RIA AND ELISA

1
RIA AND ELISA ?????
???????? ???????????? ? ? ? ?
2
Immunoassay????-Radioimmunoassay
?????????????????,S. A. Berson ? R. S.
Yalow???????????(Radioimunoassay, RIA)????.
??2?????????????????. ?Insulin-I131 metabolism in
human subjects Demonstration of insulin binding
globulin in the circulation of insulin treated
subject. Berson, S. A., Yalow, R. S., Bauman,
A., Rothchild, M. A. and Newerly, K. J. Clin.
Invest. 35, 170-190, 1956 ?Quantitative aspects
of the reaction between insulin and
insulin-binding antibody. Berson, S. A. and
Yalow, R. S. J. Clin. Invest. 38, 1996-2016,
1959
3
Dr. R. S. Yalow, 1977?? ???????????????????????
???????
??????(???)???(???)?Yalow???(RI??)???(???)
(??)
4
?RIA??????????????????????????????????????????????
???????? ?RRA(????????)?????????????CPBA(???????)?
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(TR-FIA)????????????? ???????????????????????????I
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5
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(??????????????????) Ag Ab ? Ag-Ab
(Ag???AB??) Ka(????) Ag-AB/AgAb
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? 1011-1012M-1 ??? (Kd????1-10pM ???)
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(Ka ??????????(affinity, avidity)??????)
6
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7
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9
RIA?????????????????
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10
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11
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A???????X??????R?????b????????boX0???b?
12
?RIA????????????????????????? ????????????????????
???Yalow????????????? ????????????????????????????
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?????? Logit Y ln Y/(1-Y) ???????
?? Y B/Bo BoX0 ??????
B???????????
13
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??????????????????????????????????????????????????
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14
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15
??????????????????????????????????????????????????
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16

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RIA??????????????????????????????????
17
RIA??????????????????? ?RIA???????????????????????
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??????????????????????????????????????????????????
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?????????????????????????????????????????? ???RIA?
??????????
18
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19
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20
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21
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22
???????ELISA ???????????????????????????. (???????
????) ?????????????????(????,?????????????????????
???) ???? ?????????????.
23
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IgE, ELISA ???(???) DNP-IgE ??? ??????IgG?-???
??????IgM?-??? OVA-IgE ??? OVA-IgG 1???
?dsDNA-???IgG2a ?ssDNA-??? ?dsDNA-??? ????
T???????????(TDART cell Dependent Antibody
Response)??? ?KLHIgM?? ?KLH IgG??
24
ELISA????????????????????????????????????? ??????
?? ????? Lambert-Beers low ????????
log (Io/I) elc e??????( M-1cm-1)l??? (cm)
c??(M) ?????????(????absorbance?????)?
???????????? ???????????(absorbance)?????????
???????50??????????100/502 log20.301 ???10 ?
??? 1.0 1 ? 2.0
0.1 ? 3.0 ???????????????? 2.5
??????
25
ELISA ????? -????????????????-
??????????????????????????????????????????????????
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26
ELISA ????? -?????????????????????-
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27
ELISA ????? -???????????????- ???????????????????
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????
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ELISA ????????????????? ??????????????????????????
??????????????????????????????????????????????????
2???????
ELISA?????????????????????????????????.???????????
???,??????????????.RIA??????????.
29
ELISA ?????????????????????? ?????2???????????
?????????????? (????????
S ???) RIA ?????ELISA????????????????????????????
??????????????????????????????????????????????????
??????????
30
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Kd??????(Ka??????)????????????????????????????????
??????????????????????????????????????????????????
?
31
ELISA ??????????????????????????????????????????
?????????????,????????????????????????????,
???????????????????????,???????????????????????
?????????????????????. ??????????????T?????????.
????????? ??? ????Biotin,STD 2hr?????STD?
100µl/well???????????????
?????????????????
32
???????????????? ??????(10ng/ml)??????90????????
???????????????????????45???????????????
33
???????????? ??????????????????
34
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35
?????????????????????????????????????????????????
1???????????,???????x????(????????2)??????????????
? ???????????T???????,?????10000pM?????1000pM????
????????0.15610ng/ml??271724pM???????????,??????
?????1??????10ng/ml?5ng/ml????(pM??????????)???,??
????????2??????????????????????????? ?????????????
??
36
Assay system ??? -Assay
validation A.????(Sensitivity) Blank?2SD,
ED50 B.??????? ?????(Precision).....????????
??????????????????????????????????1???????????????
?????????????????????(???????).???????????(CVCoef
ficient of variation)????? (SD/MEAN)x100 ????????.
????(Reproducibility).....??????????????????????
?????????????????????????????????????????????(????
???)?????.??????????????????CV?????????.
??????????? 8
??????? ?????? 4 ??????????? 3
No. A B
1 2466 491
2 2477 470
3 2410 457
4 2434 465
5 2433 459
6 2342 442
7 2358 459
8 2390 495
Mean 2417 467
SD 52.3 17.8
CV() 2.2 3.8
?? No Day 1 Day 2 Day 3 Day 4 Mean SD CV ()
C 166 156 153 153 157 6.16 3.9
D 628 625 624 624 625 1.89 0.30
E 2505 2409 2427 2549 2473 65.86 2.7
37
Assay system ??? -Assay validation
2 C.???????????????????????? ????(Specificity)....
.?????????????? ?????????????????????????????????
?????????????.???????????????.????????????????????
????. RIA???????????
38
??????????????? ????????????????????????????????
?????????????????????????????????
??????????????????????????????100?????
??????????????????????????????????????????????????
??????????????????????????????????????????????????
??????????????????????????????????????????????????
????????
39
Assay system ??? -Assay validation
3 ????(??)(Accuracy).....????????
????(????????????) ??(??)????????????????????? ??
??????????????????????(????)? ????????????.
40
Assay system ??? -Assay validation 4 ????
??????????????????????????????????????????????????
????????????.
??? ??? ??? ???
0 512
426 925 413 96.9
559 1070 561 100
662 1177 665 101
745 1270 758 102
 
??pg/ml
41
?????????????? ????????????????????????????????
??????????,???????????????????????????????????????
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42
(No Transcript)
43
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44
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45
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?? ???????????? ??????(????,??,??) ????????????????????????????????? ??????????????? ?RI???????? ??????? ?? ???????????? ????step??? ????RIA???????? ???????2?????????????????????? ????????????
46
??????? RIA ??????????????????? ???????????????? E
LISA ??????????????????????? ?? ???????????(?????
?????????) ?? ???????????????(??)????????? ?RIA???
????????????????? (PEG7000??)????
47
??????????? ????????????????????????
???? ??????????????????? ???????
Bioactive site??????,??????????,??????. ?????????
? ?????????????????????????????.
?????????? ??????(??????)??????????????????
??????? ???????????????????...
??????????? ???????????????????????????????.
??????????????????????????????????????
?????????????????????????????????????
???? ?????????DNA???????????
48
HCG????(Van Hall et al. Endocrinology 88, 456,
1971) -Bioactivity ????????? HCG
???????????????????????????????.??????????????????
HCG??????????????????????????????????.
???? ???() ????????(IU/mg) ????????(IU/mg) ????????(IU/mg)
OAAD? VPW? RIA
0 11,290 11,740 4,430
47 1,250 220 6,020
70 86 0.7 4,100
100 56 1.2 4,830
?????????????????????????????????????????????OAAD?
??2??????????VPW???4??????????????????????????????
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49
???????? 2007/07/22 First Edition
2007/07/24 Second Edition