G

1
Génterápia
A páciens sejtjeinek genetikai módosításán
alapuló terápia. - klasszikus a célsejtekbe
juttatjuk a gént és expressziót idézünk
elô így pótoljuk a hiányzó aktivitást,
lt--- szelektíven megöljük a target
sejtet, mozgósítjuk az immun-rendszert. -
nem-klasszikus az adott gén expressziójának
gátlása, a mutáció kijavítása Csak
szomatikus génterápia végezhetô!

2
- klasszikus a célsejtekbe juttatjuk a gént és
expressziót idézünk elô így pótoljuk a hiányzó
aktivitást, lt--- szelektíven megöljük a target
sejtet, mozgósítjuk az immun-rendszert.
3
- klasszikus a célsejtekbe juttatjuk a gént és
expressziót idézünk elô így pótoljuk a hiányzó
aktivitást, szelektíven megöljük a target
sejtet, mozgósítjuk az immun-rendszert.
4
- nem-klasszikus az adott gén expressziójának
gátlása, a mutáció kijavítása
5
Génterápia
- klasszikus a célsejtekbe juttatjuk a megfelelô
gént és így pótoljuk a hiányzó aktivitást - in
vivo gén-transzfer, - ex vivo gén-transzfer.

6
A géntranszfer módszerei hordozók
7
Vektor-statisztika
8
Génbevitel liposzóma segítségével
9
Barátunk a retrovirus
10
Barátunk a retrovirus
11
(No Transcript)
12
(No Transcript)
13
ADA/génterápia
Ashanti de Silva az elsô páciens, aki
génterápiás kezelésben részesült
(1990-ben). Adenosin dezamináz-hiány (ADA) a
T-sejtek mûködési zavarát idézi elô -gt
immunhiány. Ex vivo génterápiával a T-lifocitákat
ADA cDNS-t tartalmazó retrovirussal fertôzték,
majd a páciensbe visszajuttatták.
Párhuzamosan enzim-szubsztituciós terápiát is
alkalmaztak.
14
Science 288 669-671 (2000)
15
(SCID)-X1
Kvantitativ PCR (A) és RT-PCR (B) genomba
való inszerció és expresszió
16
(SCID)-X1
Limfociták a génterápia után
17
(SCID)-X1
A gc fehérje sejtfelszíni expressziója
proliferációs képesség
18
Barátunk a retrovirus?
2002 ôszén az egyik génterápiával kezelt SCID(X1)
gyereknél a leukémia egy új formáját
diagnosztizálták. LAM-PCR technika segítségével
meghatározták, hogy a retrovirus konstrukció az
LMO-2 génbe inszertálódott, amely egy LMO-2 nevû,
ismeretlen funkciójú fehérjét kódolja
inszerciós mutagenezis. Kiderült, hogy a gyerek
valamennyi T-sejtje az LMO-2 fehérjét
expresszálja magas szinten. Az is kiderült, hogy
a családban már kétszer fordult elô gyermekkori
leukémia. Eddig 1755 pácienst kezeltek
retovirussal. Ez az elsô transzformáció. A
SCID(X1) gyógyítására ma nincs konvencionális
terápia. Perceken belül megismerkedünk ezzel a
technikával.
19
Polyclonal long-term repopulating stem cell
clones in a primate model Manfred Schmidt,
Philipp Zickler, Gesa Hoffmann, Sebastian Haas,
Manuela Wissler, Arne Muessig, John F. Tisdale,
Ken Kuramoto, Robert G. Andrews, Tong Wu,
Hans-Peter Kiem, Cynthia E. Dunbar, and Christof
von Kalle
Outline of linear amplification-mediated
(LAM)-PCR. A new combination of linear
amplification of target DNA with solid-phase
second-strand synthesis, followed by ligation of
an oligonucleotide cassette and then nested
exponential PCR, was devised for the detection
and direct genomic sequencing of unknown
retroviral vector integration sites. (A) Linear
PCR with a long terminal repeat (LTR)-specific
biotinylated primer was performed by repeated
primer extension. Subsequently, the amplified
fragments of target DNA were enriched by magnetic
tag selection of extension primers. (B) A
second DNA strand of each enriched target
sequence was synthesized by random hexanucleotide
priming. (C) Resulting double-stranded DNA was
specifically digested with the restriction
enzyme Sse9I, which cuts within genomic DNA
approximately every 256 bp. The length of each
fragment is thus dependent on the distance of
the vector insertion site from the next Sse9I
recognition sequence. (D) An asymmetric
oligonucleotide ligation cassette (LC) was
ligated to the end of the Sse9I-digested
fragments. (E) Nested exponential PCR
amplifications were then performed with
LC- specific forward primers (LC 1 followed by LC
2) and LTR-specific reverse primers (LTR II
followed by LTR III).
20
(No Transcript)