Service de Bact

1
Service de BactériologieDépartement des Maladies
infectieuses et parasitairesFaculté de Médecine
Vétérinaire

• Jacques Mainil
• Les souches entérohémorragiques dEscherichia
  coli en médecine vétérinaire

2
Pathogenic strains of Escherichia coli
Acronyms Pathotypes (or virulotypes) EHEC En
terohaemorrhagic E. coli EPEC Enteropathogenic
E. coli DHEC Diarrhea-associated Haemolytic E.
coli ExPEC Extraintestinal E. coli
UPEC Uropathogenic E. coli NMEC Neonatal
Meningitis E. coli APEC Avian Pathogenic E.
coli ETEC Enterotoxigenic E. coli
VTEC Verocytotoxigenic E. coli
CDEC Cell Detaching E. coli
CDTEC Cytolethal Distending E.
coli NTEC Necrotoxigenic E. coli AEEC Attach
ing-Effacing E. coli EIEC Entero-invasive E.
coli EAEC Enteroaggregative E. coli
DAEC Diffusely-adherent E. coli
3
EPEC, VTEC and EHEC

• Enteropathogenic Escherichia coli (EPEC)
• strains producing attaching/effacing lesions
  (AE)
• Verocytotoxigenic Escherichia coli (VTEC)
• strains producing only Shiga toxins (Stx)
• Enterohaemorrhagic Escherichia coli (EHEC)
• strains producing Stx and AE lesion
• similar to O157H7 E. coli causing haemorrhagic
  enterocolitis

4
Shiga toxins

• Production in the intestines
• Crossing of the epithelium through the
  enterocytes
• Reach the blood stream
• Active in vivo on the endothelial cells of the
  blood vessels
• Stop the protein synthesis in the target cells
• Oedemas and haemorrhages

Attaching/Effacing lesion

• Attachment to the microvilli of the enterocytes
• Injection of bacterial effectors into the
  enterocytes
• Re- and dis-organization of the enterocyte
  cytoskeleton
• Effacement of the microvilli of the enterocytes
• Inflammatory reaction with cell infiltration,
  oedema of the mucosa and loosening of the tight
  junctions

5
Pathologies des EHEC

• - hommes
• Infection asymptomatique
• Entérocolite diarrhée
• Entérocolite hémorragique diarrhée abondante et
  hémorragique
• Syndrome hémolytique urémique
• Syndrome purpura thrombotique thrombocytopénique
• - bovins
• veaux (jusquà 3 mois) diarrhée
• adultes portage asymptomatique
• - autres ruminants portage asymptomatique
• - autres espèces de manière anecdotique

5
6
Pathologies des EHEC
6
7
Epidemiology of EHEC
EHEC
young calves
adult ruminants
humans
8
Epidemiology of EHEC
9
Enterohemorrhagic EHEC /Verotoxigenic
VTECEscherichia colien production primaire

• Dr Hein Imberechts
• Laboratoire Nationale de Référence pour les E.
  coli zoonotiques, santé animale

10
Contenu

• Définitions
• Clinique
• Virulence des VTEC
• VTEC chez les ruminants
• Le diagnostic
• Programmes officiels, monitoring
• Mesures
• Portage de VTEC en Belgique et en Europe

11
Définitions

• VTEC produisent vérocytotoxines (VT), ou  Shiga
  toxins  (Stx) voir Shigella dysenteriae
• EHEC
• VTEC considéré très pathogène pour lhomme
• Mais pas toujours HUS, HC (maladie grave)

12
Définitions

• E. coli O157
• Non-O157 e.a. O26, O91, O103, O111, O145
• Typique atypique réfère à la production des
  lésions A/E et (ou) la présence du plasmide EHEC
• E. coli zoonotiques - autres VTEC
• Problème de diagnostic

13
Clinique

• UE 1.2 cas par 100.000 habitants (EFSA, 2005)
• Infection
• Aliments contaminés
• Eaux
• Contact direct indirect ruminants infectés
• Contact avec personnes infectées
• Clinique
• HUS, HC, BD
• Diarrhée, mal de ventre, sans symptômes

14
Virulence

• Facteurs de virulence
• Toxines Stx1, Stx2
• Adhésines Eae
• Locus of Enterocyte Effacement
• Plasmide, Ehx (marqueur de virulence)
• Autres

