Jo

1
João Aprigio Guerra de Almeida
Microbiota do Leite Humano Dr. Franz Novaes
Instituto Fernandes Figueira.(RJ)
www.paulomargotto.com.br
2
Considerações Gerais

• A preocupação em reduzir a mortalidade neonatal é
  crescente em todos os países.
• Estima-se que somente no ano 2000, quatro milhões
  de bebês morreram nas primeiras quatro semanas de
  vida, sendo três quartos destes na primeira
  semana.

Lawnet et al, 2005
3
Alimentação do prematuro é uma questão de vida
ou morte!
Carvalho, 2007
4
(No Transcript)
5
Após o parto

• Os RNs são expostos aos microrganismos
• Muitos através dos alimentos.
• No caso do leite materno os microrganismos são
  originários dos mamilos, ductos lactíferos, pele
  circulante e até das mãos.
• O processo de colonização afeta a morfologia,
  fisiologia, e diferenciação do epitélio
  intestinal.

Falk, et al., 2003
6
Germ Free

• Alimento
• Água

7
Colonização experimental
Efeito da administração de Lactobacilos reuteri
no desenvolvimento de vilosidades do íleo após 3
dias. Cortes do tecido ileal.
8

• A colonização bacteriana lenta, com número
  limitado de espécies, tende a ser perigosa pelo
  fato de que o super crescimento ser um dos
  fatores que promovem a translocação bacteriana
• Logo, iniciar a alimentação do RN com o colostro
  de sua mãe, representa um grande benefício

9
Alterações na microbiota intestinal durante os
primeiros 7 dias após o nascimento.
Mitsuoka, 1996.
10
Bifidobactérias do leite humano

• Inibem seletivamente microorganismos patogênicos
  (enterobactérias)
• Metabolizam lactose produzindo ac. latico,
  acético, fórmico e succínico que reduzem o pH
  intestinal
• O crescimento das bifidobactérias é estimu-lado
  pela presença do fator bífido, não encontrado no
  LV.

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Fator Bífidus
B.bifidus B.longum B.brevis B.infantis
CARBOIDRATOS Lactose Oligossacarídeos-N
Ácido Lático (? pH) Ácidos Graxos de Cadeia
Curta
12
A microbiota da criança amamentada

•  
• Componentes pré-bióticos estimulam a proliferação
  de bactérias benéficas como bifidobactérias e
  lactobacillus.
•  
• Os quais baixam o pH intestinal e inibem a
  prolifiração de bactérias patogênicas.
•  
•  A microbiota intestinal funciona como componente
  da barreira defensiva da mucosa intestinal.

13
(No Transcript)
14
Lars et al, 2003
15
Translocação
No hospedeiro normal ocorre em baixos níveis e as
de bactérias são mortas no trajeto ou nos
linfonodos.
16
Placas de Peyer
Epitelio especializado asociada a Placa de Peyer
Epitelio absortivo
Folículos linfoides dispersos
17
Tempo de vida útil destas células sob
refrigeração é de 12 -14 horas
18
Células da Linhagem Branca
Sangue (8000/mm3) Leucócitos-PMN Neutrófilos
Colostro Humano (800 - 2.000/mm3) Macrófagos PMN
Linfócitos ( 10)
X
19
Ecologia Microbiana
20
Tipos de contaminantes Microrbianos

• Bactérias
• Leveduras
• Fungos

21
1gt 2gt 4gt 8gt 16gt 32gt 64gt 128gt 256gt 512gt
1024gt 2048gt 4096
22
Temperatura de crescimento
23
Como evitar a multiplicação microbiana?
Atividade de água
pH
Fatores
Oxigênio
Tempo
Nutrientes
Temperatura
24
Ecologia do Leite Humano Ordenhado
25
Doadora

• Mesmo quando proveniente de mamas absolutamente
  normais o leite apresenta variado números e tipos
  de microrganismos.
• Suas fontes de contaminação podem ser
  classificadas como de origem primária e
  secundária.
• Contaminação primária (interna)

26
Contaminantes primários

• HIV
• HTLV-I
• HTLV-II
• Vírus da hepatite B
• Vírus da hepatite C
• Citomegalovírus

27
Contaminação secundária

• Dentre as principais fontes de contaminantes
  exter-nos, citam-se
• pêlos,
• pele,
• saliva,
• cabelo, etc.
• Normalmente, o LHO se conserva melhor quando
  refrigerado, pois os contaminantes são em sua
  maioria são mesófilos.

