En kr

1
En kræftcelles egenskaber (udvalg)
Normal celle
Kræftcelle
Deler sig ukontrolleret
2
Tumordannelse ophobning af forandringer i
cellens gener
3
Spirende kræftceller
Fuldmodne kræftceller
Normale celler
4
To hovedtyper af cancerrelaterede gener
1. Tumorsuppressor-gener Gener, der forhindrer
en normal celle i at blive til en kræftcelle -
skal inaktiveres for at have en kræftfremkaldende
effekt
2. Proto-oncogener Gener, der kan omdanne en
normal celle til en kræftcelle - skal aktiveres
for at have en kræftfremkaldende effekt
5
Inaktivering af tumorsuppressor-gener
6
Inaktivering af tumorsuppressor-gener
7
Mutation Ændring i rækkefølgen af baser i
DNA-koden
Normal

-CGG-AAG-ATG-AAG-CCC-TGG-TTG-
-Arg-Lys-Met-Lys-Pro-Trp-Leu-
8
Påvisning af mutationer
1 Påvisning ved PCR/DGGE
9
DNA melting
Gradual heating
Abrupt heating
10
Denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE)
Wild-type DNA
Mutant DNA
-



Increasing denaturant conc.
Electrophoresis




11
Heteroduplex analysis
PCR


Homoduplices
DGGE
Heteroduplices
Homoduplices
12
(No Transcript)
13
DNA
14
(No Transcript)
15
CpG island
16
Bisulfite modification of DNA
Methylated DNA
Unmethylated DNA
5-CCGACCG-3
17
Detection of aberrant APC methylation by melting
curve analysis
Methylated APC
Unmethylated APC
18
(No Transcript)
19
(No Transcript)
20
Reactivation of gene transcription
21
Reactivation of gene transcription in breast
cancer cells (MDA-MB-231) by inhibition of DNA
methylation and/or histone deacetylation
r
d
C
-
a
z
a
r
-
d
5
C

-

a

z
A
A
a
S
S
-
T
T
5
HO
2
ER
GAPDH (control)
22

• Methotrexate (MTX)
• A reduced folate analogue
• Used in the treatment of various malignancies
• Acquired resistance is a major problem in
  cancer treatment
• Cellular uptake occurs mainly via the reduced
  folate carrier (RFC)

23
MTX
MTX
MTX
MTX
MTX
MTX
RFC
MTX
MTX
MTX
MTX
FPGS
FPGS
MTX(
glu
)n
MTX(
glu
)n
MTX(
glu
)n
MTX(
glu
)n
GGH
GGH
MTX
MTX
Lysosome
DHFR
DHFR
FH
(ATP, GTP)
(ATP, GTP)
Purine synthesis
FH
2
2
4
4
UMP
TMP
DNA
Nucleus
24
MDA-MB-231 breast cancer cells are inherently MTX
resistant
Worm et al. (2001) J. Biol. Chem. 27639990
25
RFC promoter methylation in MDA-MB-231 cells
Worm et al. (2001) J. Biol. Chem. 27639990
26
Reactivation of RFC expression by
5-aza-2-deoxycytidine
Worm et al. (2001) J. Biol. Chem. 27639990
27
5-Aza-2-deoxycytidine dipyridamole increases
MTX sensitivity in MDA-MB-231 cells
100
Control
DPM
80
5-aza-CdR
60
Cell number ( of control)
5-aza-CdR DPM
40
20
0
0.01
0.1
1
10
100
MTX concentration (µM)
Worm et al. (2001) J. Biol. Chem. 27639990
28
En kræftcelles egenskaber (udvalg)
Normal celle
Kræftcelle
Deler sig ukontrolleret
29
En kræftcelles egenskaber (udvalg)
Normal celle
Kræftcelle
Deler sig ukontrolleret
30
Skematisk fremstilling af celledelingscycklus
31
En celle i deling
32
Checkpoint Kontrolpunkt, hvor celledeling
stopper, og DNA-skader repareres, inden delingen
går videre
33
Checkpoints kontrolleres af proteiner
oncogener og tumorsuppressorer
Nogle aktører i kontrol af cellecyklus (G1)
34
Normalt DNA Proteinet varetager sin funktion og
holder cellens deling i skak
35
Muteret DNA Proteinet er defekt, og cellens
deling løber løbsk
36
Forskellige gen-forandringer kan have samme effekt
37
Genetiske forandringer i p16-Rb-Cdk4-signalvejen
i modermærkekræft
Rb
Cdk4
p16
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
21 22 23 24
38
p53 DNAets vogter
p53
39
Ved begrænset DNA-skade stopper p53 cellecyklus
40
Ved begrænset DNA-skade stopper p53 cellecyklus
41
Ved omfattende DNA-skade inducerer p53 celledød
42
Ved omfattende DNA-skade inducerer p53 celledød
43
Lymfekræft Sammenhæng mellem overlevelse og
mutationer i p16 og p53
1
Ingen mutationer
,8
,6
Overlevelse
,4
,2
0
0
20
40
60
80
100
120
140
160
Måneder
44
Nedarvning af modermærkekræft
45
Nedarvning af modermærkekræft