Prsentation PowerPoint

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(No Transcript)
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Control CMML
Deux populations de monocytes dans le sang des
patients atteints de LMMC
3
Control CMML
Le défaut de différenciation des monocytes de
patients atteints de LMMC, détecté ex vivo, nest
que partiel
Events
Events
CD14 CD14

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CD14 CD14 positive negative
All cells
On peut séparer les monocytes de LMMC en
fonction de lexpression de CD14
5
Les monocytes de patients atteints de LMMC nont
pas la même capacité de différenciation selon
quils expriment ou non CD14
All cells CD14 positive CD14 negative
CD 71
CD 163
6
La place de chaque population varie dun patient
à un autre.
CD14- 31 52 99 55 76 90 40 81 61 3 4
CMML 35 36 37 38 42 43 45 46 47 48 Co
CD14 69 48 1 45 24 10 60 19 39 97 96
   
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Le phénotype des cellules CD14- est très
différent de celui des cellules CD14
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CD36 un récepteur multi-fonctionnel
CD36 FAT GPIV GPIIIb PAS IV

• Roles physiologiques dans
• La nutrition récepteur du  gras 
• Langiogénèse
• La biologie des plaquettes
• La réponse immunitaire
• Le métabolisme musculaire

Rôles physiopathologiques dans Les maladies
métaboliques Les maladies infectieuses Les
affections malignes La maladie dAlzheimer
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Le gène CD36
Gène humain chromosome 7q (7q11.2) 15
exons 5UTR, protéine,3'-UTR Régulation PPAR /
RXR / FoxO1
Nombreux transcrits (5 exons 1 alternatifs par
exemple) et SNP Mutations qui préviennent son
expression sur toutes les cellules (Type
I) Mutations qui préviennent son expression sur
les plaquettes (Type II 0,3 à 3) Surtout dans
des populations africaines ou asiatiques
(pression de sélection ?)
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Quels facteurs inflençent lexpression de CD36 ?

• Expression stimulée dans les monocytes /
  macrophages par
• Adhésion, différenciation
• Certains récepteurs nucléaires (rosiglitazone)
• Certaines cytokines (IL-4, via PKC et PPARg)
• Anti-diabétiques (thiazolidinediones), glucose
  et insuline
• LDL (natives ou modifiées), cholestérol

• Expression diminuée dans les monocytes /
  macrophages par
• Cytokines (IL-10 par exemple)
• La plupart des statines

• Redistribution des stocks intracellulaires vers
  la membrane
• Dans les monocytes / macrophages
• Dans les cellules musculaires en réponse à la
  contraction, à linsuline
• (effet bloqué dans
  lobésité et la résistance à linsuline)

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La protéine CD36

• Protéine membranaire de
• 471 AA PM théorique 53 kDa
• PM réel 80-90 kDa (très glycosylée)
• Phosphorylable sur la thréonine 92
• Deux courts
• domaines intracytoplasmiques
• Une paire de cystéines
• sur chaque palmytoylée
• Localisée dans les
• radeaux lipidiques
• et les cavéoles

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La protéine CD36

• Très conservée au cours de lévolution
• Chez lhomme
• CD36 LIMP-II lysosomale
• Homme / Rongeurs
• très proches
• Drosophila 2 homologues
• Croquemort (phagocytose corps apoptotiques)
• et Emp (plus proche de LIMPII)
• Caenorrhabditis 3 homologues

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Quelles modifications post-traductionnelles ?
6 cystéines extracellulaires 3 ponts
disulfures 7 sites de glycosylation
protecteurs ? 2 sites de palmitoylation /
acylation 1 site de phosphorylation sur
thréonine 92 (inhibe linteraction avec les
ligands)
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Où est exprimée CD36 ?

