Prsentation PowerPoint

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Observation microscopique aux différents
objectifs
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2) La structure du chromosome humain    
Complexe macromoléculaire composé de protéines et
dADN     Centromères  Site de constriction du
chromosome . Région hétérochromatique
(colorée intensément par le Giemsa). Constitué
dADN satellite non codant Télomères
Extrémités des chromosomes à réplication
particulière Variabilité de la taille des
télomères Anomalies chromosomiques
associées Organisateurs Constrictions portées
par les chromosomes acrocentriques. Nucléolaires
NOR Gènes codant pour les ARN
ribosomaux. Bras p et q Ils portent
leuchromatine (gènes actifs codant) Protéines de
Structure Il sagit principalement des
histones qui maintiennent un état basique
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3) Le caryotype humain
22 paires dautosomes Caryotype humain
normal  46 Chromosomes 1 paire de gonosomes
Homme 46,XY Femme 46,XX
? Le caryotype est spécifique despèce
Le classement des chromosomes suit une
nomenclature   -         En fonction de lindex
centromérique -         Taille des chromosomes
-         Banding des chromosomes
Succession longitudinale de bandes fortement et
faiblement colorées
4) Les bandes chromosomiques
Bandes G Obtenues par dénaturation enzymatique.
Bandes R Bandes inverses des bandes G obtenues
par dénaturation thermique.
Bandes riches en ilôts GC.
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(No Transcript)
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Principales caractéristiques des bandes
chromosomiques

• Le motif en bandes est caractéristique de chaque
  paire chromosomique
• Le motif en bandes chromosomiques est
  caractéristique du contenu en ADN
• (spécifique despèce)
• Comparaison possible avec les espèces voisines
• Le nombre de bandes varie selon létat de
  condensation de la chromatine
• tout en conservant une séquence comparable

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Banding R et G
Résolution de banding
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5) Les Hétéromorphismes 
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• 6) Le caryotype haute résolution
•  
• Incorporation dans le milieu de Thymidine en
  excès
• ? Blocage des cellules en cours de phase S
  (Synchronisation)
•  
• Levée du blocage et récolte des mitoses en
  prophase ou prométaphase
• (Allongement des chromosomes)
•  
• ? Caryotype humain en haute résolution  700 à
  1000 bandes

Caryotype standard 300-500 bandes
Caryotype haute résolution 700-1000 bandes
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7) Lanalyse dimage Utilisation de logiciels
adaptés à la cytogénétique ? Amélioration et
surtout gain de temps
Capture dune métaphase
Individualisation des objets
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Classement automatique des chromosomes
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III La Cytogénétique Moléculaire
1) Principe de base (FISH)
Association de techniques dérivant de la
cytogénétique et de la biologie moléculaire.
Technique de base  FISH (Fluorescence In Situ
Hybridization)
Hybridation entre lADN dune sonde moléculaire
et lADN chromosomique.   ? Basée sur le principe
de lhybridation moléculaire de brins
complémentaires dADN
2) Les sondes dADN chromosomiques  
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3) Etapes techniques
? Marquage fluorescent des sondes
Incorporation dun nucléotide (U remplace T)
fluorescent à lintérieur de la sonde
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4) Objectifs de la FISH
- Repérer des séquences dADN au sein des
chromosomes
Localisation dun gène
- Faire le diagnostic de certaines aberrations
chromosomiques
Analyse des remaniements chromosomiques complexes
- Analyser le contenu en chromosomes dun noyau
interphasique
Numération de chromosomes au sein dun noyau.