NSCLC de HGF/cMet Sinyal Iletimi Yolaginin Rol

1
NSCLC de HGF/cMet Sinyal Iletimi Yolaginin Rolü

• M.Gümüstekin1,3,4, B. Sis2, G.Bulut1, A.Kargi2,
  I. Öztop4, N. Olgun4, N.Atabey1
• Dokuz Eylül Üniversitesi Tip Fakültesi 1Tibbi
  Biyoloji ve Genetik, 2Patoloji, 3 Farmakoloji
  Anabilim Dallari, 4 Onkoloji Enstitüsü, Izmir 

2

• Reseptör Tirozin Kinazlar
• HGF-c-Met yolagi
• Karsinogenezdeki rolü, önemi
• Akciger kanseri gelisimindeki rolü
• NSCLC daki olasi rolü?
• c-Met, HGF ve heder bazi genlerin IHC sonuçlari
• 14. Ekson mutasyon analizi sonuçlari

3
Protein Tirozin Kinazlar

• ATP den bir ?-fosforil grubunu proteinlerin
  serin, treonin veya tirozin residülerine
  transferini katalizleyen enzimler
• Normal hücre ve doku gelisimi
• Artmis RTK aktivitesi
• Proliferatif hastaliklar
• Solid Tümörler
• Lösemi ve Lenfomalar
• Psöriyazis vb

4
Reseptör Tirozin Kinazlar

• Katalitik tirozin kinaz domain homolojisine göre
  20 alt aile
• Ekstraselüler ligand baglama bölgesi
• Tek transmembran bölge
• Intraselüler tirozin kinaz bölgesi
• Korunmus Ig benzeri, EGF benzeri, sisteince
  zengin bölgeler

5
Intraselüler Bölge

• Ekstraselüler Domain
• Ligand varliginda konformasyonel degisikligin ve
  reseptör dimerizasyonu yoluyla kinaz
  aktivitesinde artis- otofosforilasyonun
  gerçeklesmesi
• Katalitik Domain Korunumlu
• Reseptör otofosforilasyonunu ve RTK larin
  substratlarinin tirozin fosforilasyonunu
  katalizleyen ATP baglanma bölgesi

6
Reseptör Tirozin Kinazlarin Efektörleri

• pI3K p85 alt ünitesi
• non-reseptör PLCgama
• Src ailesi tirozin kinazlar
• p120GAP (Ras sinyal iletimindeki bir GTPaz aktive
  edici enzim)
• Grb2 Adaptör protein
• SH-PTP2 (Shp2) Tyr spesifik protein fosfataz

7
c-Met Reseptör Tirozin Kinaz
S Sema domaini C sisteince-zengin domain Ig
immunoglobulin domainleri K kinaz domaini
HOS, 7q21-q31, 12 kb, 150 kDa
8
c-Met ve Tpr-Metin substrat baglama bölgeleri
Ekstraselüler Domain
Transmembran Domain
Juxtamembran Domain
Kinaz Domaini
Karboksi terminal docking bölgesi
c-Met
Tpr-Met
9
Hepatosit Büyüme Faktörü /Scatter Factor (HGF/SF)

• Hepatositler
• Epithelial hücreler
• Endotelial hücreler
• Nöronlar
• Melanositler
• Lenfositler
• Kemik iligi kökenli hücreler

• Mitogen
• Morfojen
• Motojen

10
HGF/SF

• Normal development
• ve eriskinde homeostaz
• Böbrek, karaciger,dalak ve plasentanin gelisimi
• Nöral development
• Branching morphogenesis
• Böbrek ve akciger rejenerasyonu
• Karacigerin normal fonksiyonlari
• Yara iyilesmesi

• Karsinogenez
• Karsinomlar (kolon, meme,bas-boyun,
  gastrik,akciger,tiroid ve renal karsinomlar)
• Melanom
• Sarkomlar
• Akciger??