28
Os microrganismos x seres humanos
Obs O S. aureus era considerado um microrganismo
saprófitas, atualmente é classificação
oportunista.
29
(No Transcript)
30
(No Transcript)
31
Os microrganismos da mama

• Funcionam como uma barreira viva
• entre os ductos e o meio ambiente.
• Funcionam com se fossem uma colônia microbiana
  que se defende de outros microrganismos por meio
  da produção de substâncias semelhantes às
  colici-nas.
• Além de produzirem ácidos orgânicos de cadeias
  curtas.

32
Funcionários

• Podem contaminar por meio de mãos sujas, tosse,
  espirro ou conversa sobre os utensílios com ou
  sem o leite.
• Os microrganismos podem ser desalojados das mãos
  durante a ordenha.
• Quanto menores as contaminações durante a coleta,
  melhores as características bacteriológicas do
  LHO.

33
Alguns Perigos
34
Manipulador com Infecção
35
Cultura do dedo infectado
Agar Sangue
Caldo TSB
36
Higiene
Ambiental - Produtos - Pessoal
37
Higiene das mãos
38
(No Transcript)
39
Mãos Sujas
40
Mãos após lavagem com água e sabão
41
Mãos após anti-sepsia com álcool 70
42
Aliança
43
Pano de Limpeza
44
Dinheiro
45
Cabelo
46
Ar de corredor movimentado
47
Paramentação adequada

Gorro
Protetores oculares
Máscara
Luvas
Avental
Calça comprida
Sapato fechado
48
Utensílios

• Um dos maiores responsáveis pela má quali-dade do
  leite é a falta de cuidado com os utensílios
  (bambas, frascos, etc).
• O grande número de microrganismos obser-vado pode
  ser explicado por sua multiplicação.
• Os utensílios mal higienizados podem aumen-tar a
  carga microbiana em até 30 vezes.

49
Água

• Os contaminantes da água pertencem aos gêneros
  Pseudomonas, Achromobacter, Alcaligenes,
  Flavobacterium, etc. Oriundos, em sua maioria do
  solo.
• Tais microrganismos são psicrotróficos,
  proteolíticos e/ou lipolíticos causando problemas
  no leite refrigerado.
• Por isso, só se deveria empregar água tratada.

50
Outras Fontes

• Em 444 moscas foram encontradas de 5,5 x 102 a
  6,6 x 106 bactérias. Média 1,2 x 106
• Se todas fossem transferidas para 50 litros de
  leite, cada mosca acrescentaria 25 bactérias/mL.
• Nomalmente as moscas são atraídas pelo material
  fecal, a maioria das bactérias aderidas a elas
  são coliformes.

(Pinheiro, 2006)
51
Microrganismos alojados em microssulcos de uma
superfície de fórmica
52
Hipoclorito de sódio

• Hipoclorito de sódio destrói a capacidade do
  microrganismo de funcionar, crescer e reproduzir
• Não gera resistência
• Não é tóxico

53
Microrganismos x Controle de Qualidade

• Microrganismos mesófilos
• Se caracterizam por seu crescimento entre
  temperaturas de 15 a 37ºC.
• São microrganismos de origem ambiental.
• Dentre eles podem se encontrar os coliformes
• Produzem alterações e deterioração aceleradas nos
  alimentos

54
Microrganismos x Controle de Qualidade

• Coliformes
• Microrganismos facultativos
• Não esporulados
• Fermentadores da lactose a 35ºC em 48horas
• Vivem no meio ambiente e em animais de sangue
  quente.
• Os Coliformes totais contém os fecais

55
Microrganismos x Controle de Qualidade

• Termodúricos
• Microganismos de origem ambiental
• Diminuem a vida útil dos produtos
• Se associam com materias primas contaminadas
  quando em populações elevadas
• Normalmente se associam com contaminações
  ambientais

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Microrganismos x Controle de Qualidade

• Bolores e leveduras
• Microganismos de origem ambiental
• Se associam com materias e equipamentos
  contami-nados
• Normalmente se associam com contaminações
  ambientais.