15
Virulence
LEE locus
Nataro and Kaper 1998
16
Virulence

• Stx encodé par phage, donc pas stable
• Variants

17
Virulence

• Séropathotype combination de sérotype, stx
  subtypes, présence des facteurs de virulence et
  association avec maladie chez lhomme
• Seropathotype A strains (VTEC O157) have a high
  relative incidence, commonly cause outbreaks and
  are associated with HUS
• Seropathotype B strains (O26H11, O103H2/NM,
  O111NM, O145NM, O121H19) have a moderate
  incidence and are uncommon in outbreaks, but were
  associated with HUS
• Seropathotype C strains (O91, O104 and O113 all
  of H-type 21) are associated with HUS, but these
  strains were of low incidence and rarely caused
  outbreaks
• Seropathotypes D and E are not HUS-associated and
  are uncommon in man or found only in non-human
  sources

18
Virulence

•  Deux lignées  de VTEC O157 une plus associée
  avec maladie chez lhomme
• Variants de Stx pathologie
• Conclusion à lheure actuelle, on ne peut pas
  identifier une souche pathogène pour lhomme

19
VTEC chez les ruminants

• VTEC et diarrhée
• Souvent stx1
• VTEC sans signes cliniques
• Implications pour le diagnostic et le monitoring

20
Le diagnostic

• Isolement E. coli O157
• mTSBnovobiocine IMS (DynaBeads) CT-SMAC
  agglutination
• Cefixime Tellurite Sorbitol MacConkey
• Méthode normalisée et validée (ISO 16654)
• Autres
• En développement
• Détection moléculaire gènes appartenant à
  plusieurs souches

21
Le diagnostic

• Confirmation par sérotypie
• Antigène O LPS, sucres
• Antigène H flagelles, protéines
• Agglutination
• Confirmation par biochimie (O157)
• b-glucoronidase (négative)
• Sorbitol (fermentation lente)

22
Le diagnostic

• Confirmation par PCR
• Gènes facteurs de virulence
• Polymorphismes
• Vérotoxines Stx1, Stx2
• Adhésine Eae (a, b, g, )
• Protéines du LEE
• Typage (tracing)
• PFGE génome
• Stx1, Stx2
• Phage

23
Le diagnostic

• Tests sérologiques (ELISA)
• Anti-O157
• Anti-Stx
• Anti-Eae

24
Programme

• officiel en production primaire
• Il ny en a plus depuis 2005
• Avant 2005
• Détection à labattoir
• Tracing back de la ferme dorigine (Sanitel)
• Echantillonnage
• 20 entre 6 mois et 2 ans, aliment, poussière
• PCR
• Mesures dhygiène sur la ferme

25
Programme

• Site de colonisation ?
• Echantillonnage spécifique ?
• En fonction de
• la nourriture
• la saison
• Plusieurs souches sur une exploitation

26
Monitoring

• Données comparables ? Evolution ?
• Infections chez lhomme détection de VTEC
  pathogènes
• la population animale
• les carcasses et viande à labattoir
• les échantillons environnementaux qui peuvent
  être contaminés par matière fécale et eaux
• ready to eat foods qui peuvent être contaminés
  par matières fécales
• Sérotypes E. coli O157, O26, O91, O103, O111 et
  O145

27
Monitoring

• Recommandation EFSA
• Caractériser toute VTEC (animaux, aliments,
  environnement), par méthodes harmonisées
• Sérotypage
• Lysotypie (VTEC O157)
• Typage gènes vtx et eae
• Typage moléculaire
• PFGE
• Collection centralisée et comparaison des
  résultats

28
Monitoring chez les animaux

• Lisolement de VTEC indique la présence
  ubiquitaire dans lenvironnement
• Bovins gt moutons chèvres gt animaux de
  compagnie, faune sauvage, gtgtgt porc, volaille,
• Tenir compte des différences locales
• La population
• Les pratiques agricoles
• La consommation alimentaire,

29
Monitoring chez les animaux

• Problème lexcrétion de VTEC O157
• Transitoire
• Différences quantitatives
• Influencée par lâge et lalimentation
• Monitoring est lourd et cher
• Utile en cas de risque, p.ex. ferme ouverte au
  grand public

30
Mesures

• GHP à labattoir et à latelier de découpe,
  monitoring pour indicateurs comme
  Enterobacteriaceae et E. coli
• Procédures HACCP pour aliments susceptibles à
  être contaminés
• Monitoring des bovins, de la ferme, de laliment
  en cas détudes spécifiques
• Recommandation dabord E. coli O157, puis
  dautres sérotypes, avec des méthodes harmonisées

