TP Champignons

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TP Champignons
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Plan de la séance

• Champignons inférieurs
• Thalle unicellulaire Levure Saccharomyces
  cerevisiae
• Thalle Pluricellulaire
• Siphomycètes
• Absidia Glauca
• Rhizopus sp. Moisissure du pain
• Septomycètes
• Alternaria alternata
• Champignons supérieurs (à carpophore)
• Champigon de Paris (Agaricus biosporus)

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Macromycètes et micromycètes
Le thalle des champignons Mycélium
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• Les champignons microscopiques se divisent en
  deux groupes 
• Les champignons unicellulaires ou  levures 
• Les champignons filamenteux ou  moisissures 

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La levure de bière, Saccharomyces
cerevisiaeObservation, coloration, mise en
culture

• On peut s'en procurer chez tous les boulangers
  sous forme de petits blocs où les cellules sont
  agglomérées et en vie ralentie.
• Il est possible d'observer les cellules de levure
  au microscope. Il suffit pour cela de délayer une
  miette du paquet dans un verre d'eau et de
  mélanger soigneusement en mettant assez d'eau
  pour que le milieu présente à peine un léger
  trouble. Prélever alors une goutte. Pour observer
  au microscope.

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(No Transcript)
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Mise en culture

• Mélanger 1 g de levure de boulanger avec 100 mL
  d'eau tiède et 1 g de sucre. Bien agiter et
  prélever sur le champ 1 goutte de cette
  suspension de levures (dans laquelle il y a tout
  de même la bagatelle de quelques millions de
  cellules). Mettre la goutte dans 1 litre d'eau.
  Bien agiter.
• Avec un compte goutte, prélever un échantillon.
  Ouvrir la boîte contenant le milieu et toucher la
  surface du milieu avec l'extrémité du
  compte-gouttes en une dizaine d'endroits
  différents. Refermer le couvercle. Abandonner la
  boîte à température ambiante.

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ENSEMENCEMENT
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Mise en culture des cellules de la Levure
Champignons contaminants
Les quelques levures déposées sur un milieu vont
se multiplier et engendrer des colonies qui
deviennent visibles à l'œil nu en quelques jours.
Chaque colonie est issue d'un petit nombre de
cellules et présente une forme arrondie, une
taille et une couleur caractéristiques de
l'espèce Saccharomyces cerevisiae.
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On place quelques gouttes d'eau et une miette de
levure. On mélange pour obtenir une solution
légèrement laiteuse. Une goutte de cette solution
est ensuite placée entre lame et lamelle pour
être observée au fort grossissement
Observation des cellules de levure au Microscope
On distingue des cellules immobiles, plus ou
moins sphériques, de 6 à 8 microns, pourvues d'un
noyau. Le cytoplasme est entouré d'une membrane
épaisse, caractéristique des cellules végétales.
Il n'y a pas de chlorophylle, ce sont donc des
champignons (Ascomycètes). Ils sont formés d'une
seule cellule il s'agit de levures. 
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Des cellules de levure au Microscope
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Observation de cellules en bourgeonnement
Les levures grandissent et se multiplient par
bourgeonnement lorsqu'une cellule a atteint sa
taille maximale, elle forme un ou plusieurs
bourgeons qui grandissent à leur tour puis se
détachent de la cellule mère. Il s'agit d'une
forme de reproduction asexuée.
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Les moisissuresRhizopus nigricansLa moisissure
ou mucorale du pain

• Lorsqu'on abandonne une tranche de pain humide,
  nous observons, après quelques jours,
  l'apparition de moisissures.

Tranche de pain humide abandonnée
tranche de pain après quelques jours
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La moisissure ou mucorale du pain
Progressivement, le pain se recouvre d'un
feutrage de filaments c'est du mycélium
(filaments constituant les champignons). Ils
n'ont pas d'organisation particulière et ne sont
pas cloisonnés ce sont des moisissures. Il
s'agit de la mucorale du pain ou Rhizopus
nigricans. Cette moisissure utilise facilement
les sucres et l'amidon, ce qui explique son
développement rapide sur le pain. C'est un
saprophyte.
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Problème Comment expliquer la colonisation de
la tranche de pain par la moisissure ?

• Observons de plus près cette moisissure

• Une première observation à la loupe montre la
  présence de petites boules noires, ce sont des
  "sporocystes".
• Le reste de notre mystérieux colonisateur est
  constitué de filaments "le mycélium".

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Observation au Microscope de la moisissure
L'observation au microscope montre que le
sporocyste contient un nombre considérable de
petites boules ce sont des "spores".
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PRÉPARATION DE LA LAME ET OBSERVATION (sans
coloration)

• Une petite touffe de ce mycélium est placée entre
  lame et lamelle, à sec. On observe aisément les
  sporanges (constitués de la "tige" ou
  sporangiophore et d'une "boule" ou sporocyste).
  Dans ce sporocyste se trouvent les spores. (Une
  spore n'est pas une graine).
• Si on rajoute une goutte d'eau glycérinée ou
  salée, on peut voir ces sporanges gonfler
  légèrement, se déchirer et libérer les spores
  (c'est la dissémination), ce qui prouve
  l'importance du facteur humidité.
• Remarque plus tard, ces spores germent et
  redonnent des filaments de mycélium. Certains se
  rencontrent, fusionnent et forment des zygospores
  qui produisent du mycélium et d'autres sporanges.
  C'est ce qui explique l'envahissement rapide du
  récipient par cette mucorale

