DNA RECOMBINANTE E INGIENIER

1
DNA RECOMBINANTE E INGIENIERÍA GENÉTICA

2
INGENIERÍA GENÉTICA
MANIPULACIÓN DEL DNA DE LOS ORGANISMOS VIVOS 1)
INVESTIGACIÓN BÁSICA (ESTUDIO DE LA
ORGANIZACIÓN, EXPRESIÓN Y FUNCIÓN DE GENES EN LOS
ORGANISMOS VIVOS). 2) APLICACIÓN DE ESTE
CONOCIMIENTO EN LA MANIPULACIÓN CONSCIENTE DE LOS
GENES EN SALUD, EN LA INDUSTRIA DE ALIMENTOS, EN
LA AGRICULTURA, ETC.
3
PIEDRAS ANGULARES DE LA INGIENIERÍA GENÉTICA

• CONSTRUCCIÓN DE LIBRERÍAS
• DE cDNA Y GENÓMICAS
• DESCUBRIMEINTO DE LAS ENDONUCLEASAS DE
  RESTRICCIÓN (ENZIMAS DE RESTRICCIÓN)
• DESCUBRIMIENTO DE LA REACCIÓN
• DE POLIMERIZACIÓN DE CADENA O
• PCR (POLYMERASE CHAIN REACCTION)

4
Técnicas de DNA Recombinante
5
El problema Qué material genético vamos a
manipular y cómo lo vamos a hacer?
6
(No Transcript)
7
ANALISIS DE GENES

• Aislar secuencias de DNA
• Obtener múltiples copias de ellos
• TECNICAS
• Clonamiento Molecular
• PCR (reacción en cadena de la
  polimerasa)

Se requiere
8

• CLONAMIENTO MOLECULAR
• HERRAMIENTAS BASICAS
• Enzimas de restricción
• Vectores
• DNA ligasa
• Células huésped

9
Enzimas de Restricción
10
DIGESTION DEL DNA POR ENDONUCLEASAS DE
RESTRICCION
Sitio de corte
11
ENZIMAS de RESTRICCION
ES
Sitios de corte de endonucleasas de restricción
Sitio de corte de enzimas de restricción
Las flechas indican los enlaces fosfodiester
sobre los que actúa cada enzima
12

• CLONAMIENTO MOLECULAR
• HERRAMIENTAS BASICAS
• Enzimas de restricción
• Vectores
• DNA ligasa
• Células huésped

13

• Características básicas de un vector de
• clonamiento
• Origen de replicación
  autónomo
• Gen marcador de
  selección
• Sitios únicos de
  restricción

14
Componentes básicos de un vector de clonamiento
plasmidial que puede replicar en una célula de
E.coli
codifica proteína de resistencia a ampicilina
Región de inserción de DNA Exógeno
Origen de replicación
Caja de clonaje múltiple
15
PORQUE EL USO DE UN VECTOR ?
1ª división celular
2ª división celular
16
TIPOS DE VECTORES
kpb
inserto Plasmidios
3-5 bacteriofagos 15 BACS
300 YACS
2000
17
(No Transcript)
18

• CLONAMIENTO MOLECULAR
• HERRAMIENTAS BASICAS
• Enzimas de restricción
• Vectores
• DNA ligasa
• Células huésped

19
(No Transcript)
20
(No Transcript)
21

• CLONAMIENTO MOLECULAR
• HERRAMIENTAS BASICAS
• Enzimas de restricción
• Vectores
• DNA ligasa
• Células huésped

22
(No Transcript)
23
RESUMEN DE CLONAMIENTO
Enzimas de restricción
DNA Ligasa
Vector
Célula huésped
24
CLONES que contienen diferentes fragmentos del
genoma GENOTECA
25
GENOTECAS O LIBRERÍAS
CONSTRUCCIÓN DE LIBRERÍAS DE cDNA Y DE DNA
GENÓMICO USO DE VECTORES -PLASMIDIOS -DNAs DE
FAGOS -OTROS (BACs, COSMIDIOS, YACs, ETC).
26
(No Transcript)
27

• Genoteca de cDNA
• Obtención
• Clonamiento de cDNA obtenido mediante
  
• transcripción reversa de mRNA total.

28
(No Transcript)
29
(No Transcript)
30
(No Transcript)
31
(No Transcript)
32
(No Transcript)
33
Genoteca de DNA genómico Obtención
1. Fragmentación de todo el genoma mediante
enzimas de
restricción
2. Clonamiento de fragmentos en
vectores

34
(No Transcript)
35
Cómo aislar un fragmento de DNAde interés?

• Aislamiento de un clon
• -Uso de sondas radiactivas
• - PCR

36

Identificación de un fragmento de DNA específico
en las colonias transformadas mediante
HIBRIDIZACION CON SONDAS MARCADAS
37
Clonamiento por PCR
38
(No Transcript)
39
libreria
CLONAMIENTO DE UN PRODUCTO DE PCR
40
Combinación de la transcripción reversa con PCR

• RT-PCR

41
(No Transcript)
42
(No Transcript)
43
libreria
CLONAMIENTO DE UN PRODUCTO DE PCR
44

• SECUENCIACION DEL DNA

45
Estudio de la función de un gen Vectores de
expresión
46
Vector de expresión en bacterias
47
(No Transcript)
48
Vectores de expresión en eucariotes
49

• FUNCIÓN DE UN GEN
• Herramientas de Estudio
• Análisis computacional en banco de datos
  homología de secuencia con un gen de otro
  organismo cuya función se conoce.
• Animales transgénicos y knock out.