31
Portage de VTEC

• EFSA zoonoses, BIOHAZ
• http//www.efsa.europa.eu/EFSA/
• Enternet
• http//www.hpa.org.uk/hpa/inter/enter-net_menu.htm
  
• PubMed
• http//www.promedmail.org/
• AFSCA, Zoonotic agents in BE
• http//www.favv.be/home/pub/doc07/Report_TS_2005_S
  .pdf

32
Portage de VTEC

• Belgique
• Peu de données, sauf aux abattoirs
• Europe
• Chiffres sont confus

33
Escherichia colientéro-hémorragique chez lhomme

• Christiane Duchesnes

Janvier 2008
34
Escherichia coli

• Pathotype EHEC
• Sérotypes O157H7 le plus fréquent
• O26, O103, O111, 0145,

Facteurs de virulence adhésion aux entérocytes
et effacement des microvillosités sécrétion de
toxines Stx1 et Stx2
Réservoir Tube digestif de lhomme et de lanimal
(ruminants)
Contamination Ingestion aliments contaminés par
MF, crus ou peu cuits (hamburgers, produits à
base de lait cru, légumes, )
Incidence Varie selon le pays lt2 cas/100 000
hab/an
35
Physiopathologie
www.cdc.gov/ncidod/eid/vol8no5/01-0385.htm.
Diarrhée
séro-sanglante
Tube digestif
EHEC
Toxine
Microangiopathies (surtout rénales)
36
Tableau clinique

• Tableau clinique
• Diarrhée sérosanglante
• Colite hémorragique
• Douleurs abdominales
• Peu de fièvre
• Cas groupés souvent liés à la restauration rapide

37
Traitement
Réhydratation Antibiotiques à éviter
Complications
Risques enfants lt3ans adultes de gt65 ans 10
Syndrome Hémolyse-Urémie (SHU) (incidence 0,5
cas/100000 enfantslt15ans /an) Rare Purpura
thrombotique thrombocytopénique (PTT)
38
SHU ( HUS)

• MICROANGIOPATHIE (lésions endothéliales)
• INFLAMMATION
• Fragmentation des GR dans les lésions anémie
  hémolytique
• Hb basse, réticulocytes et schizocytes
• Pâleur, (sub)ictère
• MICROTHROMBI
• Thrombopénie par consommation, pétéchies, purpura
• INSUFFISANCE RENALE AIGUË
• Oligo-anurie, oedèmes, prise de poids,
  hypertension artérielle, urémie

39
SHU traitement
Symptomatique Dialyse péritonéale
SHU évolution
¾ cas évoluent vers la guérison lt 5
mortalité Séquelles possibles IRC HTA
40
Evaluation du risque lié aux VTEC et E. coli
O157 entérohémorragiquesdans les aliments en
Belgique

• Georges Daube
• Université de Liège
• Faculté de Médecine Vétérinaire
• Microbiologie des Denrées Alimentaires
• Sart-Tilman, bât. B43bis
• 4000 Liège
• tél. [phone] fax [phone]
• http//www.mdaoa.ulg.ac.be/
• Georges.Daube_at_ulg.ac.be

Avec laide de Katelijne Dierick, ISP
41
Plan de lexposé

• Introduction
• Evaluation des risques
• Méthodes de recherche dans les aliments
• Appréciation du risque dans la filière  viande 
• Identification du danger
• Evaluation de lexposition
• Caractérisation du danger
• Caractérisation du risque
• Mesures de prévention dans la filière  viande 
• Problématique des critères microbiologiques
• Conclusions

42
Evaluation des risques partie intégrante de
lanalyse des risques

• Analyse des risques

• Evaluation des risques
• Evaluation scientifique de la probabilité
  doccurrence et de la gravité deffets néfastes
  pour la santé résultant de lexposition de
  lhomme à des dangers présents dans les aliments.

