T

1
TÁMOP-Program

• Témavezeto prof. Dr Zelles Tivadar
• Résztvevok prof. Dr Nagy György
• prof. Dr Fehér
  Erzsébet
• Offenmüller Katalin
• Idoszaki beszámoló 2011.03.30.

2
I.Az agyalapi mirigy elülso lebenyének prolaktin
(PRL) elválasztása a hypothalamus dopamine (DA)
tónusos gátló befolyás alatt áll, mely
feltételezi a jelátvivo molekula folyamatos
(tónusos) jelenlétét. A ligand-receptor
kölcsönhatás erosségének vizsgálata elott
tisztázni kívántuk e tónusos gátló befolyás
pontos mechanizmusát. Eredményeinket a
következokben összegezzük
A közelmúltban, a D2 DA receptor (D2R) jelátvivo
mechanizmusát vizsgálva, egy b-arrestin függo
(ugyanakkor G-fehérje független) mechanizmust
írtak le a corpus striatumban. Ebben a jelátvivo
útvonalban a b-arrestinhez kapcsolódó phosphatase
2A dephosphorilálja, ennélfogva inaktiválja, az
elobbi két fehérjével közös komplexben lévo
protein kinnase B-t (Akt). Az agyalapi mirigy
elülso lebeny Akt phosphorylációjának részletes
vizsgálatával megállapítottuk, hogy
hypophyseotroh DAerg rendszer mind farmakológiás
(DA bioszintézis ill. D2R gátlása) mind
fiziológiás (szopási inger alkalmazása laktáló
anyákban) befolyásolása a corpus striátumhoz
hasonlóan inaktiválja (dephosphorylálja) az
Akt-ot, mely felelossé teheto a mammotrop sejtek
tónusos DAerg gátlásáért. Következésképpen, a PRL
elválasztás gátlásáért nem a korábban felvetett
un. G- függo, adenylat cyclase (AC) gátlás és
cAMP csökkenéssel járó mechanizmus a felelos.
3
K
Diagram of the mechanisms by which DA affects the
pituitary mammotropes.
4
Docking of dopamine (DA, top) and salsolinol
(SAL, bottom) to the tyrosine hydroxylase (TH)
crystal structure.
Both DA and SAL bound to the active site near the
iron (shown as red sphere), with the catechol
groups in close proximity to the iron. The high
affinity site is known to involve direct
coordination of the catechol groups with the iron
atom. Whether this occurs in the low affinity
site is unknown, but likely. Such a conformation
of SAL could also involve coordination with iron.
The more rigid, ring structure of SAL is likely
to occupy the cofactor binding site (shaded blue)
to a greater extent. This may explain why it has
a greater effect on cofactor binding than DA.
5
II. A kötés-erosség vizsgálatához fluoreszcens
beadek-et kívánunk felhasználni, úgy, hogy a
bead-ekhez kötött molekulák a szubsztráton
megkötve adott értéku fluoreszcens jelet
szolgáltatnak. A fluoreszcencia-jel idobeli
változását figyelve és a szakító-erot idoben
lassan növelve várhatóan a fluoreszcens jelben
bekövetkezo csökkenéssel tudjuk kimutatni a köto
(szakító) ero nagyságát. Ehhez kialakítottunk egy
mintakamrát és átalakítpottunk egy fluoreszcens
spektrométert úgy, hogy a minta fluopreszcencai
spektrumát real-time felvenno tudjuk. A
fluoreszcens jelet optikai szálkötegen keresztül
vezetjük a spektrométerbe, a gerjeszto fényt
pedig ugyanezen szákötegl (Y alakú) másik ágán
vezetjük a tárgylemezen levo mintához. A
szálköteg vége és a mibta között levo távolságot
optimalizáltuk. Alapelrendezésben a gerjeszto
fényt a spektrofotométer gerjeszto oldali
fényforrásából vezetjük ki, a szálköteg
segítségével. Ez egy szélessávó Xe-lámpa, amely
az eléje helyezett prizmával és kiválasztó réssel
hangolható.
6
Fluoreszcencia mérések a szálbecsatolású
reflexiós elrendezésben, prizmás
fluoreszcencia-spektrométerrel. 1. ábra
7
Az 1. ábrán található méréshez tartozó
elrendezésben a gerjesztés 520 nm-re hangolt
bemeneti prizma 10 nm réssel, a
fluoreszcencia-spektrumot szintén 10 nm réssel
vettük fel. Hasonló eredményeket kaptunk más
rés-kombinációban is. A spektrométer Y-szál
kombinációval jelenleg elérheto legnagyobb
érzékenység az 1 mikrogramm/ml koncentráció.
Javítására mind LED-es (520nm), mind lézeres(532
nm) gerjesztést tervezünk. Az elso kísérletek
megtörténtek. A LED sávszélessége nagy, szükséges
a szurés. A jelenlegi szuronk 520 nm
középhullámhosszú, de csak maximum 155
trabszmissziójú (kb. 14 nm sávszélességgel). A
LED esetében ezt kell egy jobb szurovel
helyettesíteni az érzékenység növelésére. A
kimeneten is szurot alkalmaztunk (580 nm)a
gerjesztés és a fluoreszcencia szétválasztására.
8
(No Transcript)
9
III. NANOSPECT-vizsgálatok A Technecium-99
(Tc-99) felvétele és leadása elfogadott módszer
a nyálmirigyek funkcionális állapotának
vizsgálatára. Egy az irodalomban jól ismert és
egy általunk elsoként felismert
hipertrófia/hiperplázia (Ht/Hp) állatmodellben
vizsgáltuk a Tc-99 felvételét és leadását
nyugalmi állapotban, alacsony szintu szekréciós
tevékenység mellett patkányokban.. Az
Isoproterenol mind a parotisban, mind a
submandibuláris nyálmirigyben létrehoz Ht/Hp-t..
A Tc-99 felvétel itt mindkét vizsgált mirigyben
jelentosen növekedik a kezelés 5. és 10.
napjában.
Isoproterenol kezelés Tc-99 felvétel a kezelés
0. 5.- 10. napjában
Parotis
Gl.submandibularis
10
Hokezelt szójababbal történo táplálás csak a
parotis Ht/Hp-t hozza létre. A parotisban a jól
ismert Isoproterenol hatáshoz hasonlóan
jelentosen növekedik a Tc-99 felvétel a táplálás
5. és 10. napjában. A submandibularis
nyálmirigyben nem jön létre a Ht/Hp. Ebben a
mirigyben nem változik a Tc-99 felvétel a
táplálás 5. és 10. napjában. Az eredmények arra
utalnak, hogy összefüggés található a teljes
mirigyek és a Tc-99 felvétel között. További
vizsgálatok szükségesek a Tc-99 felvétel
alakulására a Ht/Hp-mirigyek stimulált
állapotában.
Hokezelt szójababbal történo táplálás Tc-99
felvétel a kezelés 0. 5.- 10. napjában
Parotis
Gl.submandibularis