• Cellules hématopoïétiques
• mégacaryocytes et plaquettes (Naka antigen),
• réticulocytes et précurseurs érythroïdes
• monocytes, macrophages et cellules dendritiques
• Cellules endothéliales
• Adipocytes
• Epitheliums cutané, rénal, intestinal, du
  sein, de la rétine
• - Hépatocytes (dans certaines circonstances)
• Cellules musculaires et cur
• Dans les radeaux lipidiques / cavéoles de la
  membrane plasmique

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Les ligands de CD36
Plutôt une structure générale Quune ou des
séquences peptidiques spécifiques
CD36 permet lendocytose de la plupart de ces
ligands .. sauf LCFA CD36 est le médiateur de
leffet déstructurant des radeaux lipidiques des
oxLDL. Affinité pour ses ligands modulée par
phosphorylation de la thréonine 92
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Quelles sont les fonctions du récepteur CD36
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CD36 et le goût du gras
CD36 reconnaît les acides gras à longue chaîne
Bourgeon du goût 50-100 cellules avec CD36
exprimé du coté apical Signal transmis aux
fibres nerveuses Prépare lintestin à la
digestion des graisses.
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CD36, transporteur des AGLC

• CD36 Fatty Acid Translocase
•  transporteur ou translocateur ? 
• Dans les adipocytes
• Dans les cardiomyocytes Rôle essentiel de
  loxydation des AGLC au niveau du cur et du
  muscle (cf Naka)
• augmente si diète
• diminue si régime riche en gras
• Régule loxydation des AG avec la carnitine
  palmitoyl transférase 1.
• Mutation à lorigine dune forme congénitale de
  cardiopathie hypertrophique ?

Imagerie scintigraphie myocardique au
BMIPP (b-methyl I-123-iodophenyl-pentadecanoic
acid
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CD36, un rôle physiopathologique dans le diabète ?
Exprimé et régulé dans le muscle, le cur, le
tissu adipeux Transport des AGLC Souche de
souris diabétique mutation de CD36 phénotype
corrigé par knock-in de la forme sauvage (mais
souris CD36 KO non diabétiques) Incidence
élevée du diabète ches les sujets NAKa Rôle
dans la résistance à linsuline
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CD36, molécule inhibitrice de langiogénèse
Un mécanisme possible TSP-1 ou LDLoxy activent
CD36 Qui recrute Fyn Qui active p38 Qui active
des caspases Qui tuent la cellule endothéliale
Applications Peptides TSP1 et mimétiques
TSP1 dans le cancer ou la rétinopathie diabétique
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La néo-angiogénèse en cancérologie
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Les thrombospondines 1 et 2
Famille de molécules définie par la présence de
motifs  type 1 repeat  TSP-1 trimère,
archétype de la protéine de la matrice
extracellulaire
EGF-like
Calcium binding
Liaison à lhéparine et LRP (éboueur)
Integrin-associated Proteins (IAP, CD47)
CD36 plaquettes, monos et c. endoth., Gp120
HIV1
Application potentielle TSP1 ou peptides
(dérive des type 1 repeat domains) Limite la
croissance des gliomes chez la souris nude Via
effet anti-angiogénique
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CD36, éboueur des cellules apoptotiques
Les macrophages reconnaissent à la surface des
corps apoptotiques oxPS un peu OxPC mais pas
les PS non oxudées. MS il existe à la surface
des corps apoptotiques dautres stuctures ligand
potentiels de CD36
Biopsies cutanées Cellules apoptotiques
fluorescentes 8 jours après brulure.
Impliqués CD36 différentes intégrines Parfois
très spécifique DC, photorécepteurs
Greenberg ME et al, J Exp Med, 2006
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CD36, facteur aggravant du paludisme ?
Les sporozoïtes sont injectés dans la circulation
par un moustique femelle qui prend son repas
(sang humain)
Cycle hépatique Les sporozoïtes infectent les
cellules hépatiques, se transforment en
schozontes qui libèrent des mérozoïtes dans la
circulation
Dans lintestin du moustique, les gamétocytes
forment des gamètes qui produisent des
sporozoïtes infectieux, lesquels migrent dans les
glandes salivaires
Les gamétocytes sont ingérées par un moustique
femelle qui prend son repas (sang humain)
Cycle érythrocytaire Les mérozoïtes infectent les
GR et deviennent des trophozoïtes qui libèrent
plus de mérozoïtes
Certains des mérozoïtes qui infectent les GR
deviennent des gamètes mâles ou femelles
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CD36, facteur aggravant du paludisme ?
Plasmodium falciparum Exprime des protéines
(PfEMP-1 au moins 5) à la surface des
érythrocytes
Qui induisent ladhésion de ces érythrocytes
infectés à lendothélium microvasculaire (peau,
muscle et autres organes) via CD36, (ainsi que
TSP, ICAM-1, VCAM-1).
Cette adhésion prévient leur élimination lors de
leur passage dans la rate.
Si très fort forme cérébrale de la malaria,
parfois létale (une des 3 causes de mort par
paludisme).
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II Inflammation, métabolisme oxydatif (NO,
H2O2, MPO)
IV Génération de dérivés lipidiques via la
lipooxygéase notamment ligands de PPAR?
III LDL converties en ligands de CD36 et autres
scavenger receptors (SR). Internalisation des
oxLDL via CD36
V Dimérisation de PPAR? avec différents
partenaires tels que RXR, migration nucléaire,
transcription de gènes cibles
VI - Parmi les cibles PPAR? et CD36
positive feedback loops qui induit laccumulation
desters de cholesterol dans les macrophages
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Effets des LDLox sur les macrophages
OxLDL se lient à CD36 Ce qui active PPAR?, ce
qui accroît CD36 Ce qui active NF?B, ce qui
induit diverses cytokines Ce qui active des
kinases telles que Lyn, MEKK2, JNK1, JNK2. Tous
ces évènements contribuant à la formation de
cellules spumeuses
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CD36, molécule pro-thrombotique