Evaluation des risques
Gestion des risques
1. Identification du danger
2. Evaluation de lexposition
Communication des risques
3. Caractérisation du danger
4. Caractérisation du risque
43
Principes des méthodes de recherche

• Pas de méthodes simples, standardisées et
  validées pour la recherche de VTEC non-O157 dans
  les aliments doù pas de statistiques
  exploitables
• Aucune méthode disponible pour les dénombrements
• Pistes envisagées (recherches en cours)
• séparation immuno-magnétique basée sur le
  sérotype
• Besoin de milieux disolements spécifiques
• Besoin de confirmer la virulence

44
Principes des méthodes de recherche

• Propriétés biochimiques des E. coli O157H7
  semblables aux autres E. coli excepté
• Résiste au tellurite et au céfixime
• Ne fermente pas le sorbitol en 24 h
• Ne produit pas de ß-glucuronidase
• La sélection et la différentiation biochimique
  sont basées sur ces caractéristiques

45
Méthode-type de recherche de VTEC O157 dans les
aliments

• Préenrichissement 
• Enrichissement 
• (Détection immunologique)
• Immuno-concentration (VIDAS ICE ou IMS-Dynal)
• Isolement
• Identification biochimique
• Agglutination
• Confirmation des facteurs de virulence par PCR

46
Schéma - Méthode Vidas ECO (1)
47
Schéma - Méthode Vidas ECO (2)
48
Concentration dE. coli O157 par capture par des
billes immunomagnétiques
49
Schéma - Méthode Vidas ECO (3)Confirmation
50
Centre de référence UZ-BrusselsDr. Denis Pierard

• Détection des gènes codants pour les facteurs de
  virulence
• - Vérocytotoxines (shigatoxines stx1 et 2)
• - Entérohémolysine
• - eaeA (intimine)

51
EVALUATION QUANTITATIVE DU RISQUE DANS LA FILIERE
VIANDE
52
(No Transcript)
53
1. Identification du danger 1.1. EHEC O157
terminologie

• Escherichia coli espèce type du genre
  Escherichia appartenant à la famille des
  entérobactériacées.
• VTEC-STEC E.coli vérocytotoxinogène ou
  producteurs de toxine  Shiga 
• souches produisant des toxines actives sur les
  cellules Véro (toxines VT ou stx).
• EHEC E.coli entérohémorragique.
• E.coli vérocytotoxinogène qui possède les mêmes
  propriétés cliniques (SHU, entérocolite
  hémorragique), épidémiologiques et pathogéniques
  (propriétés attachantes/effaçantes, plasmide 60
  MDa) que le clone épidémique O157H7.
• EHEC O157 E.coli entérohémorragique de sérotype
  O157. A lorigine de la définition du groupe EHEC
  et manifestant la plus forte vitulence et le plus
  fort potentiel épidémique.

54
1.2. Physiologie (1)

• Température
• Tmin 6-7C Topt 40C Tmax 45,5C
• D55C 20 D60C 3 D65C 0,36
  (recommandation 70C 2)
• Pas ou peu deffet de la congélation
• pH
• pHmin 4,2 (HCl) - 5,5 (Ac. acétique) pHopt
  6,9 pHmax 9,4
• Résistance/tolérance à lacidité (adaptation)
• Activité de leau (NaCl)
• aWmin 0,953 aWopt 0,995
• Conditionnement
• Peu ou pas deffet du sous-vide ou de
  latmosphère modifiée

55
1.2. Physiologie (2)

• Additifs
• Nitrites efficace à pH lt 5,5
• Acides organiques
• Bactériocines
• Phosphates
• Rayonnements
• ionisation
• RX
• UV
• Hautes pressions
• Ozone

56
1.4. Symptomatologie
57
Résultat des surveillance VTEC en Belgique chez
lhomme (2000-02)

• Serotype Freq
• O157 4,018 65.3
• O26 358 5.8
• O103 347 5.6
• O91 208 3.4
• O145 109 1.8
• O111 76 1.2

• Serotype Freq
• O146 60 1.0
• O128 56 0.9
• O113 39 0.6
• O8 27 0.4
• Other 859 14.0
• Total 6,157 100.0

58
1.5. Mode de transmission

• Indirect
• Consommation daliments contaminés
• - denrées alimentaires dorigine animale
  (bovine)  hamburgers  insuffisamment cuits
  (USA), salami, lait cru, produits laitiers non
  pasteurisés
• - denrées alimentaires dorigine végétale
• Consommation deau de boisson contaminée.
• Baignade, pâture contaminée.
• Direct
• Transmission directe de lhomme à lhomme ou de
  lanimal à lhomme.

