Vergelijkende studie van vijf automatische celtellers hematologie

1
Vergelijkende studie van vijf automatische
celtellers hematologie

• WBA 135
• 10/10/2005
• Dr. J. Van den Bossche

2

• Maart 1978 Apparatuur bloedceltellingen
• Apr. Biol. C. Tytgat
• de betere ziekenhuizen
• Artikel Test Aankoop
• Geen Beste Koop
• Niet mijn taak
• Mogelijk?

3

• Situatie (Werking en Nood AZM) (en collegas)
• Markt
• Project (cfr 1998)
• Resultaten
• Selectie
• Echos literatuur

4
KLM Klinisch Laboratorium Middelheim
Algemeen Ziekenhuis Middelheim (ZNA) Campus
Middelheim Campus Paolaziekenhuis
(Kinderziekenhuis) Campus Hoge Beuken AZ
Stuivenberg AZ Jan Palfijn
5
Situatie celtellers anno 2005

• Klinisch Laboratorium Middelheim
• Abbott Cell Dyn 4000 (ifo) laboratorium
• CBC, 5-diff, nrbc, retic en SMS
• CD 1700 (i) raadpleging onco/hematologie
• CBC, 3-diff
• Individuele stalen via manuele, gesloten mode
• Tijdelijk resultaat met hertelling in
  laboratorium
• Abx Micros (i) laboratorium
• CBC, 3-diff
• Individuele stalen via gesloten open mode
• MICRO volumes ( met duplo meting)
• telling BM aspiraten en vochten

6
Tellingen anno 2005

• Illustratie Aantallen 2 dagen (jaaroverzicht)
• Tellingen per dag d1 299-d2 393
• CBC 76-64
• CBC 5diff (incl nrbc) 223-329
• (overwegend 80)
• Retic 19-44
• (overwegend rond 10-15)
• Uitstrijk op SMS 77
• Aantal microscopie 24-44
• (overwegend 10-15)
• Vochten tot 5

7
Nood

• Past in aankoopprocedure
• oude is versleten
• 1 toestel zonder onderhoudscontract
• Preanalytische/Analytische automatisatie
• Engen Thermo Workcell (Thermo Clinical
  Labsystems/Ortho Clinica Diagnostics)
• ZNA politiek
• Vraagstelling collegas
• Project met oa evaluatie

8
Markt

• 1. Sysmex XE 2100
• 2. Abx Pentra DX 120
• 3. Coulter LH 750
• 4. Bayer Advia 2120
• 5. Abbott Sapphire (primeur)
• (volgorde is arbitrair, opstelling tijdens demo,
  volgorde stalenflow met random start)

9
Specificaties

• Collega of American Pathologists (CAP)
• CAP Today
• Instrument survey 2003
• http//www.cap.org/apps/docs/cap_today/feature_sto
  ries/1203_LabsAreHungryHematologySurvey.pdf
• http//www.cap.org/apps/docs/cap_today/ctarchive_2
  005.html

10
Project Evaluatie

• Opstellen protocol/zwaartepunten
• Opstellen resultaatcriteria (exclusiecriteria)
• Samenstellen/opleiding evaluatieploeg
• 1 KLB
• 3 MLTs hands on (1 AZS)
• 2 assistenten hands on (1 AZS)
• sterke MLTs op werkposten
• Routinetelling FCM Microscopie
• Commissie Medische Ethiek

11
Publicaties

• Toestelvergelijkingen
• Platelet counting by Coulter LH 750, Sysmex XE
  2100, and Advia 120
• Am J Clin Pathol 2002 118 235-241

12
Publicaties

• Toestelevaluaties
• Identification and enumeration of nucleated red
  blood cells on the Coulter LH 750
• Lab Hematol 2002 8 210-217
• The new hematology analyzer Sysmex XE-2100
  Perfomance evaluation of a novel white blood cell
  differential technology
• Arch Pathol Lab Med 2001 125 391-396
• Comparative evaluation of shistocyte counting by
  an automated method and by microscopic
  determination
• Am J Clin Pathol 2004 121 739-745
• Abx Pentra DX 120 Abbott Sapphire nieuwer
  (abstracts)

13
NCCLS

• EP9-A Method Comparison and Bias Estimation
  Using Patient Samples Approved Guideline
• EP10-A Preliminary Evaluation of Quantitative
  Clinical Laboratory Methods Approved Guideline
• H15-A2 Reference and Selected Procedures for the
  Quantitative Determination of Hemoglobin in
  Blood-Second Edition Approved Standard
• H20-A Reference Leukocyte Differential Count
  (Proportional) and Evaluation of Instrumental
  Methods Approved Standard
• H26-A Performance Goals for the Internal Quality
  Control of Multichannel Hematology Analyzers
  Approved Standard
• H44-A Methods for Reticulocyte Counting (Flow
  Cytometry and Supravital Dyes) Approved
  Guideline
• C28-A How to Define and Determine Reference
  Intervals in the Clinical Laboratory Approved
  Guideline

