di rivelazione
della crescita, le differenze di tempo tra la
rivelazione dei veri patogeni e dei contaminanti
risultano talvolta poco significative.
115EMOCOLTURAgiudizio di positività giorni di
positività e positività multiple
- 1 giorno
- 2 giorni
- 3 giorni
- 4 o più giorni
- Il Tempo di positivizzazione puo essere
inversamente proporzionale al ruolo patogeno del
microrganismo - Più di un flacone positivo gt probabilità di vera
batteriemia
116(No Transcript)
117- Interpretazione dei risultati (2)
- In caso di isolamento dello stesso stipite di
Stafilococchi coaugulasi negativi, Corinebatteri,
Streptococcus viridans, Micrococcus spp, Bacillus
spp.si propone il seguente algoritmo - Caso 1
- 1 sangue da periferico POS
- possibile patogeno, valutare la clinica e se
necessario eseguire ulteriori prelievi nelle
24 ore - 1 sangue da periferico POS
- Caso 2
- 1 sangue da periferico POS
- Probabile contaminante valutare la clinica e
se necessario eseguire ulteriori prelievi
nelle 24 ore - 1 sangue da periferico NEG
118- Caso 3
- 1 sangue da catetere POS
- Significativo, patogeno
- 1 sangue da periferico POS
- Se lintervallo tempo di positivizzazione dei 2
flaconi è gt 120 min. è altamente probabile
infezione correlata a catetere. - Caso 4
- 1 sangue da catetere NEG
- Probabile contaminante/colonizzante, valutare
la clinica e il rischio per il paziente - se necessario ripetere I prelievi nelle 24 ore.
- 1 sangue da periferico POS
119- N.B. Per interpretare correttamente il risultato,
è fondamentale poter risalire esattamente alla
tipologia di prelievo e allora del prelievo(da
catetere o da vena periferica), mediante la sigla
scritta sul flacone, al momento del inoculo in
reparto.
120Interpretazione dei risultati (5)
- Casistica altamente suggestiva per considerare
un CONS contaminante - 1 emocoltura pos seguita da emocolture neg
- 1 set pos su 2 ottenute simultaneamente
- 2 set pos, ma separati da un intervallo di tempo
con piu di un set negativo - solo un flacone pos (aerobio o anaerobio)
- di un set
121Interpretazione dei risultati (6)
- Possibili Criteri di laboratorio per assistere il
clinico nell assegnare un significato di
patogeno o contaminante ad un microrganismo che
appartiene alla flora cutanea. - 1) CNS, P.acnes, Corynebacterium spp. o Bacillus
spp. isoalti da 1 di parecchie colture - 2) crescita di piu di un microrganismo da
parecchie colture - 3)isolamento da emocolture di un microrganismo
che differisce dallorganismo causa
dellinfezione nel sito primario dellinfezione
stessa. - 4)tempo di positivizzazione
122interpretazione risultati falsi negativi
- Terapia antimicrobica (60 dei negativi)
- Uremia
- Principali cause legate a microrganismi cosidetti
difficili - Batteri del gruppo HACEK
- Abiotrophia Nutritionally variant streptococci
- Miceti
- Nocardia spp
- Bartonella spp
- Altri batteri a lento o lentissimo sviluppo
123- Principali cause legate a microrganismi
coltivabili solo conmetodiche specifiche e quindi
da prelevare ed inviare al laboratorio con
modalità diverse - Micobatteri
- Leptospira spp
- Legionella spp.
- Borellia spp
- Principali cause legate a microrganismi non
coltivabili nei comuni terreni da emocoltura e
pertanto evidenziabili mediante prove
sierologiche, colture cellulari o, se
disponibili, tecniche molecolari - Chlamydia spp.
