An

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Análisis molecular de la mutación del EGFR en el
CPCNP perspectiva del patólogo en el laboratorio
de biología molecular
Dra. Edith Illescas Patóloga y Directora del
Laboratorio Oncogen S.R.L. Buenos Aires,
Argentina
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Cuándo debe analizarse el EGFR en el CPCNP?

• Selección de pacientes para terapias TKIa
• No deben ser excluidos pacientes basándonos en
  características clínicasb
• Etnia
• Sexo
• Edad
• Historia del hábito de fumar

CPNCP cáncer de pulmón de células no
pequeñas TKI inhibidor de la tirosina quinasa
a. Rosell R, et al. Lancet Oncol.
201213239-246. b. Zorrilla AF, et al. J Clin
Oncol. 201230(Suppl)Abstract e18114.
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Qué carcinomas deben analizarse?

• Recomendaciones del Colegio Americano de
  Patólogos y aplicación en Latinoamérica
• Para carcinomas
• Tipo histológico adenocarcinoma y carcinomas
  mixtos con componente de adenocarcinoma, sin
  tener en cuenta el grado histológico
• No se recomienda en carcinomas de
• Células escamosas puras
• Células pequeñas puras
• Células grandes sin parámetros por
  inmunohistoquímica de evidencia de diferenciación
  adenocarcinomatosa

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Qué carcinomas deben analizarse? (cont.)

• Recomendaciones del Colegio Americano de
  Patólogos y aplicación en Latinoamérica
• Se recomienda en los carcinomas realizar la
  determinación molecular independientemente del
  tipo histológico
• En muestras pequeñas (punción aguja fina
  citológicos)
• Cuando el componente adenocarcinomatoso no puede
  ser confirmado ni excluido
• En tumores de tipo indiferenciados
• Muestras de metástasis óseas que han sido
  descalcificadas o pretratadas con ácidos deben
  solo utilizarse para el análisis en caso de ser
  el único material biológico

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Cuándo debe analizarse el paciente?

• En el momento del diagnóstico, de la recurrencia
  o de la progresión
• En pacientes en tratamiento de 1ª y/o 2ª línea
• En tumores primarios recurrencia y/o metástasis
• En carcinomas en estadio avanzado (IV)
• En estadios I, II y III, se tomará la decisión en
  colaboración interdisciplinaria con los médicos
  que lo están tratando

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En qué tiempo deberá estar disponible el
resultado?

• En 5 a 7 días hábiles - comienzo del tratamiento
  en el momento adecuado
• Dentro de las 48 h siguientes de la recepción de
  la muestra en el laboratorio, deberá confirmarse
  bajo control microscópico la viabilidad del
  análisis por metodología molecular

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Qué muestras pueden estudiarse?

• TODAS
• Taco de parafina de resección quirúrgica
• Biopsia por punción
• Citológico
• Impronta
• Extendido
• Material fresco
• Material fijado en alcohol
• Hay que tener en cuenta que los requerimientos
  para inmunohistoquímicas y FISH (conservación
  proteica) no son necesarios para técnicas de ADN

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Qué requerimientos son necesarios?

• Viabilidad de la muestra
• Microscopia óptica
• Presencia de células tumorales
• Calidad de células tumorales
• Cantidad de células tumorales (10)
• Proporción de células tumorales
• Selección de sectores tumorales bajo control
  microscópico de una tinción hematoxilina-eosina
  en la disección del corte en blanco, evitando
  tejido wild-type, si es posible

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Envío incorrecto de la muestra
Múltiples cortes de parafina Biopsia por punción
Hay tumor???
Múltiples cortes de parafina Tumor quirúrgico
Hay tumor ???
Imagen cortesía del Laboratorio Oncogen S.R.L.
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Microdisección
Corte en blanco
Imagen cortesía del Laboratorio Oncogen S.R.L.
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Qué metodologías de detección deben utilizarse?

• Metodologías que detecten un mínimo del 10 de
  células tumorales y el 99,9 de las alteraciones
  génicas posibles
• Sistema de PCR de los exones 18, 19, 20 y 21
  Sistema nested o heminested (recomendable en
  material parafinado)
• Recomendación técnicas por PCR nested y
  secuenciación automática

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Cómo debe entregarse el resultado?

• Con la alteración génica encontrada, indicar la
  inserción, mutación, deleción, el codón y el
  aminoácido
• Incluir la interpretación adecuada concreta y
  completa del tipo de alteración y su implicancia
  en el tratamiento con TKI
• Alteración clásica o no clásica
• Entrega de los informes de secuenciación
  bidireccionales con el primer FW y RV de cada
  exón descartando falsos positivos o secuencias
  artificiales por degradación del ADN o mal
  procesamiento preanalítico

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Ejemplo del exón 19
acgtcttccttctctctctgtcatag acgtcttccttctctctctgtcatag acgtcttccttctctctctgtcatag acgtcttccttctctctctgtcatag acgtcttccttctctctctgtcatag acgtcttccttctctctctgtcatag acgtcttccttctctctctgtcatag G729gga L730ctc W731tgg
I732att P733cca E734gaa G735ggt E736gag K737aaa V738 gtt K739aaa I740att P741ccc
V742gtc A743gct I744atc K745aag E746gaa L747tta R748aga
E749gaa A750gca T751aca S752tct P753ccg K754aaa A755gcc N756aac
K757aag E758gaa I759atc L760ctc D761gat 762gtg 763agt 764ttc 765tgc
tttgctgtgtgggggtccatggctctgaacctcaggcccaccttttct tttgctgtgtgggggtccatggctctgaacctcaggcccaccttttct tttgctgtgtgggggtccatggctctgaacctcaggcccaccttttct tttgctgtgtgggggtccatggctctgaacctcaggcccaccttttct tttgctgtgtgggggtccatggctctgaacctcaggcccaccttttct tttgctgtgtgggggtccatggctctgaacctcaggcccaccttttct tttgctgtgtgggggtccatggctctgaacctcaggcccaccttttct tttgctgtgtgggggtccatggctctgaacctcaggcccaccttttct tttgctgtgtgggggtccatggctctgaacctcaggcccaccttttct tttgctgtgtgggggtccatggctctgaacctcaggcccaccttttct
Laboratorio Oncogen S.R.L.
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Exón 20 EGFR - R803W CGG-TGG Arginina-triptófa
no
T
R803W
Arginina-triptofano
CGG-TGG
Imagen cortesía del Laboratorio Oncogen S.R.L.
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La mutación como paradigma en el análisis del
EGFR en el CPCNP

• Es estudiar a todo paciente sin excluirlos
  basándose en características clínicas como
• Etnia
• Sexo
• Edad
• Historia del hábito de fumar

Zorrilla AF, et al. J Clin Oncol.
201230(Suppl)Abstract e18114.
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Gracias por su participación en esta actividad.