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Neurochimie

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Au sens tymologique, la neurochimie est une discipline vou e ... analytiques. lectrophor se. Electrophor se capillaire. Chromatographie liquide haute ... – PowerPoint PPT presentation

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Title: Neurochimie


1
Neurochimie
  • L2-S4
  • (2007-2008)

Philippe De Deurwaerdère, UBdx2
2
De quoi parle-t-on ?
  •  Au sens étymologique, la neurochimie est
    une discipline vouée à l'étude biochimique du
    système nerveux mais, au-delà de toute
    restriction à ses seules dimensions
    technologiques, elle représente plutôt une
    modalité d'approche des neuro-sciences,
    caractérisée par l'utilisation principale mais
    non restrictive des moyens techniques de la
    biochimie. Ainsi la neurochimie apparaît-elle
    comme l'une des dimensions d'une conception
    multidisciplinaire de la neurobiologie,
    c'est-à-dire de la biologie et de la
    physiopathologie du système nerveux. 

Professeur André Nieoullon pour Encyclopédie
Universalis
3
Les techniques biochimiquesanalytiques
  • Électrophorèse
  • Electrophorèse capillaire
  • Chromatographie liquide à haute performance
  • Electrochimie
  • Spectrométrie (masse, RMN)
  • Immunochimie Immunodétection (test Elisa)..

4
Quels constituants ?
  • Neurotransmetteurs (peptides amines biogènes
    acides aminés lipides)
  • Hormones (peptides stéroïdes amines)
  • Métabolisme
  • Facteurs diverses
  • Récepteurs/Transporteurs
  • Enzymes

5
Quels index ?
  • Libération (extracellulaire)
  • Métabolites (extracellulaire et intracellulaires,
    tissulaires, sanguins, urinaires)
  • Hormones circulantes (dosages sanguins,
    tissulaires)
  • Métabolisme général

6
Résumé
Comment
Pourquoi
Quoi
  • Contraintes techniques
  • Détection (sensibilité)
  • Grandeurs biologiques
  • Modalités de récupération

Approche neurochimique de la neurotransmission
7
Métabolisme versus libérationpoint de vue
historique
Mesure du neurotransmetteur et de ses métabolites
dans des extraits de cerveau
sacrifice
dissection
4C
Surnageant (contient les molécules dintérêt)
centrifugation
broyage
Culot (contient protéines et constituants
cellulaires)
8
Surnageant (contient les molécules dintérêt)
9
DOPAC
Catechol-O-methyl transferase
3-methoxytyramine (3-MT)
HVA
10
Tryptophan-5-hydroxylase
11
Propriétés chimiques de ces molécules
oxydo-réductibles électrochimie
oxydation (?)/reduction (?) of norepinephrine
Courant
(2 e-)
(2 e-)
12
Ce quon peut faire avec le métabolisme quand on
est intelligent!
Les années 50-60 et la maladie de Parkinson
13
Niveaux tissulaires de dopamine chez lhomme
14
Réserpine et halopéridol
Deux molécules produisant une baisse de
lactivité locomotrice chez lanimal. Quels sont
leurs effets sur le métabolisme ?
15
Effet de la réserpine sur le contenu tissulaire
en catécholamines dans différents tissus
Interprétez
Almgren et al. 1976
16
Effet de la réserpine dans le cerveau
17
Effet de lhalopéridol sur la synthèse de DOPA,
précurseur de la dopamine
Halopéridol antagoniste des récepteurs
dopaminergiques D2 NSD1015 inhibiteur de la
décarboxylase des acides aminés
18
Interprétation
Réserpine baisse le métabolisme, la dopamine
tissulaire et produit un syndrome parkinsonien
DOPA
Halopéridol augmente le métabolisme, la dopamine
tissulaire et produit aussi syndrome parkinsonien
DA
Récepteurs dopaminergiques
19
5,7-dihydrotryptamine (5,7-DHT)
6-hydroxydopamine
Raphé dorsal
Substance noire compacte
20
La libération
In vivo
In vitro
Push pull cannula Voltamétrie Microdialyse
intracérébrale
Tranches de cerveau Synaptosomes Cultures
cellulaires
chargé
endogène
Néo-synthétisé
21
La libération in vitro
Condition chargée incubation préalable de la
tranche dans un bain contenant le 3H-NT
Condition Néosynthétisée incubation préalable de
la tranche dans un bain contenant le
3H-précurseur du NT dintérêt
Condition Endogène
22
Synaptosomes
23
Protocole
sacrifice
dissection
4C
Centrifugation douce
24
AnTx agoniste nicotinique
25
15 mM KCl, 100  µM 4-aminopyridine (4-AP), 1  µM
ionomycin or 30 mM caffeine from human brain
cortex synaptosomes in superfusion and their
Ca2-dependency
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