- Coxiella burneti (febbre Q)
- Altre Rickettsie
- Tropherina whippleri (Whipple disease bacillus
124(No Transcript)
125diagnosi di laboratorio delle micosi invasive
isolamento da sangue
- Isolamento da sangue diagnosi di micosi
invasiva 58 lisi centrifugazione/pcr - Scarsa sensibilità ( 50) per i lieviti
50-58automatizzati - Scarsissima sensibilità ( 0) per Aspergillus
126(No Transcript)
127(No Transcript)
128Criteri per la diagnosi di endocardite infettiva
(3)(Duke criteria di Durak et al., -
modificati da Li et al., 2000)
CRITERI CLINICI MAGGIORI
- Emocolture positive per endocardite infettiva
- Microrganismi tipici di E.I. isolati da 2
emocolture separate (streptococchi viridanti,
Str. bovis, Staph. aureus, HACEK group,
enterococchi acquisiti in comunità in assenza di
un focolaio infettivo primario). - Isolamento ripetuto di microrganismi
potenzialmente responsabili di E.I. - almeno 2 emocolture prelevate a più di 12 ore di
distanza - 3 emocolture o la maggioranza di 4 o più
emocolture prelevate in un intervallo di tempo di
almeno 1 ora tra la prima e lultima - per Coxiella burnetii un titolo di anticorpi IgG
gt 1/800.
oppure
oppure
129(No Transcript)
130Criteri per la diagnosi di endocardite infettiva
(5)(Duke criteria di Durak et al., -
modificati da Li et al., 2000)
CRITERI CLINICI MINORI
- Fattori cardiaci predisponenti o
tossicodipendenza e.v. - Febbre ? 38C.
- Fenomeni vascolari (emboli arteriosi, infarti
polmonari settici, aneurisma micotico, emorragia
cerebrale o congiuntivale, lesioni di Janeway). - Fenomeni immunologici (glomerulonefrite, noduli
di Osler, macchie di Roth, fattore reumatoide). - Evidenza microbologica (emocolture positive che
non soddisfano i criteri maggiori, evidenza
sierologica di uninfezione attiva dovuta a
microrganismi potenzialmente responsabili di
E.I.).
Escluso singole emocolture positive per
stafilococchi coagulasi-negativi o per
microrganismi che non causano E.I.
131Endocarditi a emocoltura negativa (1)
- CAUSE PRINCIPALI
- uso terapia antibiotica durante o prima dei
prelievi colturali - presenza di microrganismi che non crescono nei
terreni convenzionali - INOLTRE
- infezioni che durano da oltre tre mesi
- uremia
- endocarditi murali o da pace-maker
- endocarditi non infettive
- diagnosi errata di E.I.
132Endocarditi infettiveInfezioni setticemiche a
focolaio sepsigeno endocardico
- Agenti eziologici schizomiceti, miceti,
rickettsie, clamidie - Streptococcus viridans ( 40)
- Streptococcus faecalis ( 25-30)
- Staphylococcus aureus o epidermidis ( 20)
- Batteri gram-negativi
- Candida spp.
- C. burneti, R. prowazeki
- ecc., ecc.
- Endocarditi a emocoltura negativa (10)
133(No Transcript)
134Eziologia delle E.I.
Valvola nativa Valvola protesica
() () Streptococcus spp. 45 - 65
1 - 33 Staph. aureus 30 - 40
10 - 24 Staf. coagulasi-negativo
4 - 8 10 -
35 Enterococcus spp. 5 - 8
5 - 15 Batteri gram-negativi
4 - 10 2 -
15 HACEK 3 - 10 3 -
8 Miceti 1 - 3 1 -
15
(New Engl J Med 2001 345 1318-30)
135Unusual causes of bacterial endocarditis
- Gram-positive bacilli Gram-negative
bacilli - Listeria
Legionella - Corynebacterium
Coxiella - Bacillus
Brucella - Erysipelothrix
Neisseria - Lactobacillus
Branhamella - Clostridium
Vibrio - Propionibacteria
Veillonella - Rothia Bartonella
- Arachnia
Other - Actinomyces
Chlamydia - Mycobacteria
Mycoplasma - Nocardia
136Diagnostica biomolecolare (PCR)
- Lamplificazione genica eseguita con PCR a largo
spettro (es. 16S rRNA gene), seguita dal
sequenziamento diretto dellamplicone, è una
tecnica che ha dato buoni risultati se applicata
alle valvole rimosse chirurgicamente di pz. con
E.I. - Non è ancora chiaro se essa può essere applicata,
negli stadi iniziali della malattia, sulle
cellule mononucleate del sangue periferico o sul
siero di pazienti con emocolture negative.
