An

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Análise da expressão e função de uma possível
proteína desacopladora em Rhodnius PROLIXUS

• Vinicius de Lima

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Introdução

• O modelo de estudo
• Inseto hematófago obrigatório
• Hemíptero da família Reduviidae e subfamília
  Triatominae
• Importância para a saúde pública mundial
  Transmissor do T. cruzi.

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Introdução

• Idéia geral do funcionamento da UCP

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Introdução

• UCP em rhodnius prolixus
• Alimentação sanguínea muitos ROS
• Teoria dos vampiros
• UCP seria uma adaptação ao estresse oxidativo?

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introdução

• UCP na termogênese
• Descrita em vários organismos como uma proteína
  termogênica
• Poderia esta ser responsável pela geração de
  calor em órgãos tais como o músculo de vôo?

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Metodologia

• Genômica
• Busca do(s) gene(s) para UCP no genoma de
  Rhodnius prolixus usando seqüências de UCP de
  outros insetos
• Montagem do gene usando o algorítimo GeneWise
• Confirmação filogenética usando o programa MEGA 4.

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metodologia

• Experimentos de bancada
• Elaboração de iniciadores específicos para UCP de
  Rhodnius prolixus
• RT-PCR Confirmação da expressão gênica em
  determinados órgãos -gt Alvos como Intestino médio
  posterior, corpo gorduroso e músculo de vôo

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(No Transcript)
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metodologia

• RT-qPCR para análise de quantificação da
  expressão gênica
• Fabricação de um peptídeo sintético a partir da
  seqüência de UCP e posterior síntese de anticorpo
  policlonal
• Western Blotting / imunohistoquímica nesses
  órgãos analisados sob situação de jejum,
  alimentação sanguínea e vôo.
• RNAi Análise de fenótipo por microscopia de
  fluorescência marcação de ROS
• Calorimetria do músculo de vôo

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Resultados e conclusões esperadas

• Rhdnius prolixus possuirá UCP em seu genoma.
• Essa(s) UCP(s) deve(m) ser expressa(s) nos três
  órgãos analisados.
• Suas expressões tanto gênicas quanto protéicas
  devem sofrer regulações em função do estado
  fisiológico do inseto

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Resultados e conclusões esperadas

• UCP deve proteger, principalmente os intestinos,
  de um estresse oxidativo mediado pela presença do
  grupo Heme
• UCP deve aumentar a produção de calor no músculo
  de vôo e sem esta o vôo deve ser comprometido
• Ausência de UCP deve resultar em possível morte
  ou não postura de ovos

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Publicação

• Em dois anos
• Insect Biochemistry and Molecular Biology,
• Journal of Insect Science, Isect Physiology
• ou Journal of Biological Chemistry