11
Hepatosit Büyüme Faktörü / Scatter Factor
12
Hepatosit Büyüme Faktörü / Scatter Factor (HGF/SF)
13
HGF stimülasyonunun etkisi
14
HGF-c-Met Sinyal iletimi
Plazma Zari
15
HGF/c-MetInvazyon Metastaz

• HGF, ekstrasellüler matriks proteolizinde artma,
  hücre dissosiasyonu, hücre motilitesinde artma
  gibi metastazi kolaylastiran olaylarin hepsinin
  baslatabilme yeteneginde olan tek ekstrasellüler
  sinyal molekülüdür.
• Bu yolagi baskilayan inhibitörler hücre
  motilitesi, invazyon ve anjiogenezi
  bloklamaktadir
• Atabey N, et al. J of Biol Chem 276 (17)
  14308-14, 2001, Maulik G et al, Cytokine Growth
  Factor Rev 13(1) 41-59, 2002, Soriano JS, et al
  Mol Cancer Ther, 2004

16
Reseptör Tirozin Kinazlarin Aktivasyonu

• Otofosforilasyon çift etkiye sahiptir
• 1- Tyr fosrorilasyonu sonucu elde edilen
  aktivasyon aktif merkez disindaki Tyr lerin de
  fosforilasyonuna neden olur
• 2-Bu fosforile rezüdüler efektör moleküllerin
  baglanmasi için baglanma bölgesi olusturur (SH2
  ve PTB domaini olan moleküller için)

17
c-Met-HGF Signaling ve Solid Tümör Metastazi
Arasindaki Iliski
18
NSCLCde c-Met

• Hücre dizilerinde c-Met ekspresyonunda artis ve
  kendiliginden Met kinaz aktivitesi
• Rekürrens gelisen hastalarda HGF düzeyleri yüksek
  , kötü prognoz ile iliskili
• Siegfried JM et al, Cancer Res 57(3)433-9,
  1997.
• c-Metin yapisal veya parakrin aktivasyonu hücre
  yasamini ve proliferasyonunu saglayan sinyal
  ileti yolaklarini aktive ederek tümör
  progresyonunusaglar
• Qiao H et al, J Cell Biochem 86(4) 665-77,
  2002.
• Adenokarsinomda 35, Büyük hücreli andiferansiye
  kanserinde 20, Skuamöz hücreli kanserde ise
  normal akciger dokusundan daha az veya yakin
  oranda, Adenokarsinomda c-metin ekspresyon
  düzeyi ile tümör diferansiasyonu arasinda
  korelasyon var
• Tsao MS et al, Lung Cancer 20(1) 1-16,1998.

19

• Dokuz Eylül Üniversitesi Tip Fakültesi Patoloji
  arsivinden saglanan 63 NSCLC olgusuna ait doku
  örneklerinde, HBF ve c-met ekspresyonu
  immünohistokimyasal olarak belirlendi.

20

• Immünohistokimyasal analizler sonucunda NSCLC
  dokularinin
• 81inde c-Met,
• 48inde HGF ekspresyonunun arttigi belirlendi.
  

c-Met
HGF
21

• Ileri evre olgularin 72sinde c-Met, 58 inde
  HGF ekspresyonunun yüksek oldugu saptandi.
• Tümör boyutu, lenfatik metastaz, tümör evresi ve
  nüks orani ile korelasyon gözlenmedi.
• Metastaz görülen 3 olguda c-Met ekspresyonu
  yüksek bulundu.

22
(No Transcript)
23
(No Transcript)
24
Yöntem
Parafine gömülü doku ? DNA eldesi
(Nucleospin) ? c-Met reseptörünün tirozin kinaz
bölgesini kodlayan 14.eksona özgü primerler
Forward primer GCCCATGATAGCCGTCTTTA Revers
primer CAACAATGTCACAACCCACTG ? Polimeraz zincir
reaksiyonu (PCR) ? DNA dizi analizi
25
Sonuçlar
Dizi analizi
14. Ekson PCR
256 bp
Skuamöz hücreli Ca T3N0M0 c-met overeksprese
A delesyonu Çerçeve kaymasi
26
(No Transcript)
27

• NSCLC gelisiminde HGF/c-Met yolaginin
  aktivasyonun rol oynayabilir

28
1-Diger eksonlardaki mutasyonlarin
taranmasi2-Hasta sayisinin genisletilmesi3-Mutas
yonlarin ve HGF/c-Met yolagi aktivasyonunun NSCLC
gelisiminde rol oynayan diger moleküllerin
saptanmasi
Sürmekte Olan Çalismalar