RICKETTSIOSI ed EHRLICHIOSI EZIOLOGIA e DIAGNOSI DI LABORATORIO

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RICKETTSIOSI ed EHRLICHIOSIEZIOLOGIA e DIAGNOSI
DI LABORATORIO

• Dott.ssa Valentina Ebani
• Dip. Patologia Animale, Profilassi e
• Igiene degli Alimenti
• Facoltà di Medicina Veterinaria
• Università di Pisa

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EZIOLOGIA

• BATTERI ? Gram negativi Giemsa
• Gimenez
• ? Pleomorfi coccoidi/elissoidali
• Parassiti intracellulari obbligati
• liberi nel citoplasma in vacuoli
  intracitoplasmatici
• (Rickettsie) (Ehrlichie)

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CELLULE BERSAGLIO CELLULE EMATOPOIETICHE CELL
ULE MATURE O IMMATURE ENDOTELIALI Ehrlichie
Rickettsie
TRASMISSIONE TRAMITE VETTORI INVERTEBRATI
ZECCHE
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PRECEDENTE CLASSIFICAZIONE

• ORDINE RICKETTSIALES
• Famiglia RICKETTSIACEAE Tribù Rickettsieae
  Genere Rickettsia
• Tribù Ehrlichieae Genere
  Ehrlichia
• Generi Coxiella Cowdria Neorickettsia
• Famiglia ANAPLASMATACEAE Generi Anaplasma
• Aegyptianella
• Haemobartonella
• Eperythrozoon
• Famiglia BARTONELLACEAE Genere Bartonella

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• STUDI GENOMICI SU
• Gene 16S rRNA
• Gene groESL
• Geni che codificano per proteine di membrana

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ATTUALE CLASSIFICAZIONE

• ORDINE RICKETTSIALES
• Famiglia RICKETTSIACEAE Genere Rickettsia
• Genere Orientia
• Famiglia ANAPLASMATACEAE Genere Anaplasma
• Genere Ehrlichia
• Genere Neorickettsia
• Genere Wolbachia
• Genere Cowdria

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FAMIGLIA RICKETTSIACEAE
TYPHUS GROUP
SPOTTED FEVER GROUP

• Rickettsia
• Orientia tsutsugamushi

R. prowatzekii R. typhi R. canadensis
R. rickettsii R. conorii R. felis R.
helvetica R. akari R. sibirica
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entrata moltiplicazione rilascio
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Rickettsia rickettsii

• FEBBRE DELLE MONTAGNE ROCCIOSE
• ROCKY MOUNTAIN SPOTTED FEVER (RMSF)
• Ixodes ricinus

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Rickettsia rickettsii
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Rickettsia conorii

• FEBBRE BOTTONOSA DEL MEDITERRANEO
• Rhipicephalus sanguineus

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Rickettsia felis

• Rickettsia typhi
• CANE
• GATTO
• Ctenocephalides felis

!?
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FAMIGLIA ANAPLASMATACEAE
A. phagocytophila A. platys A.
marginale A. bovis

• Anaplasma
• Ehrlichia
• Neorickettsia

E. canis E. chaffeensis E. ewingii E. muris
E. ruminantium
N. risticii N. sennetsu N. helminthoeca
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entrata moltiplicazione rilascio
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Ehrlichia canis

• EHRLICHIOSI MONOCITICA
• PANLEUCOPENIA TROPICALE CANINA
• Rhipicephalus sanguineus
• MONOCITI

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Ehrlichia chaffeensis

• EHRLICHIOSI MONOCITICA
• MONOCITI
• Ehrlichia ewingii
• EHRLICHIOSI GRANULOCITICA
• GRANULOCITI

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Anaplasma phagocytophila

• EHRLICHIOSI GRANULOCITICA

Ixodes ricinus
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Neorickettsia risticii

• EHRLICHIA MONOCITICA
• POTOMAC HORSE FEVER
• MONOCITI

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DIAGNOSI DILABORATORIO
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DIAGNOSI INDIRETTA

• Immunofluorescenza indiretta
• gold standard
• Soglia di positività
• 140 Ehrlichie
• 164 Rickettsie

SIERO
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• VANTAGGI
• Vetrini IFI per E.canis
• A. phagocytophila
• N. risticii
• R. conorii
• R. rickettsii
• R. typhi
• R. prowazekii

Dip. Patologia Animale, Profilassi e Igiene degli
Alimenti - Pisa

• SVANTAGGI
• Attrezzatura
• Lettura

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ALTRI TEST SIEROLOGICI
E. canis

• KIT COMMERCIALI
• Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)
• ANTIGENI
• whole cell
• Proteine ricombinanti (p30 p30-1)
• Proteina ricombinante (rMAP2)

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SENSIBILITA KIT
Ridotta con titoli anticorpali 140 180
CANI CON EHRLICHIOSI IN FASE NON ACUTA HANNO
TITOLI ANTICORPALI BASSI
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PROBLEMA CROSS-REAZIONI

• NON CONFONDERE LE CROSS-REAZIONI
• CON LE CO-INFEZIONI
• Frequenti le co-infezioni legate allo stesso
  vettore
• E. canis / R. conorii
• A. phagocytophila / R. rickettsii

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DIAGNOSI DIRETTAEhrlichiosi

• STRISCIO buffy coat
• sangue da vasi capillari
• aspirato tissutale da milza , polmone,
  linfonodi (E. canis)

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ISOLAMENTO

• difficoltà di esecuzione
• linee cellulari diverse
• laboratorio di classe 3 (eccetto E. canis)

Su stipite isolato sono possibili studi spr di
ordine epidemiologico
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DIAGNOSI MOLECOLARE

• Sangue in EDTA buffy coat
• Tessuti
• Estrazione DNA
• Polymerase chain reaction
• (PCR)

Utilizzo di primer diversi a seconda dellagente
eziologico ricercato
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Presso Dip. Patologia Animale, Profilassi e
Igiene degli Alimenti, Università di Pisa
E. canis E. chaffeensis A. phagocytophila N.
risticii Rickettsia spp.
sequenziamento
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CONCLUSIONI

• Diversi agenti responsabili di ehrlichiosi e
  rickettsiosi nel CANE
• Sierologia mediante IFI
• Ausilio offerto da metodiche molecolari