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Observation au Microscope optique
Une petite touffe de ce mycélium est placée entre
lame et lamelle. On observe aisément les
sporanges (constitués de la "tige" ou
sporangiophore et d'une "boule" ou sporocyste).
Dans ce sporocyste se trouvent les spores.
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Conclusions

• Spores endogènes Endospores
• Cest un saprophyte
• Mycélium sans cloisons Cest un Siphomycète

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Alternaria alternata
A. alternata est une espèce toxique et pathogène.
Les conidies sont allergènes et peuvent causer de
graves maladies respiratoires allergiques
(asthme, sinusites chroniques, rhinites). Elle
provoque également des mycoses cutanées aussi
bien de la peau que du cuir chevelu.
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Boite de Petri contenant deux colonies de B.
dothidea et trois colonies dAlternaria alternata
isolé à partir de lésions sur des feuilles de
pistache
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Culture dAlternaria alternata sur milieu Malt-Aga
r

• Espèce à croissance relativement rapide. Les
  colonies veloutées avec une périphérie blanche
  sont brun-gris à noires. La croissance aérienne
  de ce champignon est presque entièrement
  constituée de chaînes de spores.
• Les conidiophores sont 1 à 3 septés, lisses,
  droits ou flexueux, noirs et ont une croissance
  sympodiale Ils mesurent en moyenne 50 x 5 µm.
• Les conidies bourgeonnent à travers un ou
  plusieurs pores de la paroi du conidiophore, en
  chaînes simples ou ramifiées ces conidies
  pluricellulaires sont brunes à jaune-brun, en
  forme de massue avec un rostre apical.

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Alternaria alternata

• Sur le mycélium végétatif se forment des
  conidiophores isolés ou groupés, simples ou
  ramifiés, rectilignes, plus ou moins sinueux, à
  paroi lisse et brune, pouvant atteindre 50 µm.
• Les conidies dictyospores (porospores) sont
  produites.
• Les conidies, de forme murale (dictyospores),
  isolées ou groupées prennent naissance à partir
  du conidiophore, leur cicatrice estompée.
• Les conidiophores bruns sont formés de plusieurs
  cellules.

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• Conidiophore c'est un filament plus ou moins
  spécialisé, simple ou ramifié, à l'extrémité
  duquel se forment les conidies.
• Conidies (du grec Konos cône) appareil de
  dissémination des spores, placé en position
  distale.

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Absidia glauca (Zygomycota, Zygomycetes,
Mucorales, Mucoraceae). Formation Asexuelle de
spores Sporange contient nombreuses spores
uninuclées (gauche) et une large columelle
(droite)

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Absidia glauca

• Présence de sporocystophores isolés ou ramifiés,
  fixés au milieu des stolons.
• Sporocystophores groupés par 2, 3 ou 4, fixés à
  un mycélium aérien pouvant atteindre 1 mm de
  long.
• Sporocystes piriformes, grisâtres avec une
  apophyse marquée ( taille 30 - 60 µm ).
• La columelle est hémisphérique.
• Une cloison subterminale est notée dans le
  sporocystophore.
• Les sporocystospores sont globuleuses, lisses,
  de 2,5 - 5 µm de diamètre.
• L'apophyse, bien développée, a une forme
  d'entonnoir.
• Les rhizoïdes sont difficiles à mettre en
  évidence.
• Les zygotes sont sphériques, brun jaune à noir.
  Leur paroi est striée.
• Apophyse cest la Partie dilaté du
  sporocystophore situé sous le sporocyste chez les
  Zygomycètes

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Basides, spores et mycélium Le champignon de
Paris (agaricacées)Agaricus bisporus

• Chapeau de 5 à 10 cm, globuleux devenant
  hémisphérique, ensuite convexe puis
  s'aplatissant, de couleur de fond blanchâtre à
  brun clair, recouvert d'écailles ou de fibrilles
  roussâtres
• Lames fines et serrées, de couleur rose puis
  devenant brunes en vieillissant
• Anneau bien marqué, de couleur blanche, relevé
  chez les sujets juvéniles
• Pied trapu et ferme, plutôt court,
  s'épaississant vers la base, de couleur blanche

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(No Transcript)
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Sporée
On se procure un champignon de Paris et on place
l'extrémité de son pied dans l'eau, à bonne
température, pour qu'il arrive à maturité. Après
1 à 2 jours, quand les lamelles sont brunes, on
récupère des spores.
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Avec des ciseaux fins ou une aiguille lancéolée,
on coupe un petit morceau du bord d'une lamelle
du champignon et on le place entre lame et
lamelle (si nécessaire, on peut écraser doucement
la préparation).
On distingue, sur le pourtour de la lamelle, des
prolongements "ventrus" les basides, portant
des expansions les stérigmates, où sont fixées
de petites boules les spores. Le centre de la
lamelle, ainsi que tout le champignon, sont
constitués de fins filaments étroitement
assemblés le mycélium.