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T cnicas de Imunologia Citometria de Fluxo: Aplica es Identifica o Celular por Dispers o FS e SS Imunofenotipagem IOTest 3 Combinations List 24 Relevant Tubes ... – PowerPoint PPT presentation

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Title: T


1
Técnicas de Imunologia
  • Citometria de Fluxo
  • Aplicações

2
Identificação Celular por Dispersão FS e SS
3
Imunofenotipagem
4
IOTest 3 Combinations List
  • 24 Relevant Tubes
  • 2 Controls
  • One tube is for intra-cellular testing
  • Kappa Lambda polyclonals from Dako
  • FITC- and PE-conjugations performed at IOT

5
IOTest 3 Combinations List Target Diseases
6
IOTest 3 Combinations List Target Diseases
7
Quantificação antigénica
8
Quantificação de antigénios em Citometria de Fluxo
9
BioCytex MARQUIS TECHNIQUE
  • Beads contain calibrated amounts of anti-mouse
    IgG molecules.
  • Size mimics size of target molecule/receptor.
  • Amount of molecules on beads reflects expression
    level of target molecule/receptor.

10
CELLQUANT CD38/CD8-PE Kit
  • -Flow Analysis Procedure
  • Calibration Beads

11
CELLQUANT CD38/CD8-PE Kit
  • -Flow Analysis Procedure
  • Negative Control

12
CELLQUANT CD38/CD8-PE Kit
  • -Flow Analysis Procedure
  • CD38 Positive Sample

13
CELLQUANT CD38/CD8-PE Kit
  • -Data Analysis Procedure

14
Pesquisa de populações raras
15
Estudos Cinéticos
16
Análise de Ciclo Celular
17
Apoptose
18
Separação Celular
488 nm laser
  • Formação de gotículas
  • Tempo
  • Coincidência - Pureza e Eficiência

19
QC Workflow
Patient Analysis
Basic Elements of Daily QC
Test Reimbursement
FAIL
PASS
20
AUTOMATIZAÇÃO
PrepPlus
21
TQ-Prep / ImmunoPrep Reagent
  • Sistema automático de lisis de eritrocitos
  • No requiere lavado
  • Preserva la morfología
  • Utiliza carruseles compatibles con XL-MCL, FC500,
    PrepPlus y CellPrep

22
PrepPlus TQ-Prep
  • Sistema automático de carga de muestra y
    reactivos para citometría de flujo
  • Utiliza tubos primarios de cualquier marca
  • Rack de hasta 24 tubos primarios con agitación
    para homogeneizar la muestra
  • Controlado por el TQ-Prep

23
PrepPlus TQ-Prep
  • Posibilidad de carga desde tubo abierto
  • 3 soportes diferentes para reactivos
  • Puede cargar anticuepos monoclonales, FlowCount y
    reactivos de control de calidad

24
CellPrep
  • Sistema de lavado celular por fibra hueca
  • Sustituye a la centrifugación
  • Mantiene la viabilidad celular
  • Mantiene la morfología y preserva células lábiles
  • No activa ni destruye plaquetas
  • Utiliza sangre entera, sangre lisada y cualquier
    suspensión celular

25
CellPrep
  • Fibras huecas con poros de 0.65 µm, que permiten
    la salida de moléculas y líquido de la suspensión
    original
  • Permite la concentración final de la muestra
  • Diferentes programas pregrabados, así como
    posibilidad de crear programas propios

26
Citometria de Imagem Uma nova Tecnologia no
apoio à Anatomia Patológica
27
Tipos de amostras possiveis de analisar por
Citometria de Imagem
28
Parâmetros possíveis de analisar por Citometria
de Imagem
  • Total de partículas
  • Forma
  • Tamanho
  • Área
  • Diâmetro
  • Perímetro
  • Perfeição
  • Irregularidade

29
Requisitos Básicos num Citómetro de Imagem
30
Captação dos Parâmetros de Análise
31
Citometria de Imagem
32
Protocolo para Citometria de Imagem
  • Partindo de um fragmento de tecido sólido, fixado
    em formol, processado e incluído em parafina.
  • Corte a 8?m, extensão em lâminas de gelatina
  • Desparafinar
  • Pós fixar com fixador de Bohm
  • Hidratar
  • Efectuar uma Hidrólise Ácida
  • Marcar as células com reagente de Shiff
  • Lavar com SO2
  • Desidratar
  • Montar
  • Quantificar o conteúdo em ADN e o ciclo celular
    no Citómetro de Imagem

33
MetaCyte - concept
  • microscope slide is scanned field by field at
    lowest possible magnification without gaps
  • objects of interest are automatically identified
    gallery images, object features and positions are
    recorded

34
MetaCyte - concept
  • on screen review of analyzed cells
  • false positives can be rejected
  • cells suitable for analysis are preselected with
    a mouse click
  • preselected objects can be automatically
    relocated at100x to capture highresolution
    images for analysis

35
MetaCyte - concept
  • histogram or scatter plot display of measured
    features
  • gating for selection of subpopulations
  • relocation of cells detected in a previous scan
    after re-staining

36
MetaCyte - concept
CCD Camera
Motorizedstage (x,y)
Motorized microscope (z)
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