Pr

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Laboratoire de Nutrition et Sécurité
Alimentaire. INRA-Jouy-en-Josas
Etude de limplication des récepteurs nucléaires
PXR, CAR dans les interactions entre flore
digestive et épithélium colique.
Arnaud sansonetti
Master 2  Nutrition Métabolisme Energétique et
Signalisation  (Paris VII)
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Le côlon

• Absorption deau et délectrolytes.
• Digestion et absorption des aliments non digérés
  au niveau de lintestin grêle.
• Présence dune flore bactérienne
• - abondante ? 109 à 1011 bactéries par gramme de
  contenu,
• complexe ? 300 à 400 espèces.

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Le côlon Siège de nombreuses bio-transformations
de xéno- et dendobiotiques
Épithélium intestinal
Cellule bactérienne
Composés exogènes et endogènes
Xéno- et endobiotiques
Enzymes du métabolisme des xénobiotiques (enzymes
de phase I cyp450 et enzyme de phase II GST,
UGT)
Biotransformation

Molécules biotransformées
Molécules biotransformées

Molécules biotransformées
Transporteur
foie
fécès
Lumière intestinale
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Objectifs

• Etude de lexpression de gènes codant des
  protéines impliquées dans le métabolisme et le
  transport des xénobiotiques en présence ou en
  absence de flore.
• Etude des mécanismes impliqués dans la
  régulation de ces gènes par la flore digestive.

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Matériel et méthodes
3 mois
Northern Blot
ARN
Rat Cv
Rat Cv
Isolement des cellules épithéliales colique
Rat Ax
Rat Ax
Rat Ax
Rat In
Prep de noyaux/protéine nucléaire
Retard sur gel
Inoculation de fécès de rat Cv 2j, 14j, ou 30j
avant labattage
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La flore digestive modifie t-elle lexpression de
gènes codant des protéines impliqués dans le
métabolisme et le transport des xénobiotiques ?
MRP2
Ax
In2j
In14j
In30j
Cv
GSTPi
Ax
In2j
In14j
In30j
Cv
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PXR, CAR 2 récepteurs nucléaires qui contrôlent
lexpression de gènes impliqués dans le
métabolisme et le transport des xéno- et des
endobiotiques.

• Facteurs de transcription dont lactivité est
  dépendante de ligands.
• Leurs gènes cible codent des protéines
  intervenant dans le métabolisme et le transport
  des xéno- et des endobiotiques (enzyme de phase
  I, de phase II, et transporteur).
• Localisation tissulaire restreinte.

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Mise au point technique du complexe PXR dans les
cellules épithéliales coliques
Compétition
Sonde libre
PXR-ER
PXR-ER muté
CAR-ER
Poly dI/dC
Complexe PXR
Sonde libre
Mise en évidence dune protéine nucléaire capable
de fixer spécifiquement lER-PXR dans les
cellules épithéliales coliques.
9
Le complexe PXR/PXR-ER est-il modifié par la
flore ?
Sonde libre
Sonde libre
Ax
In2j
In14j
In30j
Cv
PXR-ER mutée
PXR-ER
Sonde libre
?
10
La quantité dARNm de PXR est-elle modifiée par
labsence de flore ?
Cv
Ax
ARNm PXR
NON, la flore ne modifie pas la quantité dARNm
de PXR.
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Le complexe CAR/CAR-ER est-il modifié par la
flore ?
Sonde libre
Sonde libre
Ax
In2j
In14j
In30j
Cv
Complexe CAR
Sonde libre
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Quantification de CDX2 dans les extraits
nucléaires provenant de cellules épithéliales
coliques danimaux axéniques, inoculés et
conventionnels
Sonde libre
Ax
Cv
In2j
In14j
In30j
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Conclusions

• La flore module la quantité dARNm codant
  certaines protéines qui interviennent dans le
  métabolisme et le transport des xénobiotiques.
• La flore module la quantité de PXR (CAR?) dans
  le noyau ou leur capacité à fixer leur élément de
  réponse.
• Il existe un décalage entre la restauration de
  lexpression des gènes cible modulés par la flore
  et la restauration de lactivité des récepteurs
  nucléaires.

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Perspectives

• Autres récepteurs nucléaires de lépithélium
  colique cible de la flore digestive ?
• Ligands des récepteurs nucléaires coliques
  dérivés de la flore ?