• Dyslipidémies Thromboses
• Expression Infarctus (myocarde, cérébral)
• Mécanisme hyper-réactivité plaquettaire
• Ce qui est nouveau
• Pourquoi ? Interaction oxPCCD36 / CD36
• Où ? À la surface des plaquettes

• Méthodes
• Modèle de thrombose mésentérique chez la souris
• Microscopie intravitale
• Souris CD36 -/- rien
• Souris CD36 -/- , Apoe -/- moins de thromboses

Conclusion CD36 activé prépare la plaquette à
laction des agonistes classiques
Podrez EA et al, Nature Medicine, 2006
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Dautres fonctions de CD36
Co-récepteur de ligands de TLR2 phagocytose de
bactéries Gram positive (comme Staphylococcus
aureus) par les macrophages
Récepteur de lhexaréline (growth hormone
releasing peptide), en compétition avec les LDL
oxydées (effet protecteur dans lathérosclérose ?)
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Quelle signalisation en aval de CD36 ?
Type cellulaire et ligand dépendant Commence
très souvent par le recrutement dune Src (Fyn,
Lyn Yes) Généralement suivi de lactivation
dune MAPK Le résultat est - tantôt
pro-inflammatoire - tantôt anti-inflammatoire
?
?
?
31
Quelle signalisation en aval de CD36 ?
1
1 Thrombospondin dans les cel. endothéliales
src kinase fyn, caspases p38 MAP kinase
apoptose, inhibition de langiogénèse 2
Protéine fibrillaire ß-amyloide dans la microglie
CD36 / SRA / CD47 / a6ß1. Plusieurs voies
activées Réorganisation du cytosquelette
dactine Capacités phagocytaires, secrétion
(ROS, cytokines) 3 - LDL oxydées sur
macrophages src kinase lyn, MAP kinase
kinase, MEKK2, puis jnk phosphorylation de JNK
formation des cellules spumeuses.
2
3
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Ingestion des cellules apoptotiques homéostasie
tissulaire Ingestion de pathogènes, stimulation
de la réponse immune Ingestion de protéines,
lipides, lipoprotéines modifiées Ingestion des
acides gras Inhibition de langiogénèse Contrôle
négatif de la réponse inflammatoire Capacités
dapprentissage ?
Ingestion de protéines, lipides, lipoprotéines
modifiées dans un contexte pathologique (diabète,
hyperlipidémie, alzheimer) Inhibition de
langiogénèse dans le contexte de
lathérosclérose et du diabète Réponse
inflammatoire générée par lexcès dingestion de
lipides et lipoprotéines modifiées, formation des
cellules spumeuses Dérégulation de la réponse à
linsuline
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CD36 , quelles questions ?
Souris CD36 -/- accessibles Quel est le rôle de
CD36 dans la réponse immunitaire anti-tumorale
? Quelle est la signalisation du goût du gras en
aval de CD36 ? Comment est dérégulée
lexpression de CD36 dans les LMMC ? Quels sont
les effets des agonistes / antagonistes des
récepteurs nucléaires sur CD36 ? Quel est le
rôle de CD36 dans le métabolisme musculaire
? Etc.
LIFR 100 CD36