Universidad Nacional Autnoma de Mxico

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Universidad Nacional Autónoma de México

• Facultad de Química
• Inmunología Aplicada
• Hipersensibilidad Tipo I
• Frausto Castorena Jarumi Fernanda
• Gallardo Celis Janet
• García Hernández Liliana
• Hernández Carvajal Ixzel

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Hipersensibilidad tipo I

• Los individuos que tiende a desarrollar
  reacciones de hipersensibilidad intensas se
  denominan atópicos y se dice que sufren alergias.
  
• Los antígenos que desencadenan intensas
  reacciones de hipersensibilidad inmediata se
  llaman alérgenos.
• Atopia significa inusual, pero se sabe que la
  alergia es bastante común.

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Anticuerpo IgE

• La IgE fue la última inmunoglobulina descubierta
  (año 1967). Es el isotipo de inmunoglobulina que
  contiene la cadena pesada ?.
• Su concentración sérica y su vida media son las
  más bajas de todas las inmunoglobulinas,
  normalmente presente en el plasma en una
  concentración menor a 1 ?g/mL.

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Anticuerpo IgE

• El valor de IgE sérica se expresa normalmente en
  unidades internacionales (UI) por ml (1 UI 2,4
  ng de proteína).
• El nivel de IgE varía con la edad en la sangre
  de cordón de recién nacidos normales es interior
  a 0.5 UI/ml, y en el adulto normal es alrededor
  de 20 UI/ml.
• Se encuentra aumentada en diferentes condiciones
  alérgicas.

5
Anticuerpo IgE

• La defensa contra muchas infecciones por
  helmintos está mediada por anticuerpos IgE y
  eosinófilos.
• Los helmintos estimulan a Th2, que secretan IL-4
  e IL-5. La IL-4 estimula la producción de IgE, y
  la IL-5 estimula el desarrollo y activación de
  los eosinófilos.

6
Anticuerpo IgE
 
 
 

7
Alergénos

• Son glicoproteínas, lipoproteínas o sustancias
  químicas conjugadas con proteínas o haptenos de
  origen generalmente biológico.
• Todos los epítopos alergénicos dentro de una
  proteína producen una respuesta biológica bien
  definida y medible en individuos alérgicos.

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Alergénos

• Los alérgenos habituales consisten en proteínas
  de polen, ácaros del polvo doméstico, capas de
  animales y ciertos alimentos
• Las proteínas alergénicas pueden identificarse
  usando los anticuerpos IgE contenidos en el suero
  en combinación con numerosos ensayos
  inmunoquímicos.

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Alergénos

• Extractos de alérgenos de origen natural se
  consideran heterogéneos, debido a que contienen
  muchas proteínas alergénicas.
• Los pacientes responden a combinaciones de
  isoalergénos de forma diferente, los cuales son
  casi idénticos excepto por pequeñas diferencias
  en su composición de aminoácidos.

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Diagnóstico de Laboratorio

• Se basa en la historia clínica y examen físico
  del paciente.
• Todos los pacientes con antecedentes de una
  alergia pueden tener un resultado positivo en la
  prueba de IgE específica-alérgeno.

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Pruebas Cutáneas

• Se usan en el diagnóstico de las enfermedades
  alérgicas inducidas por alergenos inhalados y por
  alimentos.
• Pueden ser epicutáneos ("prick" o punción y
  "scratch" o escarificación) o intracutáneos
  (intradérmicos).

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Pruebas Cutáneas

• Se produce una respuesta positiva cuando el
  alergeno se une a las moléculas de IgE
  específicas presentes en la superficie de las
  células cebadas de la dermis causando su
  entrecruzamiento.
• Esta reacción Ag-Ac causa la rápida liberación
  (en 15 a 20 min) de mediadores químicos como la
  histamina y otros, responsables de la respuesta
  edematosa rodeada de un eritema.
•    

13

• Formación del
• habón

14
Pruebas Cutáneas

• Son simples de efectuar, seguros, rápidos y
  económicos. Sin embargo, están sujetos a
  numerosas variables relacionadas tanto con la
  técnica misma como con el paciente.
• Los alergenos a usar dependen de la historia
  clínica, de la edad del paciente, y de la
  exposición ambiental.

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Pruebas Cutáneas (Interpretación)

• Puede registrarse el diámetro promedio del edema,
  el diámetro mínimo de un edema significativo (gt2,
  3, 4, o 5 mm).
• Se recomienda en general la medición de los
  diámetros mayores,  tanto del edema como del
  eritema y sus correspondientes diámetros, y su
  interpretación en relación con el control
  negativo y positivo.

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Pruebas Cutáneas (Interpretación)

• Un prick test igual o mayor que el control de
  histamina probablemente es de relevancia clínica,
  en cambio, reacciones menores que la causada por
  histamina son probablemente irrelevantes.