59
Modes de transmission
AFSSA 2003
60
Aliments associés
AFSSA 2003
61
Prévalence EHEC O157 en Belgique (source ULg,
RUG, AZ-VUB et IEV)

• Coprocultures humaines 1 EHEC et 0,2 EHEC
  O157 lysotypes variés.
• Coprocultures bovines à labattoir 6 EHEC O157
  (1998-99).
• Carcasses de boeuf
• en 1997 (400 cm2) 9/6010 (0,15 )
• en 1999 (1.600 cm2 ) 16/1620 (1 ) en 2002
  (1.600 cm2) 13/1215 (1,1)
• en 2000 (1.600 cm2) 7/1501 (0,5) en 2003
  (1.600 cm2) 10/1479 (0,7)
• en 2001 (1.600 cm2) 13/1388 (0,9) en 2004
  (1.600 cm2) 18/1319 (1,4)
• Découpe de boeuf (25g) en 2002 0/222 (0) en
  2003 2/285 (0,7) en 2004 2/244 (0,8)
• Viande hachée de boeuf (25g) en 1999 1 / 984
  (0,1) en 2000 1/487 (0,2) en 2001 0/298
  (0) en 2002 0/297 (0) en 2003 5/298
  (1,7) en 2004 1/332 (0,3)
• Autres viandes (veau, porc, volailles, lapins)
  0 EHEC O157 /1.500
• Lait cru 0/123 (2006) Fromage au lait cru de
  vache 5/271 (1,8) (2006)

62
Evaluations internationales
63
Evaluation du risque  viande hachée de bœuf 
USDA 2001
64
2. Evaluation de lexposition Principales étapes
à envisager
Contamination Contamination croisée Multiplicati
on
Dilution Destruction
65
2.1. Elevage

• La prévalence dexploitations positives est très
  variable
• La prévalence intra-exploitations est aussi très
  variable
• Le type de bétail (veaux, taurillons, vaches)
• La dynamique temporelle dans les exploitations
  (effet alimentation, saison, etc.)
• Lexcrétion à labattoir et sa dynamique
  temporelle sont similaires à celles observées
  dans les élevages

66
2.1. Elevage données belges

• Informations manquantes
• - Collecter des informations concernant le type
  délevage et dalimentation, lâge des animaux,
  les saisons, les probiotiques, les immunisations
  et à partir de celles-ci en évaluer le risque
  différentiel.
• - Réaliser des études concernant le nombre de
  EHEC O157 / gr de matières fécales.

67
2.2. Abattoir données belges

• Prévalence de carcasses contaminées sur 1.600 cm2
  par EHEC O157 1,01 (n 8.522)
• Prévalence de carcasses contaminées sur 400 cm2
  par EHEC O157 0.15 (n 6.010)
• Nombre de EHEC O157
• - 1 ufc/cm2 et 200 ufc/cm2.
• - 82 des avec lt 1 ufc/400 cm2.
• Nombre dE. coli /cm2
• 95 lt 100 ufc / cm2.
• 90 lt 10 ufc / cm2.
• 70 lt 1 ufc / cm2.
• 45 lt 1 ufc / 10 cm2.

68
2.2. Abattoir données belges

• Informations manquantes
• - Préciser les niveaux de contamination
• - Investiguer les facteurs de contamination
  croisée en fonction du type dabattoir.
• Tenir compte de linfluence des fortes
  contaminations fécales accidentelles à labattoir.

69
2.3. Découpe et hachage données belges

• La prévalence des morceaux de découpe contaminés
  par EHEC O157 est faible 0,5 (n 751).
• La prévalence de EHEC O157 dans la viande hachée
  de bœuf est de 0,3 (n 2696).
• 75 des viandes
• hachées de boeuf
• contiennent
• lt 100 cfu/g

70
2.3. Découpe et Hachage données belges

• Informations manquantes
• - Préciser limportance relative des filières
  belges de production.
• - Déterminer en termes daugmentation, de
  stabilisation ou de diminution de EHEC O157
  linfluence des pratiques suivantes
• Lutilisation ou non de la congélation
• avant le hachage.

71
2.3. Découpe et Hachage données belges

• Le travail à partir de petits ou
• gros morceaux de découpe.
• Le nombre danimaux différents intervenant
• au sein dun même lot de hachage.
• Lutilisation ou non de chutes
• de découpe en boucherie.
• La possibilité de contamination dorigine
• humaine différente dune filière à lautre.

