Manutenзгo das Cepas ATCC

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Manutenção das Cepas ATCC

• Marinês Dalla Valle Martino
• Hospital Israelita Albert Einstein
• Faculdade de Ciências Médicas da Santa Casa-SP

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ATCC

• American Type Culture Collection
• http//www.atcc.org/

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ATCC

• Reconstituir as cepas de acordo com as
  orientações do fabricante

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Congelamento a longo prazo

• 1.repicar a cepa em ágar sangue ( ou outro meio
  em placa não seletivo)
• 2.incubar overnight em atmosfera adequada
• 3.repicar novamente.
• 4.a partir desta semeadura, fazer um inóculo bem
  pesado em um tubo contendo 10 ml de caldo
  Brucella com 15 de glicerol.

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Congelamento a longo prazo

• 5. agitar (15 a 20 s.)
• 6. Dispensar aproximadamente 1 ml em 10 frascos.
• 7.congelar a 60 C ou menos por até 3 anos.

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Congelamento a longo prazo

• A. Alguns microrganismos conseguem sobreviver e
  manter suas características de sensibilidade
  antimicrobiana por mais tempo.
• B.Alguns são mais sensíveis ao congelamento
  (Streptococcus pneumoniae e Neisseria gonorrhoeae
  )
• C. Para alguns é necessário adicionar
  antimicrobiano penicilina para N.gonorrhoeae
  produtora de penicilinase ( 1µg/ml).

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Recomendações - NCCLS

• Armazenamento prolongado -20C ou abaixo. (-60
  C ou nitrogênio líquido)
• Meios para armazenamento caldo com soro fetal
  50, TSB com 15 de glicerol, sangue de carneiro
  desfibrinado ou leite desnatado.

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Recomendações - NCCLS

• Meios para controle culturas em uso TSA ou ágar
  chocolate (fastidiosos), 2-8 C e subcultivada
  semanalmente por não mais de 3 semanas
  sucessivas.
• Cepas congeladas devem ser cultivadas pelo menos
  por 2 vezes antes do teste

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Recomendações - NCCLS

• Cuidados especiais para cepas
• E.coli ATCC 35218
• Klebsiella pneumoniae ATCC 700603
• Risco para perda de plasmídeos

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Descongelamento

• Retirar material da superfície- sem descongelar.
• Qdo descongelar não retornar o frasco para o
  freezer
• Programar frascos para períodos gts

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Recomendações

• Testar pureza da cepa.
• Anexar identificação.
• Identificação adequada.

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Opções

• Meios Comerciais.

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Tempo de preservação

• 10 a em freezer -70C
• Fastidiosos lt tempo
• -20C lt tempo
• Frost free não

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• Isemberg HD- Clinical Microbiology Procedures
  Haandbook- 2.ed, 2004.
• NATIONAL COMMITTEE FOR CLINICAL LABORATORY
  STANDARDS - Performance Standards for
  Antimicrobial Disk Susceptibility Tests.
  Approved Standard, Eighth Edition, M2-A8 2003.
• NATIONAL COMMITTEE FOR CLINICAL LABORATORY
  STANDARDS Methods for Dilution Susceptibility
  Tests for Bacteria that Grow Aerobically
  Approved Standard, Sixth Edition, M7-A6, 2003