Actualizaci

1
Actualización en Bacilos Gram- positivos
aerobios, no esporulados de importancia clínica

• Marisa N. Almuzara
• Docente Facultad de Farmacia y Bioquímica.UBA
• Jefe de Unidad Bacteriología. Hstal Eva Perón.
  San Martín

2
Bacilos gram-positivos aerobios

• Bacterias corineformes Comprenden bacilos
  gram-positivos irregulares aerobios, no
  esporulados, no ácido resistentes.
• Además de Corynebacterium, incluye muchos otros
  géneros relacionados.
• Bacilos gram-positivos regulares Bacillus,
  Listeria, Lactobacillus, Erysipelothrix, Kurthia

3
Bacilos gram-positivos aerobios

• Actinomicetos aerobios Dos grupos
• - AR ( Nocardia, Rhodococcus, Mycobacterium,
  Gordonia, Tsukamurella)
• - No AR
• Incluye géneros anaerobios que contienen algunas
  especies aerotolerantes Clostridium tertium.

4
Bacilos gram positivosIdentificaciónPruebas de
1 línea

• Gram
• Catalasa
• Metabolismo
• Lipofilicidad
• Pigmento
• Hemólisis

5
Bacilos gram positivos aerobios
Catalasa

-
? Lactobacillus ? Erysipelothrix ? Actinomyces
? Arcanobacterium ? Gardnerella ?
Actinobaculum ? P. propionicum ?
Bifidobacterium ? Clostridium spp (especies
aerotolerantes)

• ? Corynebacterium y géneros relacionados
• ? Propionibacterium spp
• ? Bacillus
• ? Listeria
• ? Kurthia
• ? Actinomicetos aerobios

Existen excepciones
6
Corynebacterium especiesLipofílicos

• La determinación del carácter lipofílico
  constituye un requisito esencial para la
  caracterización de las especies de
  Corynebacterium
• Se puede definir una corinebacteria como
  lipofílica cuando su crecimiento es
  frecuentemente estimulado en medios que contienen
  una cantidad significativa de lípidos (Tween 80 o
  suero 0.1 al 1)
• Las corinebacterias lipofílicas crecen en la
  mayoría de los medios, tales como agar sangre,
  pues éstos contienen pequeñas cantidades de
  lípidos, pero las colonias son puntiformes y a
  veces se requiere de 48-72 hs. para
  visualizarlas.
• Algunas especies (C. accolens) o cepas de
  Corynebacterium lipofílicos pueden mostrar
  satelitismo sobre el crecimiento de
  Staphylococcus aureus

7
Microorganismos corineformes

• No Lipofílicos-Fermentadores
• No Lipofílicos-No Fermentadores
• Lipofílicos

8
Corynebacterium sppCaracteres culturales
C. diphtheriae (C. mitis, C. gravis, C.
belfanti) C. afermentans ss afermentans C.
amycolatum C. xerosis C. pseudodiphtheriticu
m C. minutissimum C. striatum C.
glucuronolyticum

• Fácil desarrollo o no lipofílicos
• (colonia gt 0.5 mm)

• Lento desarrollo o lipofílicos
• (colonia lt 0.5 mm)

Estimulan el crecimiento (suero conejo 0.1
Tween 80 0,1-1) C. jeikeium C.
urealyticum C. afermentans ss lipophilum C.
accolens C. CDC grupo G C. CDC grupo F1
C. macginleyi C. diphtheriae ss intermedius
9
Corynebacterium spp , géneros relacionados y otros
PIGMENTO

Oerskovia Exiguobacterium Microbacterium Cellulomo
nas L.aquaticum Microbacterium Nocardia Rhodoco
ccus equi C. minutissimum C. striatum C.
xerosis C. pseudodiphtheriticum Corynebacterium
nigricans
Aureobacterium Nocardia
Amarillo Anaranjado-rojo Rosa-salmón Tost
ado Negro
Brevibacterium A. odontolyticus (rojo)
10
Pruebas fisiológicas y bioquímicas útiles para la
caracterización de bacilos gram-positivos aerobios

• Catalasa
• Lipofilicidad - sólo si las colonias miden lt 0.5
  mm de diámetro
• - AS con Tween 0.1-1
• - TSI con Tween 0.1-1
• - (catalasa para las corynebacterias
  lipofílicas)
• Oxidación-Fermentación - TSI
• - OF
• - CTA
• CAMP (S. aureus ATCC 25923) - Estimulación
• - Inhibición
• Utilización de H. De Carbono - Andrade
  (metabolismo fermentativo)
• - CTA
• - Caldo rojo-fenol
• - Pastillas
• Ureasa-gelatinasa-DNAsa-FAL-PYZ-PYR-Esculina-LDC-O
  DC-Nitratos-
• Movilidad métodos convencionales

11
Metodología empleda en la identificción de
microorganismos coreniformes

• Caracterización fenotípica
• 1) Métodos convencionales
• 2) Métodos rápidos
• - API (RAPID) Coryne Freney y col. (98
  concordancia)
• - Biolog System Lindenmann (60
  concordancia)
• - Sustratos fluorogénicos Kampfer
• Investigación quimiotaxonómica
• (Reservados para laboratorios de referencia)
• - Análisis de la pared celular
• - Análisis de ácidos grasos celulares (CFA)
• Sherlock system (MIDI)
• - Cromatografía líquida alta performance (HPLC)
• (ác. micólico)
• Técnicas moleculares
• - 16 S DNA ribosomal
• - PCR

12
Correlación entre el método de identificaciónAPI-
CORYNE y el convencional
Identificación correcta Identificación correcta con pruebas adicionales Identificación incorrectaa
A. haemolyticum 6 4 2
Arthrobacter spp 11 2 2 7
Aureobacterium spp 4 1 3
Brevibacterium spp 3 2 1
C. afermentans 10 1 7 2
C. amycolatum 14 4 10
Corynebcterium CDC grupo F 2 2
C. jeikeium 4 2 2
C. propinquum 2 2
C. striatum 7 7
C. urealyticum 16 16
C. xerosis 8 8
C. macginlenyi 3 2 1
C. pseudodiphtheriticum 12 8 3 1
Dermabacter hominis 12 12
Leifsonia aquatica 3 2 1
Listeria monocytogenes 2 1 1
Microbacterium spp 8 5 2 1
Propionibacterium acnes 1 1
Rhodococcus equi 9 2 7
Rhodococcus spp 6 1 3 2
Total 143 83 (58) 44 (31) 16 (11)
13
Corynebacterium spp

• Patógenos oportunistas
• ? C. pseudodiphtheriticum
• ? C. urealyticum (D2)
• ? C. jeikeium (JK)
• ? R. equi
• ? C. striatum
• ? C. amycolatum

Patógenos en animales ? C. renale ? C. bovis ? A.
pyogenes ? R. equi ? C. kutscheri ? C. cystitidis

• Infectan individuos no comprometidos
• (patógenos primarios)
• ? C. diphtheriae
• ? C. ulcerans
• ? C. pseudotuberculosis
• ? A. haemolyticum
• ? C. minutissimum

14
Especies de Corynebacterium y Géneros
relacionados cuyo habitat natural es el hombre

• ? C. diphtheriae Nasofaringe -
  piel
• ? C. striatum Piel
• ? C. pseudodiphtheriticum Nasofaringe - piel
• ? C. jeikeium Piel
• ? C. minutissimum Piel
• ? C. matruchotii Cavidad oral humana y primates
• ? C. urealyticum (D2) