Solubilidad

1
(No Transcript)
2
Solubilidad
Es un balance entre atracciones

1. Atracciones disolvente-disolvente

1. Atracciones soluto-soluto

1. Atracciones disolvente-soluto

Habrá disolución sólo si 3 es mayor que 1 y que 2
3
Solubilidad de proteínas y separaciones por
precipitación

• Solubilidad de proteínas en fuerza iónica baja
• Precipitación a fuerza iónica alta
• Precipitación con disolventes orgánicos
• Precipitación con polímeros
• Precipitación por afinidad
• Precipitación por desnaturalización selectiva
• pH
• disolventes orgánicos
• temperatura

Scopes, R. K. Protein purification (1994)
4
Precipitación a fuerza iónica baja Salting in
La solubilidad de las proteínas es resultado de
interacciones polares con el disolvente,
interacciones iónicas con las sales presentes y
fuerzas electrostáticas repulsivas entre
moléculas con cargas del mismo signo.
Repulsión Atracción Poca atracción/repulsión
en el P.I. Poca atracción/repulsión entre
agregados heterogéneos
5
Precipitación a fuerza iónica baja Salting in
Este comportamiento es útil en experimentos de
diálisis y debe considerarse durante la
filtración en gel La precipitación isoeléctrica
se puede modificar agregando sales que afecten el
pH isoeléctrico
6
Precipitación a fuerza iónica alta Salting out
El fenómeno de precipitación a fuerza iónica
alta depende principalmente de la hidrofobicidad
de la proteína Se puede entender como un
equilibrio de competencia entre la sal y la
proteína por el agua de solvatación
7
Precipitación a fuerza iónica alta Salting out
La solvatación de una región hidrofóbica es un
fenómeno demandante desde el punto de vista
entrópico
8
Precipitación a fuerza iónica alta Salting out
9
Precipitación a fuerza iónica alta Salting out
Por qué (NH4)2SO4?

• Puntos a considerar
• Efectividad de la precipitación
• Interacción directa con la proteína
• Influencia del pH en la distribución de
  especies
• Solubilidad de la sal
• DHºdis
• Densidad de la disolución concentrada
• Precio

10
Precipitación a fuerza iónica alta Salting out
Serie liotrópica o serie de Hofmeister
SCN lt ClO4 lt NO3 lt Br lt Cl lt acetato lt SO42
lt PO43 NH4 gt K gt Na Por qué?
Hofmeister, F. (1888) Arch. Exp. Pathol.
Pharmakol. 24, 247-260.
11
Precipitación a fuerza iónica alta Salting out
Cuánto pongo?
12
Precipitación a fuerza iónica alta Salting out
Log S A - m(NH4)2SO4
13
Precipitación por disolventes
Qué disolventes? Qué hacen los
disolventes? Se desnaturalizan las proteínas?
14
Precipitación por disolventes
Cuánto disolvente?
15
Precipitación por disolventes
Desnaturalización, la puedo usar?
16
Precipitación por afinidad
Agregado lineal formado por un anticuerpo
policlonal y una proteína monomérica Agregado
lineal formado por un anticuerpo y una proteína
dimérica Agregado tridimensional formado por
anticuerpos y una proteína tetramérica
17
Precipitación por desnaturalización selectiva
18
Precipitación por desnaturalización selectiva
Con temperatura