14
Literatuur

• Platelet counting by the RBC/Plt ratio method. A
  reference method. ICSH
• Am J Clin Pathol 2001115460-464
• New rapid flow cytometric method for the
  enumeration of nucleated red blood cells.
• Cytometry 199937(4)291-301
• Toward a new reference method for the leukocyte
  five-part differential
• Cytometry 1997 30 72-84

15
Basis

• Guidelines for the evaluation of blood cell
  analyzers including those for differential
  leucocyte and reticulocyte counting and cell
  marker applications.
• International Council for Standardization in
  Haematology (ICSH) (1994)
• Clinical and Laboratory Haematology 16, 157-174.

16
Praktisch AZM Protocol

• Dag 1 en 2 Nabootsen routine (reagens verbruik)
• Alle routinestalen op de 5 toestellen
• Met werklijst (Hb /- CBC /- diff /- retic)
• Volgende dagen CBC diff ret (evt rerun NRBC)
• Analytische evaluatie
• Dilutie donor en pathologische stalen
• Precisie
• Within-batch donor en pathologische stalen
• Between-batch donor per toestel
• Within-day QC verschillende levels
• Carry-over
• Correlatie aantallen
• Analyser versus CD 4000
• plt vs FCM (retic vs FCM cfr 1998)
• Nrbc vs microscopie (To Do 1 staal in 1 rubriek)

17
AZM Protocol (vervolg)

• Flagging Microscopie interpretatie
• Negatief geen vlag te verwachten
• Positief pathologische stalen
• Blast, Imm gran, (Stab,) Atyp Lym, Rbc, Plt
• Staalveroudering 0-24-48 uur
• Interferenties en varia (vochten BM )
• Totaal gt metingen
• Technische evaluatie (met reserve)

18
Protocol

• Ongekend voor firmas
• Basisinstellingen (Niet-ideale instelling)
• Vooral naar Flagging
• goed idee?
• Simultane evaluatie van 5 toestellen gedurende 14
  dagen
• Zelfde stalen op alle toestellen (kracht)
• Dag 1 en 2 geen resultaten gebruikt
• Vertrouwen werking en handelingen

19
Resultaten selectie

• Dilutie
• Precisie
• Carry-over
• Correlatie
• Flagging

20
Dilutie

• Eenzelfde staal van een gezonde donor
• verdund in autoloog PlateletPoorPlasma (PPP)
• verdunningreeks van 8 punten
• 0-15-30-45-60-75-90-100
• 100 HB 15,8 wbc 6 plt 140 retic 73
• gemeten op ieder toestel
• Ieder punt werd 3 maal gemeten
• Grafische voorstelling

21
XE-2100-1
22
Abx Wbc
23
LH Plt
24
Advia Plt
25
Sapphire Retics
26
Tabel lineariteit
R2 Hb Wbc Plt Ret
XE 2100 0,9998 0,9987 0,9984 0,9934
DX 120 0,9992 0,9986 0,9879 0,9979
LH 750 0,9998 0,9994 0,9986 0,9561
Ad 2120 0,9995 0,9992 0,9944 0,9944
Sapphire 0,9992 0,9990 0,9986 0,9750
27
Precisie

• Within-batch
• (Within-day
• Between-day
• Staalveroudering)

28
Precisie

• Within-batch
• Normale donor normale en abnormale waarden (rest
  BuffyCoat van TC productie en dilutie met PPP)
• Eenzelfde identiek staal
• op de 5 toestellen
• maximum aantal maal geanalyseerd (onmiddellijk na
  elkaar)
• CVs werden berekend
• Abnormale waarden
• Een staal per toestel
• maximum aantal maal geanalyseerd (onmiddellijk na
  elkaar)
• CVs werden berekend

29
Within-batch Hb
30
Within-batch wbc
31
Within-batch Plt
32
Within-batch Ret
33
Carry Over

• Per parameter
• Hoog staal 3x meten
• Laag staal 3x meten
• (L1-L3)/(H3-L3)100

34
Carry Over
35
Correlatie

• Per rubriek, zelfde groep van stalen op de 5
  toestellen
• Vergelijken met routine toestel (CD 4000)
• Vergelijken met referentie
• Vergelijken onderling
• Grote groep N 64

36
Box whisker Hb
37
Box whisker wbc
38
Box whisker plt
39
Box whisker retic
40
(No Transcript)
41
(No Transcript)
42
(No Transcript)
43
(No Transcript)
44
Lage wbc
45
2 vs 1
46
3 vs 1
47
4 vs 1
48
5 vs 1
49
4 vs 2
50
Bloedplaatjes

