Tetrahymena

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Tetrahymena

• Etudes de protéines durant un stress toxique par
  immunodétection

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Buts à long terme

• Comprendre les mécanismes moléculaires de réponse
  aux produits toxiques, chocs oxydatifs et autres
  "stress chimiques"
• Trouver des marqueurs potentiels de toxicité
• Evaluation de la qualité de l'eau
• Evaluation de la toxicité de produits chimiques
• QSAR

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Objectifs du projet

• Identifier la protéine 32 k par immunodétection
• Déterminer les paramètres d'induction de cette
  protéine
• Cinétique
• Concentration de toxique
• Type de toxiques
• Synergie
• Etc.

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Objectifs du projet (alternatives)

• Identification par PCR
• Identifier gène dans génome Tetrahymena
• Définir sonde spécifique
• Obtenir sonde
• Développer protocole
• Résultat négatif gt ????

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Culture des cellules

• Culture stock
• Culture de conditionnement
• Culture de travail
• Incubations

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Traitements

• Contrôle
• Choc thermique
• Toxiques/stress
• Concentration, durée, cinétique
• Toxiques, Stress oxydatif, inhibiteurs

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Incubations

• 2.5 x 105 cell/mL
• Volume total 1 mL
• Durée 45 min
• Milieu culture
• Contrôle
• Aucun toxique -
• 34C (choc thermique)

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Extraction des protéines

• SDS ou phénol

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Electrophorèse

• Système de Laemlli (SDS)
• Gels 5/12.6
• Electrobuvardage
• Semi-sec
• Nitrocellulose ou PVDF

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Immunodétection

• Ab secondaire conjugué phosphatase alc.
• Détection chromogénique ou chémifluorescence
• Etalons
• Contrôle interne actine
• Ag actine, 32k (rat),

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Autres protéines intéressantes

• Métallothioénine
• GRP76
• HSP.