72
2.4. Stockage, Conditionnement et Distribution
données belges

• Température moyenne / filet américain /
  supermarchés 5 C.
• Température / comptoirs réfrigérés 70
  supermarchés t ? 7C.
• DLC 48 heures.
• Conditionnement barquette en frigolite ou en
  plastique avec film perméable à lair.
• Taille du conditionnement 150 - 200 grs,
  500grs.
• pH du filet américain préparé 5 - 5.35.

73
2.5. Consommation données belges

• Le de conditionnements de viande hachée
  contaminés 0 EHEC O157 sur 194 échantillons.
• La quantité de filet américain consommé / an 2
  kg 320.
• La consommation de hamburgers insuffisamment
  cuits est ignorée
• Le nombre estimé de consommateurs de filet
  américain 5.329.485.
• La quantité estimée de filet américain consommé /
  repas 150 g.
• Le nombre moyen de repas de filet américain par
  an 15.

74
3. Caractérisation du dangerRelation dose-réponse

• Dose infectieuse faible /-50 cellules ingérées

4. Caractérisation du risque données belges
Viande hachée de bœuf 0.30 EHEC O157

• Carcasses de bœuf
• 1,01 EHEC O157
• 0,82 lt 1 ufc/400 cm2
• - 0,18 gt 1 ufc/400 cm2

Population globale 10.192.264 42 cas de SHU
(1996) 4 cas mortels
Nombre de repas / an 15
Taille de la portion consommée par repas 150 g
75
4. Caractérisation du risque données belges
76
PREVENTION DU RISQUE DANS LA FILIERE VIANDE
77
Points essentiels à maîtriser

• Elevage ? portage, ? niveau de portage.
• Abattage ? prévalence de carcasses contaminées,
  ? niveau de contamination.
• Découpe, hachage ? prévalence et niveau de
  contamination en jouant sur congélation, quantité
  et origine de la viande de découpe.
• Stockage, conditionnement et distribution
  respect strict de la chaîne du froid.
• Consommation adopter le mode de consommation,
  respect de la chaîne du froid.
• Communication stratégies de prévention
  conseils pour acteurs de la filière et
  populations à risque.

78
Points essentiels à maîtriser

• Traitement des carcasses avec fortes
  contaminations fécales
• Parage des contaminations visibles
• Déclassement des  accidents déviscération 
• Perte dagrément pour  mauvais  abattoirs
• Tests systématique de carcasses pour  filet
  américain 
• Réduction du niveau de contamination
• par EHEC O157 en début de filière

79
Points essentiels à maîtriser

• Elevage ? portage, ? niveau de portage.
• Abattage ? prévalence de carcasses contaminées,
  ? niveau de contamination.
• Découpe, hachage ? prévalence et niveau de
  contamination en jouant sur congélation, quantité
  et origine de la viande de découpe.
• Stockage, conditionnement et distribution
  respect strict de la chaîne du froid.
• Consommation adopter le mode de consommation,
  respect de la chaîne du froid.
• Communication stratégies de prévention
  conseils pour acteurs de la filière et
  populations à risque.

80
Points essentiels à maîtriser

• Absence de consommation de viande crue de bœuf
  par les populations à risque
• Enfants moins de 15 ans
• Personnes âgées

81
Critères microbiologiques

• Pas de critères dans le règlement (CE)
  N2073/2005
• Limites dactions de lAFSCA pour contrôles
  officiels

82
Critères microbiologiques

• Avant de fixer des critères européens (DG SANCO)
• Avis 2007 de lEuropean Food Safety Authority
  (EFSA)
• Priorité VTEC O157
• Surveillance abattoir
• Surveillance chute de découpe
• Méthodes à développer pour VTEC non-O157

83
Conclusion

• Bonne connaissance de la prévalence, du niveau de
  contamination
• d E.coli O157 à tous les niveaux de production
  du filet américain.
• Comment établir un lien entre ces différentes
  étapes ?
• - Modélisation mathématique probabiliste.
• - Manque dexperts ? indispensable pour définir
  les données adéquates à introduire dans le
  modèle.
• - Besoin ? de données quantitatives.
• Prévention de EHEC au sein dun aliment cru est
  difficile.
• - Mise en place de programmes dassurance de
  sécurité alimentaire à chaque étape de production
  dont surtout labattoir BPH - HACCP
• - Information du consommateur.
• Besoin de critères uniformes européens