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Microrganismos x Controle de Qualidade

• Estaphylococcus coagulase positiva
• Principalmente representados pelo Staphylococcus
  aureus
• Podem ser produtores de enterotoxinas e causarem
  intoxicações intestinais
• Se encontram na garganta e fossas naisas de
  pes-soas saudáveis, nos manipuladores de
  alimentos e na maioria das mastites

58
Microrganismos x Controle de Qualidade

• Psicrotróficos
• Microganismos de origem ambiental
• Diminuem a vida útil dos produtos estocados sob
  refrigeração
• Sua principal fonte para o LHO é a água

59
Microrganismos x Controle de Qualidade

• Termodúricos psicrotróficos
• Microganismos de origem ambiental
• Diminuem a vida útil dos produtos estocados sob
  refrigeração
• Sua principal fonte para o LHO é a água
• São capazes de resistir à pasteurização

60
Qualidade Sanitária do LHO (ordenha sem controle)
61
(No Transcript)
62
Microorganismos no LHO
6000
5000
4000
3000
UFC/mL
2000
1000
0
Ordenha
Inicio
Meio
Fim
63
Microrganismos no leite humano
Frações coletadas (sequencialmente de 10 em 10 mL)
64
Ação dos microrganismos no LHO

• O sonho de uma bactéria é se transformar em duas
• Os microrganismos podem deteriorar o leite ou
  serem responsáveis por doenças.
• Como o LHO se compõem de proteínas, carboidratos
  e gorduras, etc., fica fácil prever os tipos de
  deterioração.

65
Microganismos x LHO

• Os microrganismos variam quanto a suas exigências
  nutricionais e a capacidade de utilizarem os
  diferentes substratos que compõem o LHO.
• Fontes de carbono
• Fontes de nitrogênio
• Fontes de vitaminas
• Sais minerais.

66
pH

• Mede a concentração de H que é represen-tada
  pela equação pH log 1/H
• É um fator importante na limitação dos tipos de
  microrganismos capazes de crescerem no alimento.
• Muito ácidos lt4,0.
• Ácidos 4,0 a 4,5.
• Pouco ácidos gt 4,5 (Leite Humano6,7 a 6,9).

67

• O leite humano coagula em pH 4,7 (ponto
  isoelétrico da caseína).

68
Temperatura

• É um dos fatores ambientais que mais afetam a
  viabilidade e o crescimento microbiano.
• A temperatura ótima para a maioria dos patógenos
  e de 35C.

69
Redox - Eh

• O potencial de oxirredução (Redox) pode ser
  afetado por uma série de fatores.
• A presença do oxigênio é o fator que mais
  contribui para o aumento do potencial de redox.

70
Classificação dos microrganismos

• Aeróbios requerem Eh positivo (presença de O2)
  (250 a 500mV)
• Anaeróbios - requerem Eh negativo (ausência de
  O2) (30 a -550 mV)
• Facultativos - multiplicam-se em Eh positivo ou
  negativo (250 a -320mV)
• Leite humano, Eh varia de 200 a 400 mV.

71
Fatores que influem na multiplicação bacteriana

• O crescimento dos microrganismos no LHO obedece a
  uma curva clássica.

Log das Contagens
Estacíonária
Morte
Log
Lag
72
Proliferação microbiana
Temperatura C Bactérias (UFC) Tempo de Geração Pop.ao final de 10 horas
28 1 30 1,000,000
18 1 60 1.000
8 1 120 32
73
Efeito dos microrganismos sobre LHO estocado de
forma incorreta
Ruptura Glóbulos de Gordura
Gordura Livre
Membrana (coalescência)
Alteração
da Proteínas do Soro
Floculação
Estrutura 4ª
Desestabiliz. Micelas de Caseína
Coagulação
Acidez/Enzimas

74
FIM
Portanto, o frio e o calor são nossos maiores
aliado na preservação do LHO.