Introducci

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Introducción al estudio de la Histología y
Morfología Celular Professor Verónica
Pantoja . Lic. MSP.
Kinesiologia
Objetivo Especificar las herramientas que
utiliza la histología para el estudio
ultraestructural de tejidos y de la célula como
unidad morfológica y funcional del organismo
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Qué es la Histología?

• Etimológicamente histo tejido logos
  estudio
• Es la rama de la biología encargada del análisis
  microscópico de la anatomía celular y tisular de
  los tejidos biológicos.
• Marcello Malpighi es reconocido como el fundador
  de la Histología
• Las primeras investigaciones histológicas se
  hicieron en el siglo XVII gracias a la invención
  del microscopio óptico por Antonio Van
  Leeuwenhoek

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Obtención de la muestra de material humano El
material humano puede provenir de tres fuentes
Las necropsias, las biopsias y las piezas
operadas.
Necropsias Son las piezas que se
obtienen de un cadáver.
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Piezas operadas Los tejidos que han sido
extraídos de las intervenciones quirúrgicas,
generalmente tumores u órganos inflamados,
también pueden darnos material de investigación.
Biopsias Son trozos de tejido que se obtienen de
un sujeto con vida con el objeto de estudiarlos
al microscopio y efectuar un diagnóstico
histopatológico.
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METODOS HISTOLOGICOS
2- Examen mediato o post-morten
1-Examen inmediato o in vivo
a) En fresco animales unicelulares y
células libres. b) Coloración vital
usando soluciones de colorantes no tóxicos
(colorantes vitales), coloración intravital o
in vivo, y la coloración supravital, donde pueden
colorearse células libres o porciones de órganos.
Requiere de la muerte celular y supone seguir una
serie de pasos, la Técnica histológica
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PASOS DE LA TECNICA
1.Obtencion del material 2.Fijacion 3.Inclusion
4.Obtencion del corte 5.Coloracion 6.Montaje
Deshidratación Aclararamiento
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1- Obtención del material

• Pueden provenir de
• biopsias quirúrgicas
• material obtenido de necropsias
• utilizando animales de laboratorio
• estudios experimentales en animales
• material de cultivos de tejidos
• frotis o extendidos

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2- Fijación
Es el proceso Físico (Histoquímico) que logra una
situación estable de los constituyentes
tisulares, interrumpiendo las reacciones
enzimáticas de autólisis.
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• Cualidades de un buen fijador
• 1) Actuar con rapidez y detener los procesos
  autolíticos.
• Poder de penetración.
• Conservación
• 4) No interferir y facilitar los procesos
  posteriores.
• 5) Endurecer el tejido y darle mayor
  consistencia.
• 6) Insolubilizar los componentes de los tejidos.
• 7) No producir estructuras artificiales.

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(No Transcript)
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Mecanismo de acción de los fijadores
Por reducción, al contacto co la sustancias
orgánicas Formando un precipitado fino Ácido
ósmico,bicloruro de mercurio.
Por coagulación de las proteínas, sin combinarse
con ellas alcohol, formol, ácido Pícrico, etc.
FIJADORES
Formando combinaciones químicas con las
sustancias orgánicas ácido crómico, bicromato de
potasio, de amoniaco, etc
Por oxidación bicromato de potasio.
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3- Inclusión
Es impregnar la pieza con una sustancia que le
confiere dureza y permite obtener cortes
uniformes y delgados. En la técnica corriente,
se utiliza la parafina que es insoluble en agua,
está condicionada por la extracción de toda el
agua del material a incluir. Los pasos de la
inclusión son los siguientes
XILOL
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Confección del taco Es la inclusión definitiva
del trozo de tejido. Se utiliza un molde metálico
especial denominado barras de Leuckart, donde se
vierte parafina liquida (60C).
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4- Obtención del corte
Para obtener cortes finos se utilizan aparatos
denominados micrótomos, hay varios tipos.
Tipo Minot (Mas Usados) dispone de 4 posiciones
de ajuste, según el corte sea de 1-10 µm, 11-20
µm, 21-30 µm o 31-40 µm así como ajuste del
ángulo de la cuchilla graduado, inmovilización de
la rueda y mecanismo de avance de gran precisión
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Montaje del corte Se colocan sobre una platina
con agua caliente. Luego se levantan los cortes
con un portaobjeto, se extiende sobre una
película de Albúmina de Mayer, que es una mezcla
de partes iguales de albúmina de huevo, glicerina
con un cristal de timol. Los portaobjetos con los
cortes adheridos se llevan a la estufa.
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5 COLORACION
Los colorantes se pueden clasificar de diferente
manera 1-Colorantes naturales a) animales
carmín. b) vegetales hematoxilina, orceina.
2-Colorantes
artificiales o sintéticos (colorantes de
anilina). a) ácidos Son colorantes
citoplasmáticos. b) básicos Son colorantes
nucleares. c) neutros Tiñen citoplasma y
núcleo de diferente color 3-Colorantes
indiferentes no forman sales. Sudan III, rojo
escarlata, etc. Sustancias basofilas se tiñen
con los colorantes básicos Sustancias acidofilas
se tiñen con los colorantes ácidos Sustancias
neutrofilas se tiñen con los colorantes neutros.
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Los pasos de la coloración son a)
Desparafinización b) Hidratación c)
Coloración propiamente dicha
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6) Montaje final

• Las fases del montaje final son
• Deshidratación mediante la acción de alcoholes
  de gradación creciente 70, 80, 90 y 100,
  sucesivamente.
• b) Homogenización o aclaración se emplea el
  benzol o xilol a los que se le puede agregar
  ácido carbónico o fénico para aumentar su
  eficacia, estos son muy ávidos de agua.
• c) Colocación del cubreobjeto con el objeto de
  proteger el preparado, se la recubre con una
  laminilla de vidrio de 0,2 mm de espesor, o
  cubreobjeto. Para adherir el cubreobjeto al
  portaobjeto, se emplea una resina, el Bálsamo de
  Canadá.

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Antes de evaluar

• PREGUNTAS, DUDAS, COMENTARIOS?

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Responda
1.Nombre dos pasos de la técnica histológica.
2.De dos características de un buen fijador
3.Cual es la función de un fijador?
4.Como se llama el instrumentos para cortar el
taco con la muestra.?
5.Nombre un colorante
6.Nombre una fase del proceso de montaje final y
explíquela.