Diapositive 1

1
Evaluation de leffet matrice lors de lanalyse
de stupéfiants par LC-MS-MS
M. DEVILLE1, N. DUBOIS1, C. PIRARD1, C.
CHARLIER1,2 1. Service de Toxicologie Clinique,
Médico-légale, de lEnvironnement et en
Entreprise, Centre Hospitalier Universitaire,
Liège, Belgique 2. Centre Interfacultaire de
Recherche du Médicament, Université de Liège,
Belgique
Objectif
La chromatographie liquide couplée à la
spectrométrie de masse (LC-MS) est une technique
de choix pour le dosage de diverses substances
dans les liquides biologiques. Cependant, ces
milieux sont susceptibles de contenir des
composés qui vont coéluer avec les analytes
dintérêt et altérer leur ionisation
(amplification ou suppression dionisation). Ce
phénomène, appelé  effet matrice  (EM), peut
compromettre la fiabilité des résultats. Il doit
donc faire partie intégrante du processus de
validation. Le but du présent travail est
dévaluer, au moyen de deux approches distinctes,
limportance de lEM éventuellement présent lors
du dosage de divers stupéfiants dans le sérum et
la salive.
Méthodes

• La première méthode dévaluation de lEM est
  laddition post-extraction 1 dans laquelle on
  compare le signal donné par un standard, avec et
  sans matrice
• A phase mobile enrichie en standard
• B matrice extraite puis enrichie en standard
• EM absolu () B/A x 100 (corrigé ou non par le
  standard interne)
• EM relatif () CV (corrigé ou non par le
  standard interne)

La deuxième méthode dévaluation de lEM est
linfusion post-colonne 2 3 dans laquelle on
injecte la matrice, tandis que lanalyte est
infusé en continu.
Seringue infusant lanalyte dans le spectromètre
Autosampler injectant la matrice extraite (sans
analyte)
Colonne
Ces deux méthodes ont été utilisées pour évaluer
leffet matrice de deux milieux biologiques,
soumis à deux techniques extractives et
chromatographiques distinctes. Vingt échantillons
sériques et 15 échantillons salivaires ont été
testés.
Extraction liquide-liquide
Cannabinoïdes
UPLC Waters Acquity ? MS Quattro Premier QQQ
(ESI) ? Masslynx 4.1
Salive Sérum
Extraction en phase solide
Amphétamines, cocaïne,
opiacés, opioïdes et métabolites
Résultats
Amphétamines, cocaïne, opiacés, opioïdes et
métabolites
Cannabinoïdes
Sérum addition post-extraction
Salive addition post-extraction
Sérum addition post-extraction
Composé EM moyen sans SI () EM moyen avec si () EM relatif avec SI ()
Morphine 105 99 6.6
M6G 91 108 3.3
M3G 79 108 4.2
6-MAM 129 114 4.3
Hydromorphone 154 100 4.4
Codéine 144 108 2.8
Dihydrocodéine 141 92 5.7
Hydrocodone 224 95 6.9
Oxycodone 254 102 3.1
Buprénorphine 42 92 5.8
Méthadone 73 98 0.9
EDDP 76 97 1.5
Amphétamine 182 121 8.1
Méthamphétamine 154 109 3.7
MDMA 166 94 5.2
MDA 179 127 3.9
MDEA 152 105 2.6
MBDB 147 108 1.9
Cocaïne 117 99 1.3
Benzoylecgonine 94 102 1.8
Cocaéthylène 81 100 1.4
Composé EM moyen sans SI () EM moyen avec SI () EM relatif avec SI()
Morphine 77 102 6.5
6-MAM 83 101 3.7
Codéine 145 101 2.3
Amphétamine 74 101 3.0
Méthamphétamine 64 98 6.0
MDMA 51 98 2.7
MDA 50 98 4.3
MDEA 63 99 4.2
MBDB 64 102 3.2
Cocaïne 88 102 1.5
Benzoylecgonine 74 102 1.1
Composé EM moyen sans SI () EM moyen avec SI () EM relatif avec SI ()
THC 81 100 1.6
THC-OH 125 100 1.1
THC-COOH 93 100 2.6
Salive addition post-extraction
Composé EM moyen sans SI () EM moyen avec SI () EM relatif avec SI ()
THC 93 102 4.1
Exemple dinfusion post-colonne lorsque lEM est
important, la diminution du signal est bien
visible (pour ce sérum EM22).
Exemple dinfusion post-colonne lorsque lEM est
important, la diminution du signal est bien
visible (pour ce sérum EM 23).
Phase mobile
Phase mobile
Injection dun sérum engendrant une importante
suppression dionisation au temps de rétention du
THC
Injection dun sérum engendrant une importante
suppression dionisation au temps de rétention de
lEDDP
Tr du THC
Tr de lEDDP
Conclusion
Alors que laddition post-extraction permet de
quantifier les EM, quelle que soit leur ampleur,
seuls les EM significatifs sont détectables par
infusion post-colonne. Enfin, leffet matrice est
un phénomène à la fois composé- et matrice
dépendant qui est corrigé de manière adéquate par
lusage de standards internes deutérés,
indispensables pour garantir la fiabilité des
résultats.
Références
1 Matuszewski B.K. et al., Anal. Chem. 2003,
75, 3019-3030. 2 Bonfiglio R. et al., Rapid
Commun. Mass Spectrom. 1999, 13, 1175-1185. 3
Souverain S. et al., J. Chrom. A 2004, 1058,
61-66.