• Guideline for the use of platelet transfusions
• British Journal of Haematology 2003 (122) 10-23
• Accuracy of platelet counting haematology
  analysers in severe thrombocytopenia and
  potential impact on platelet transfusion
• British Journal of Haematology 2005 (128)
  520-525
• Comparison of Abbott Cell-Dyn 4000 and flow
  cytometric platelet counting methods
• Annual meeting BVKV, okt 2004, B. Leus et al, KLM

51
Correlatie plt FCM

• ICSH/ISLH referentie methode
• Plt/Rbc ratio
• CD 41/CD61
• Omzeilen autoAS tegen 1 van de 2
• Dilutie optimum (1/1000)
• voor minimum aan coincidenties
• Correctieformule
• In duplo (delta duplos vs BJHaem)
• Groep 22 geselecteerde, stalen

52
Box whisker plt fcm
53
1o vs fcm
54
1i vs fcm
55
2 vs fcm
56
3 vs fcm
57
4 vs fcm
58
5o vs fcm
59
5i vs fcm
60
Flagging/Reviews AZM

• Telling
• Technische validatie
• Medische ValidatieScreening
• Review met print
• Automated flagging influences the inconsistency
  and bias of band cell and atypical lymphocyte
  morphological differentials
• Clin Chem Lab Med 2004 (42) 4 371-377
• Medische Validatie

61
Medische ValidatieScreening

• Diagnosis from the blood Smear (Review)
• NEJM 2005 (353) 498-507
• The international consensus group for hematology
  review suggested criteria for the action
  following automated CBC and WBC differential
  analysis
• Laboratory Hematology 2005 (11)83-90
• www.ISLH.org
• PDF te downloaden

62
Medische ValidatieScreening

• Elimination of instrument-driven reflex manual
  differential leukocyte counts optimization of
  manual blood smear review criteria in a
  high-volume automated hematology laboratory
• Am J Clin Pathol 2003 (119) 656-662
• HeMythology Medical Laboratory Observer, 2003
• 10 myths of hematology are you a believer?
• Lage aantallen wbc en differentiatie waarde?
• Factor tijd of FCM
• Staven
• De virtuele differentiatie van bloedcellen als
  hulpmiddel om de controverse van de staafkernige
  granulocyt te toetsen
• Ned Tijdschr Klin Chem Labgeneesk 2004
  (29)313-316

63
Flagging

• ICSH as many unselected samples as possible
• Echter slechts 2 weken evaluatie
• Selectie
• (Niet op basis van CD 4000)
• Op basis van afdeling
• Onco/hematologie INZO cardiochirurgie
• minder te vergelijken met waarden terug te vinden
  in de literatuur
• Vergelijking onderling
• Zelfde groep stalen op de 5 toestellen

64
Flagging

• Blasten
• Voorlopers
• Atypische lymfocyten
• (Staven)

65
Toestellen

• Flagging
• Specifiek
• Blast vlag wijst op mogelijke aanwezigheid
  blasten
• Breed
• Vlag wijst op mogelijke aanwezigheid van meerdere
  celtypes
• DX 120 Ll Ll1, LIC
• LH 750 LowOpac/LowConduc
• Xe 2100 AbnLyLBl
• Combinaties

66
Studie Flagging

• 1 groep stalen
• Start 100 tal
• 78 op alle toestellen
• Microscopie
• Blasten 10 (5 lt 5 5 gt 15) 9 met neutropenie
• Voorlopers 28
• Atypische Lymfocyten 8

67
Flagging stalen
XE DX 2120 Sapp
N 100 100 100 100
Met formule 93.3 94.3 100 100
Aantal tellingen 118 116 100 115
68
Flagging aantal
N78 XE DX 2120 Sapp
Stalen met flag 47 55 50 54
Totaal flags 98 173 110 104
69
Flagging
XE DX 2120 Sapp
Bl sen 60 100 70 40
Bl spe 85 64 84 88
Ig sen 71 86 79 79
Ig spec 90 76 82 75
At sen 38 63 38 75
At spe 67 74 86 93
waaronder Flag Blast 1 flag positief bij
neutropenie !
70
Flagging totaal
XE DX 2120 Sap
Totaal FlagTo PosMi
Sen 80 97 89 91
Spe 55 48 55 48
Totaal FlagTo BlMi
Sen 60 100 90 80
Spe 39 31 39 31
waaronder Flag Blast 1 flag positief bij
neutropenie !
71
Flagging brede
XE DX 2120 Sap
Breed AbnLyLBl LIC
N 8 27
CelMi At Ly Blast
Sen 64 45
spe 98 65
72
Besluit

• Lineariteit ok
• Precisie ok
• CO ok
• Correlatie ok enkele verchillen
• Flagging ok enkele verschillen
• Groot werk voor kleine verschillen

73
Met dank

• Collegas
• R Malfait, K Ver Elst
• D Baetens, P De Schouwer
• Evaluatie team en Laboploeg
• MLTs
• S Mahieu, E Van Gastel
• F De Beul, D Luyts, Informatica cel
• Logistieke ploeg
• Firmas