Avalia

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Avaliação dos efeitos genotóxicos da exposição
ocupacional a pesticidas sobre agentes sanitários
da Fundação Nacional de Saúde do Estado de Minas
Gerais

• Fernanda de Souza Gomes Kehdy
• Orientadora Profª Maria Cristina Lima de Castro
• Co-orientadora Profª Cleusa Graça da Fonseca

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Introdução

• Pesticidas
• Seletividade dos pesticidas

Risco tóxico para humanos
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Introdução

• Tipos de intoxicações
• Aguda
• Sub-crônica
• Crônica

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Introdução

• Potencial genotóxico

CARCINOGÊNESE

• Biomonitoramento genotoxicológico
  

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Introdução

• Biomarcadores
• - análise de aberrações cromossômicas
• - análise de troca entre cromátides irmãs
• - frequência de micronúcleos

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Introdução

• Micronúcleos
• Efeito aneugênico

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Introdução

• Micronúcleos
• Efeito clastogênico

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Introdução
agentes clastogênicos

• Micronúcleos

agentes aneugênicos
- Teste de genotoxicidade in vitro - Biomarcador
p/ efeito de exposição a genotóxicos
(Norppa et al.,2003)
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Introdução

• Vantagens do teste do micronúcleo
• - Mais simples
• - Treinamentos mais curtos
• - Mais rápido
• - Requer menos custo
• - Maior poder estatístico

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Introdução

• Fator de risco p/ câncer p53

Inibição do ciclo celular
p53
Reparo do DNA
Apoptose
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Introdução

• p53
• - Gene TP53
• - Cromossomo17p13.1
• - 393 aminoácidos

Polimorfismo
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Introdução

• Estado de Minas Gerais
• 3000 agentes sanitários vinculados à FUNASA
  aplicam pesticidas para o controle de vetores de
  doenças (180 reg. metropolitana)
• Sexo masculino
• Idade 30 a 50 anos
• Pesticidas piretróides e organofosforados
• Não foi feita análise dos efeitos genotóxicos dos
  pesticidas sobre estes trabalhadores

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Introdução
N indiv. (exp/cont) Exposição Duração (anos) Biomarcador Resultado Referência
50/47 Piretróides, DDT 1-25 CA Pos (Ruppa et al.,1989)
26/26 Piretróides, organofosforados 2-18 CA Pos (Ruppa et al.,1991)
48/50 Piretróides, organofosforados 4-50 SCE Neg (Pasquini et al.,1996)
22/16 Piretróides, organofosforados 7 MN Neg (Venegas et al.,1998)
71/75 Piretróides, organofosforados 2-55 MN Pos (Bolognesi et al.,1998)
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Introdução

• Falta de concordância entre os resultados
• - diferentes condições de exposição (magnitude,
  uso de equipamentos de proteção)
• - nº de pesticidas utilizados
• - combinação de pesticidas
• - tempo e frequência de exposição
• - características do indivíduo (idade, sexo,
  hábito de fumar e ingerir bebidas alcoólicas,
  estado nutricional)

(Bolognesi, 2003)
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Objetivo geral

• Avaliar os efeitos genotóxicos da exposição
  ocupacional a pesticidas em agentes sanitários
  vinculados à FUNASA, através do biomonitoramento
  genotoxicológico destes indivíduos, utilizando
  como biomarcador a frequência de micronúcleos em
  cultura de linfócitos isolados e estabelecer o
  genótipo do gene TP53 em relação ao polimorfismo
  do códon 72 para fins prognósticos.

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Objetivos específicos

• Delineamento das amostras
• Padronização das condições de cultura de
  linfócitos isolados
• Produção de lâminas
• Determinação da frequência de MN
• Verificação, através de testes estatísticos, de
  relação entre a frequência de MN e exposição a
  pesticidas
• Amplificação, través de PCR, de fragmento do TP53
  para detecção do genótipo em relação ao códon 72
  

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Metodologia

• Grupos amostrais
• Grupo experimental 30 agentes sanitários
  vinculados a FUNASA, do sexo masculino, idade
  entre 30 e 50 anos, ocupacionalmente expostos a
  pesticidas
• Grupo controle 30 indivíduos do sexo masculino,
  idade entre 30 e 50 anos, sem história de
  exposição a pesticidas
• 2) Entrevista. (idade, hábitos e exposição)

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3) Teste do MN Metodologia

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Metodologia
Tempo de cultura (h) Substâncias a serem acrescentadas na cultura
0 PHA
24
48 Ct-B
72
96 Colher células
(Adaptado de Fenech,2000)
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Metodologia
Célula binucleada
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Metodologia

• Características do Micronúcleo
• Morfologia idêntica a dos núcleos principais
• Diâmetro entre 1/16 e 1/3 dos núcleos principais
• Mesma coloração dos núcleos
• Não apresentar refringências
• Não estar conectado a um dos núcleos
• Não estar sobreposto a nenhum dos núcleos

(Fenech, 2000)
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Metodologia

• Parâmetros a serem considerados
• - Frequência de MN/1000 cél. binucleadas
• - Frequência de células binucleadas
  micronucleadas/1000 cél. binucleadas
• - Distribuição de cél. binucleadas com 0, 1, 2, 3
  ou mais MN

(Fenech, 2000)
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Metodologia
Célula binucleada apresentando 1 MN
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Metodologia
Célula binucleada apresentando 2 MN
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Metodologia
Células binucleadas apresentando 3 MN
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Metodologia
Células binucleadas apresentando mais de 3 MN
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Metodologia

• 4) Análises estatísticas
• frequência de MNs
• idade
• hábito de fumar
• ingestão de bebidas alcoólicas
• exposição a pesticidas
• (tempo e frequência)

Teste do qui-quadrado
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Metodologia

• 5) Amplificação do TP53

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Metodologia
Primers Sequência Tamanho do produto
p53/p53Arg- p53 5TCCCCCTTGCCGTCCCAA p53Arg- 5 CTGGTGCAGGGGCCACGC Alelo Arg 141 pb
p53Pro/p53- p53Pro 5GCCAGAGGCTGCTCCCCC p53- 5CGTGCAAGTCACAGACTT Alelo Pro 177pb
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Metodologia

• 6) Aspectos éticos
• Consentimento livre e esclarecido
• Princípios éticos, aprovados pelo Comitê de
  Ética em Pesquisa da UFMG.

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Obrigada!!!