Presentaci

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CINÉTICA ENZIMÁTICA
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• Proteínas con actividad catalítica de los seres
  vivos.
• Unidades del Metabolismo
• Regulan la vel. de las reac. quím. espontáneas
  (DG-).
• No promueven reacciones no-espontáneas (DG ).
• Incrementan la Vel. De reacción 103 a 1012 veces
  sin afectar el sentido de la reacción.
• No forman parte del producto de la reacción.

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PROPIEDADES GENERALES

• AUMENTAN LA VELOCIDAD DE REACCIÓN
• De 106 to 1012 veces vs sin enzima.
• Aún más rápido que los catalizadores químicos.
• CONDICIONES DE REACCIÓN
• Temperatura 25-40 oC (algunas hasta 75 oC)
• pH neutro (5-9), la mayoría 6.5 7.5
• Presión atmosférica normal
• CAPACIDAD DE REGULACIÓN
• Por concentración de sustrato
• Por concentración de enzima
• Por inhibidores competitivos (semejantes al
  sustrato)
• Por inhibidores no competitivos (modificación
  covalente de la enzima)
• Por regulación alostérica
• ALTA ESPECIFICIDAD DE REACCIÓN
• Interacción estereoespecífica con el sustrato
• No hay productos colaterales

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ALTA ESPECIFICIDAD DE REACCIÓN INTERACCIÓN ESTER
EO ESPECÍFICA CON SU SUSTRATO
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Los Substratos se acercan a la Enzima (sitio
Activo)
Enzima
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Los reactivos interaccionan con la enzima
(sitio activo)
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Cambia la configuración de la enzima
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La unión del sustrato produce un cambio
conformacional de la enzima hexoquinasa (cinasa),
la cual es monomérica.
Substrato de glucosa
Sitio de enlace
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Se realiza la reacción catalítica
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ECUACIÓN DE MICHAELIS-MENTEN
Vo V max S Km S
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Cinética enzimática en función de la
concentración de sustrato
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Vmax
KM
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Km de algunas enzimas
ENZIMA SUSTRATO
Km (mM)
Catalasa H2O2
25.0 Hexoquinasa ATP 0.4
D-Glucosa 0.05
D-Fructosa
1.5 Anhidrasa carbónicoa HCO3-
9.0 Quimotripsina Gliciltirosinilglici
na 108.0 N-Benzoiltirosinamida
2.5 ?-Galactosidasa D-Lactosa
4.0 Treonina deshidrogenasa L-Treonina 5.0
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La KM es un parámetro de Actividad Enzimática

• La KM es inversamente proporcional con la
  actividad de la enzima.
• Valor de KM grande, baja actividad
• Valor de KM pequeño, alta activida

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Enzimas pueden catalizar reacciones donde hay 2
S
Hexocinasa
ATP Glucosa ? ADP 6-fosfato de glucosa
2 Rutas

• Desplazamiento Simple, los 2 S se unen a la E

A B E ? EAB ? C D

• Doble desplazamiento o ping-pong

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Determinación Cuantitativa de la Cinética
Enzimática

1. La reacción global
2. Procedimeinto analítico para determinar elS que
   desaparece o el P que aparece
3. Sí el E requiere Cofactores (iónes o coenzimas)
4. La dependencia de la actividad enzimática con la
   S o se la KM del S.
5. El pH óptimo
6. Un intervalo de temperatura en la que la E es
   estable y muestra actividad elevada.

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Actividad enzimática y variación del pH
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Vmax? KM?
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Transformación de los Dobles Recíprocos (Lineweave
r-Burk)
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Gráfica de Eadie-Hofstee
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Cuando Vo Vmax Todos los sitios activos están
ocupados y no hay moléculas de E libre. KM S
Sí... ½ Vmax KM representa la cantidad de
sustrato necesaria para fijarse a la mitad de la
E disponible y producir la mitad de la Vmax KM
representa la concentración del sustrato en una
célula
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Inhibidores
Reactivos químicos específicos que pueden inhibir
a la mayor parte de las enzimas.
Irreversibles Reversibles
INHIBIDORES
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Inhibidor Irreversible

• Inhibición permanente
• Unión irreversible por medio de enlaces
  covalentes.
• Modificaciones químicas de los gps. catalíticos.
  
• Modificada la enzima, está siempre inhibida.
• Para distinguirlo de los reversible se someten a
  diálisis y si no se separan enzima e inhibidor,
  éste es permanente.

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Inhibidor Irreversible
Fluorofosfato de diisopropilo (DFP)
Acetilcolinesterasa
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Inhibidor Irreversible
Fluorofosfato de diisopropilo (DFP)
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Fluorofosfato de diisopropilo (DFP)
Serina
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Inhibidor Reversible

• La unión del inhibidor y la enzima es
  reversible.
• Al quitar el inhibidor del medio, se recupera la
  actividad.
• Hay 3 tipos
• Competitiva
• No Competitiva
• Acompetitiva  (Alostérica)

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Antibióticos Insecticidas Hervicidas Venenos Difer
entes Medicamentos
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Inhibición Competitiva
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Vmax igual KM diferente
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Inhibidores Competitivos
Malonato Deshidrogenasa del ácido
succínico Sulfas Infecciones microbianas Antihipe
rtensores Captopril y Enalopril Alopurinol
Controla la gota Fluoruracilo Cáncer
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Inhibición No Competitiva
El inhibidor NO se une al sitio activo
NO se puede revertir con un exceso de sustrato
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Vmax diferente KM igual
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Cinéticas de Inhibición
1
V
No inhibitor
0
1/S
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Inhibición acompetitiva
El inhibidor se une a una SUBUNIDAD reguladora
I
La subunidad catalítica une al sustrato y
cataliza la reacción
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