137Criteri di duke per la diagnosi di E.B.
- La diagnosi è definita se vi sono 2 criteri
maggiori o 1 criterio maggiore e 3 minori o 5
criteri minori. - CRITERI MAGGIORI
- Emocolture positive (? 2/2)
- Interessamento endocardico (nuovo soffio o
ecocardiogramma positivo) - CRITERI MINORI
- Fattori predisponenti cardiaci o
tossicodipendenza - Febbre
- Fenomeni immunologici (glomerulonefrite, Osler,
Roth spots, fattore reumatoide) - Ecocardiogramma compatibile ma non diagnostico
- Fenomeni vascolari emboli, petecchie, ecc.
- Emocolture positive ma non diagnostiche o
evidenza sierologica di infezione batterica
138Sepsi da CVC
- 13 delle infezioni ospedaliere
- 20 di tutte le sepsi
- 50 - 100.000 casi anno negli USA
139(No Transcript)
140(No Transcript)
141(No Transcript)
142(No Transcript)
143(No Transcript)
144(No Transcript)
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146(No Transcript)
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158(No Transcript)
159(No Transcript)
160Conclusione Sepsi correlata catetere
- la diagnosi si avvale di
- isolamento dello stesso microrganismo dal sangue
da vena periferica e da catetere - differenza del tempo di positivizzazione tra Sg e
SgCV gt 120 min. se le emocolture sono state
eseguite alla stessa ora di prelievo. - isolamento dello stesso microrganismo da
emocoltura e da coltura semi-quantitativa o
quantitativa del catetere.
161(No Transcript)
162(No Transcript)
163(No Transcript)
164(No Transcript)
165(No Transcript)
166- Criticità del prelievo per le indagini
microbiologiche - Preparazione del paziente
- Ora del prelievo rispetto allora
dellaccettazione - Modalità di prelievo
- Modalita di conservazione
- Tempo impiegato per il trasporto
167- Attualmente controllare sistematicamente questo
processo non è possibile - ?Monitoraggio dellora del prelievo(limite
della compilazione manuale delle richieste) - ? Identificazione, nella fase post-analitica, di
indicatori di qualità del prelievo
168Nel 90 dei campioni è stata segnalata la data
del prelievoNel 40 dei campioni è stata
segnalata lora del prelievo
169Nel 12,2 dei campioni per coprocoltura è nota
lora /data del prelievoNel 34,1 dei campioni
di ricoverati è segnalata lora/data del
prelievo per coprocoltura
170- Indicatore di qualità del prelievo rilevabile
nella fase post-analitica - di urinocolture con flora da probabile
contaminazione
171- La raccolta và eseguita seguendo le corrette
modalità di prelievo indicate dal Manuale dei
Laboratori 2) Devono essere processate entro 2
ore dal prelievo3) La conservazione è prevista a
4-8 per un massimo di 12-24 ore , oppure 4)
la raccolta và eseguita in appositi contenitori
con stabilizzante (acido borico o altri sistemi
disponibili in commercio) fino a 48 ore a
T.amb4) Le urine raccolte con sacchetto,
nelletà pediatrica, sono attendibili solo se il
risultato è negativo
172- Perché è importante raccogliere lurina del primo
mattino ? - Perché si ha la massima concentrazione di
batteri. - Lurinocoltura è unesame quali-quantitativo
- e lespressione della carica batterica è
inversamente proporzionale al grado
didratazione. - Basse cariche batteriche possono comportare un
risultato falsamente negativo
173(No Transcript)
174(No Transcript)
175Urina dopo T gt2 ore circa del prelievo a T amb.
Urina appena raccolta
Urina dopo T gt 4 ore dal prelievo a T amb.