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Tabla 14.3. Tabla de lectura de pruebas cutáneas
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Pruebas Cutáneas

• Los siguientes medicamentos pueden interferir
  con las pruebas cutáneas y deben evitarse
• Antihistamínicos, tanto de acción rápida como
  prolongada (el astemizol puede interferir hasta
  por 6 semanas).
• Antidepresivos tricíclicos como, la doxepina,
  clorpromazina, hidroxicina.
• Uso prolongado de esteroides tópicos potentes en
  el sitio de la prueba.

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Pruebas Cutáneas

• Método de tamizado (screening) más útil en la
  identificación de atopia, tanto en casos
  individuales como en grupos de individuos.
• Un test posiftvo sólo identifica la presencia de
  anticuerpo (Ac) IgE contra el Ag usado, lo que en
  un paciente sintomático no permite suponer que
  estos Ac sean los responsables de los síntomas,
  sin considerar cuidadosamente la historia del
  paciente, puede constituir una manifestación de
  alergia actual, o ser el resultado de una,
  sensibilización previa.  

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PRUEBAS DIAGNÓSTICO

• IgE total en suero
• Triptasa de las células mastoides
• IgG específica para el veneno de Hymenoptera
• Medida de la cantidad de leucotrienos, así como
  de la cantidad de proteínas granulares de los
  eosinófilos, y óxido nítrico
• Precipitinas para PH

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ENSAYO RAST
Medición de la respuesta
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Ensayo RAST de 2a. Generación.

• Mayor cantidad de alergenos y de mejor calidad
• Nuevas matrices
• Nuevos marcadores
• Calibración que permite obtener datos de forma
  cuantitativa
• Son ensayos más sensibles, específicos,
  cuantitativos, reproducibles y automatizados
• Sin embargo se deberá tener un estricto control
  de calidad.

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Comparación de resultados en los ensayos de piel
y suero
24
Ensayos de cernimiento para multialergenos IgE

• Se emplean alrededor de 15 alergénos
• Permite confirmar la ausencia de enfermedades
  atópicas o bien que no estén mediadas por IgE
• Reducen la necesidad de realizar múltiples
  pruebas de forma in vitro o in vivo.

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IgE total en suero

• Única prueba regulada
• Se emplea la fase estacionaria más adecuada
• Se emplean los marcadores adecuados
• La sensibilidad analítica del ensayo es de 0.5 a
  1 mg/L
• Resultados reportados de acuerdo a la edad del
  paciente

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HABILIDAD DE LA PRUEBA PARA EL TOTAL Y
ANTICUERPOS ALERGENO ESPECIFICO DE IgE

• CLIA-88 requiere un estudio de habilidad externo.
• El estudio consiste en el análisis de 5 pruebas
  cada 17 semanas (3 ciclos por año), para el el
  total de IgE en suero y 5 para anticuerpos IgE
  alergeno-especifico, y un multialergeno.
• Para el suero total se informan, la media, SD,
  coeficiente de variación y el valor medio, bajo y
  alto, para cada método.
• Los laboratorios que reportan el total de IgE en
  suero fuera de media /- 3 SD, son clasificados
  como fuera de control.
• Los IgE alergeno-especifico son analitos no
  regulados por los estatutos de CLIA-88

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RAST ENSAYO DE VENENO POR INHIBICION COMPETITIVA

• Similitud estructural entre avispas vespid y
  Polistes. REACTIVIDAD- CRUZADA
• Los alergénos del veneno son hialuronidasa,
  fosfolipasa A1/B y antigeno 5.
• Se usa para definir bien la composición
  terapéutica apropiada de venenos por la picadura
  de insecto a pacientes alérgicos que tienen
  sensibilidad multiple a reactividad-cruzada
  potencial y son elegidos para recibir
  inmunoterapia.

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• Esta prueba se indica para pacientes que tiene
  una respuesta superficial fuerte o un nivel alto
  de anticuerpos IgE en suero, al veneno de
  chaqueta amarilla (YJV) y una reactividad
  superficial débil o un nivel bajo de anticuerpo
  IgE específico en suero para el veneno de avispa
  Polistes (PWV).
• El suero de un paciente que contiene anticuerpos
  especificos IgE YJV y PWV es preincubado con YJV
  soluble (veneno heterologo), PWV (veneno homologo
  control), o buffer (control no inhibidor).
• Las mezclas son incubadas en tubos separados con
  PWV allergosorbent y el ensayo se completa
  normalmente con la final adición de anticuerpo
  IgE antihumano marcado.

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• La cantidad de IgE anti-PWV unida al
  PWV-allergosorbent es medida, si existe una
  inhibición gt 95 de ligar al anticuerpo con el
  YJV soluble es considerada una completa
  inhibición-cruzada.

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HYMENOPTERA IgG VENENO-ESPECIFICO.

• Clínicamente la inmunoterapia exitosa se acompaña
  casi siempre por los niveles altos de IgG en
  suero alergeno-específico. Sin embargo en
  pacientes con rhinitis alergica donde por regla
  general se mide IgG (o subclases) no hay
  correlación con la mejora en los sintomas
  clínicos de pacientes con inmunoterapia de veneno.

