Pr

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Cours d'Hémato-cytologie DUT ABB
3- Frottis sanguins
Auteur Bruno Flamand, IUT de Dijon
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LE FROTTIS SANGUIN obtenir sur une lame de verre
une couche unicellulaire d'éléments figurés du
sang répartis sur tout le frottis et fixés dans
l'aspect le plus proche de leur état physiologique
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Appliquer un mouvement de translation horizontale
rapide en maintenant la spatule dun angle de 45
environ sans appuyer tout au long de la lame.
Sécher par agitation pour fixer temporairement
les cellules
Positionner la lame de façon à prendre la
totalité de la goutte.La laisser se répartir de
façon homogène le long du biseau.
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Bon frottis   de bonne taille (½ à ¾ de la
lame)de bonne densité, goutte étalée en entier,
distant des bords de la lame donc accessible en
tout point à lobservation microscopique
Ce quil ne faut pas faire
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Coloration Frottis sanguin May Grünwald
Giemsa L'action des ions acides et basiques
obtenus après dissociation par de l'eau neutre de
deux colorants alcooliques (méthanoliques) -le
May Grünwald (éosine bleu de méthylène) -le
Giemsa (éosine azur de méthylène) sur les
éléments cellulaires complémentaires permet
d'obtenir quatre affinités - trois
orthochromatiques Acidophile du gris au
légèrement rosé Basophile violet foncé au
noir Neutrophile rose-violet - une
métachromatique Azurophile rose-rouge
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• Technique
• Eau neutre eau dé ionisée (acide) neutralisée
  par quelques gouttes deau du robinet (basique)
  en présence dun indicateur coloré virant aux
  alentours de 7,4 (par exemple le Bleu de
  Bromothymol).
• Plus rapide et suffit parfois eau du robinet ou
  comprimés eau neutre
• Fixer le frottis par le méthanol en limmergeant
  dans le May Grünwald pur pendant 3 minutes.
• Plonger la lame dans un bain de May Grünwald
  dilué au ½ en eau neutre durant une minute.
• Plonger la lame dans un bain de Giemsa dilué au
  1/10ième durant 20 minutes (Giemsa lent).
• Rincer doucement la lame à leau neutre ou du
  robinet.
• Essuyer le dessous de la lame. La laisser sécher
  verticalement.

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• Lexamen du frottis sanguin
• faible grossissement (obj.x40) permet
  dapprécier la qualité du frottis
• Études Cytologiques obj.x100 à limmersion.
• - observer les éventuelles anomalies
  morphologiques des GR anomalies de forme, de
  taille, de coloration, la présence dinclusions
  intra-érythrocytaires.
• -observer les éventuelles anomalies
  morphologiques des plaquettes (taille, forme), la
  présence éventuelle damas plaquettaire, et
  confirmer la densité de la numération
  plaquettaire.
• -Effectuer la Formule Leucocytaire
• -penser aussi aux Parasites sanguins intra
  éryhthrocytaires (Plasmodium, Babésia) ou
  extra-érythrocytaires (Trypanosomes,
  Microfilaires)

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Parcours du frottis sanguin en vue de la
réalisation dune formule leucocytaire La formule
leucocytaire correspond à la distribution des
différentes variétés leucocytaires identifiées le
long dun parcours qui tient compte de la
distribution des globules blancs lors de
létalement (les granulocytes et les monocytes
sont plus fréquemment rencontrés sur les bords et
en bout de frottis). Cette distribution doit être
représentative de la répartition physiologique
des leucocytes.
Identifier ainsi 100 (ou 200) leucocytes minimum
et calculer le pourcentage des différentes
variétés Calculer à laide de la numération des
leucocytes les valeurs absolues indispensables à
linterprétation de la formule leucocytaire
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• Remarques
• Des leucocytes immatures (ou anormaux) peuvent
  être identifiés lors du parcours. Exemple
  myéloblastes, promyélocytes, myélocytes,.
• ils sont à inclure dans le pourcentage et à
  introduire dans le de la formule leucocytaire.
• Des érythroblastes  (souvent Erythroblastes
  acidophiles ou polychromatophiles) peuvent être
  également rencontrés Ils sont à compter au
  cours de la formule leucocytaire, mais ne sont
  pas inclure dans le de la formule leucocytaire.
• Exemple de FL avec éléments immatures
  Polynucléaires Neutrophiles 75,Lymphocytes
  15,Monocytes 5 ,Promyélocytes 2, Myélocytes
  5, et Erythroblastes 5 pour cent GB
  rencontrés.
• Cependant les éryhthroblastes ont été dénombrés
  lors de la numération automatisée des GB, comme
  des cellules nuclées, et il est nécessaire
  d'effectuer une correction de cette numération,
  si age dErythroblaste est très élevé, et nombre
  GB faible, afin quelle ne corresponde uniquement
  quà celle des leucocytes.
• GB réels (Num GB automate x100) / (100
  Erythroblaste)

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Atlas dimages cytologiques en Hématologie http/
/bioimage.free.fr/ http//www.med.univ-tours.fr/fm
c/Pages/hemato.html http//www.med.univ-angers.fr/
discipline/lab_hema/
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Formule automatisée Les automates réalisent une
analyse en flux d'une quantité beaucoup plus
grande de cellules selon différents critères
physiques (diffraction lumineuse avec mesure à
différents angles, conductance de signaux
électriques...). L'étude informatique des
éléments obtenus permet dans de nombreux cas de
rendre la formule leucocytaire. Mais la présence
d'anomalies cytologiques érythrocytaires,
leucocytaires et/ou thrombocytaires nécessitera
l'analyse microscopique d'un frottis sanguin
coloré
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Présence déléments médullaires dans le sang
périphérique Erythroblastes souvent E.
acidophile et E. polychromatophile
A compter au cours de la FL, mais ne pas inclure
dans le Ex PN 80, L 15, M 5 , et
Erythroblastes 5
Si Erythroblaste très élevé, et nombre GB
faible correction de la numération automatisée
des GB N GB (Num GB automate x100) / (100
Erythroblaste)
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(No Transcript)
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(No Transcript)
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ANOMALIES MORPHOLOGIQUES DES GR

• Anomalies de Taille

Macrocytose
Microcytose
Anisocytose
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• Anomalies de forme

Dacryocytes, poires
Ovalocytes
Schizocytes
Sphérocytes
Drépanocytes
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• Anomalies de coloration

Hypochromie
Hématies cibles
Polychromatophilie
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• Inclusions

Ponctuations basophiles
Corps de Jolly
Faux-ami Trophozoïte de Plasmodium
Anneau de Cabot
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ANOMALIES MORPHOLOGIQUES DES PLAQUETTES
Plaquette géante
Agrégat plaquettaire
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Éléments cellulaires médullaires de la lignée
granulocytaire A compter lors de la formule
leucocytaire et à inclure dans le
Métamyélocytes N
Myélocytes N
Promyélocyte N
Myéloblaste
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(No Transcript)
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(No Transcript)
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(No Transcript)
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Lymphocyte hyperbasophile
Plasmocyte
A inclure dans le de la FL
Lymphocytes hyperbasophiles apparaissent dans des
infections virales ou parasitaires syndromes
mononucléosiques, souvent lhyperlymphocytose est
polymorphe
Lymphocyte hyperbasophile