Urina dopoT gt 6 ore dal prelievo a T amb
176(Very) major error
- una urinocoltura negativa
- viene refertata Positiva
- Con conseguente
- Identificazione ed antibiogramma eseguiti
inutilmente su tracce di un microrganismo
colonizzante - Possibile trattamento antibiotico non necessario
177(No Transcript)
178(No Transcript)
179- Lisolamento di un microrganismo da un
emocoltura di un neonato con sintomi clinici di
infezione costituisce la comune definizione di
sepsi. - In caso di Stafilococchi coaug.neg., molti studi
recenti richiedono lisolamento dello stesso
microrganismo da due emocolture o da una singola
emocoltura con altre evidenze di laboratorio di
sepsi, come un elevato valore di PCR. - Lo schema di classificazione adottato per
pazienti pediatrici ed adulti, con le quattro
categorie di sepsi, non puo essere adottato per
i neonati. Lo sviluppo di neonatal sepsis scale
richiede una piu rigorosa definizione di sepsi
clinica nei neonati con una miglior correlazione
con loutcome e una piu consistente
interpretazione degli studi di ricerca clinici ed
epidemiologici.
180- Infezione delle vie urinarie
- è generalmente definita come la crescita di
almeno 100 CFU /ml da un campione ottenuto da
puntura sovrapubica o di almeno 10.000 CFU/ml da
un prelievo mediante cateterizzazione sterile.
Conte inferiori possono essere indicative di
infezione in bambini pre-termine, in particolare
se viene isolato Candida spp. O un gram-negativo. - Lurinocoltura non è indicata nella valutazione
delle EONS dal momento che lurina è sterile
nelle prime 48-72 ore di vita. Tuttavia,
lurinocoltura dovrebbe essere ottenuta in tutte
le valutazioni di sepsi oltre 3 gg di vita, dal
momento che la manifestazione clinica di UTI e
sepsi sono simili.
181- Diagnosi di meningite
- Lisolamento di un microrganismo da liquor in un
bambino pretermine è generalmente considerato
evidenza di meningite. La diagnosi di meningite è
problematica nei bambini VLBW dal momento che il
prelievo lombare viene spesso eseguito dopo la
somministrazione di antibiotici. Inoltre dal
momento che la meningite puo decorrere senza
setticemia e che le emocolture possono essere
falsamente negative , questo puo sottostimare il
trattamento per meningite nei VLBW. - Diagnosi di polmonite
- La polmonite rimane la piu difficile infezione
da diagnosticare nei bambini pre-termine. I
microrganismi coltivati dal tubo endotracheale
spesso rappresentano colonizzanti piuttosto che
responsabili di polmonite. La coltura
quantitativa puo essere daiuto.
182- Il gold standard per la diagnosi di sepsi
neonatale rimangono le emocolture, sebbene in
molti casi siano negative . In uno studio
condotto nel 1999 sulle autopsie di ELBW bambini,
con infezione considerata la prima causa di
decesso, nel 61 dei neonati le emocolture
eseguite prime della morte erano negative.
Lantibiotico somministrato alla madre nella
maggior parte dei parti pre-termine puo
sopprimere la crescita batterica dalle
emocolture. Risultati falsi negativi in neonati
con sospetta sepsi , si possono avere a causa di
insufficiente inoculo di sangue . In uno studio
prospettico di circa 300 emocolture, il volume
prelevato era meno di 0,5 ml di sangue. Le
difficoltà tecniche di prelievo nei bambini
pretermine decresce la sensibilitÃ
dellemocoltura per la diagnosi di sepsi.
183(No Transcript)
184Non culture microbiological method for predicting
bloodstream infection
- Antigen detection usato in passato su liquor e
urine per la presenza di GBS, ha una sensibilitÃ
che và dal 72 al 89 per il liquor e debolmente
piu bassa per le urine. - Diagnostica molecolare la determinazione di
batteri nel sangue avviene mediante PCR del gene
16S rRNA, presente nei batteri ma assente
nelluomo. Il rilevamento di meno di 10
microrganismi per ml da sangue intero è stato
riportato e ricerche per migliorare la
sensibilità del metodo e per automatizzare il
processo sono in corso. - Studio di Jordan et coll. 548 campioni appaiati
di sangue/emocolture da bambini in NICU con
sospetta sepsi di 25 prelievi con emocolture
positive, 24 erano positive con PCR con risultato
disponibile in 9 ore con possibilità di
discriminare tra gram positivi e gram negativi. ? - Sensibilità , specificità , VPP, VPN, 96, 99,4,
88,9 , 99,8
185- La determinazione della fungemia median