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• Se realizó un estudio utilizando el suero de 109
  pacientes veneno alergicos. Con el proposito de
  examinar si los niveles de IgG pudieran predecir
  el riesgo de una reacción sistémica después de la
  picadura en los pacientes que reciben
  inmunoterapia.
• De 211 picaduras realizadas en este grupo en un
  período de 4 años, los síntomas sistémicos
  ocurrieron en 16 de aquellos con un nivel de
  anticuerpos IgG veneno específico lt3 ug/mL y en
  sólo 1.6 de aquellos con un nivel de anticuerpos
  IgG veneno específico gt 3 ug/mL. La proporción
  más alta de reacciones alérgicas (26) ocurrió
  entre pacientes que tenían ambos un nivel de
  anticuerpo IgG veneno específico lt3 ug/mL y lt4
  años de inmunoterapia de veneno.
• El estudio concluyó que la cantidad de anticuerpo
  IgG veneno-específico puede ser de valor para
  individualizar la dosis y frecuencia de
  inyecciones mientras aumentan al máximo los
  efectos protectores. Esta es la utilidad clínica
  de medir el anticuerpo IgG veneno-específico, sin
  embargo, parece ser restringida a los primeros 4
  años de inmunoterapia de veneno.

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ANTICUERPO IgG PRECIPITADO

• HP, también llamada alveolitis alérgica
  extrínseca, es una reacción inflamatoria en la
  parte intersticial del pulmón y la parte terminal
  del bronquiolo que resultan de la exposición
  crónica a antígenos orgánicos.
• La histología de la lesión pulmonar indica una
  patología mediada por células la mayoría de los
  pacientes con HP desarrolan niveles altos de IgG
  vs. el antigeno orgánico en la sangre.
• En el laboratorio clínico todavía se realiza la
  difusión doble clásica (ouchterlony).

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34
Triptasa de Células Mast

• Serin esterasa de 4 subunidades cada una con un
  sitio enzimáticamente activo.

35
Triptasa de Células Mast

• ?-protriptasa (número de mastocitos)
• ?-triptasa (activación de mastocitos)
• ?-protriptasa triptasa total - ?-triptasa

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Ensayo BHTBasophil Histamine Release

• Determinar la potencia de extractos alergenos
• Detectar la presencia de IgE alergeno-específica
  en la superficie de basófilos
• Prueba Directa (Direct Challenge)
• Sensibilización Pasiva

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Ensayo BHTBasophil Histamine Release
Incubar con diferentes concentraciones del
extracto alergeno
DC
Leucocitos
Liberación de Histamina
Antígeno
SP
Incubar con suero que contiene anticuerpos IgE
Cuantificación de histamina en el sobrenadante
por técnicas enzimáticas, radiométricas o
espectrofluorométricas
Basófilos
38
CDR del ensayo BHT
100
Liberación de Histamina
50
0
alergeno
Sensibilidad Relativa
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Pruebas in vivo (Diagnóstico)

• Broncoprovocación
• Identificar la relación entre una sustancia
  inhalada y el cambio en la fisiología bronquial
  del paciente.
• Útil en el diagnóstico de casos difíciles de
  asma.
• Se lleva a cabo administrando metacolina o
  histamina y además un alergeno en dosis
  crecientes.
• Se toma como respuesta positiva a la
  concentración del agonista en una gota de
  volumen de expiración 1 segundo o más después
  de el tiempo de preprovocación.

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Pruebas in vivo

• Provocación Nasal
• Administración de un buffer y de un alergeno a
  diferentes concentraciones.
• Se evalúan los síntomas posteriores a la
  concentración correspondiente administrada
  (número de estornudos inducidos y/o la
  concentración de mediadores liberados por
  mastocitos o la albúmina liberada en el fluido
  nasal).

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Pruebas in vivo

• DBPCFC (Double-blind, placebo-controlled food
  challenge).
• Ingestión controlada de alimentos frecuentemente
  consumidos y que contienen potentes
  alergenos.
• Leche de vaca (caseína, ?-lactoglobulina,
  ?-lactoalbúmina)
• Huevo (ovoalbúmina, ovotransferrina)
• Cereales (trigo, centeno, cebada, avena)
• Legumbres (cacahuates, soya)
• Pescado y mariscos (camarón, langosta,
  cangrejo)

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Pruebas in vivo

• Se elimina la ingesta de las comidas
  sospechosas entre 7 y 14 días antes de la
  prueba.
• Se administran diferentes cantidades de comida
  liofilizada o en cápsulas.
• Se excluyen una reactividad de importancia
  clínica si se toleran 10 g de el liofilizado o
  la comida en cápsulas.

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Pruebas de aeroalergenos en interiores

• Se colecta el polvo en una determinada área.
• Se extraen alergenos solubles
• Se cuantifican por anticuerpos monoclonales
  basados en ensayos inmunoenzimáticos

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Principales aeroalergenos (interiores)
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Pruebas de aeroalergenos en interiores

• Se utiliza una placa rotatoria que se expone al
  medio ambiente
• Las partículas suspendidas en el aire se pegan
  a esta placa.
• Generalmente se reportan niveles de polen
  (granos por m3) y moho (esporas por m3).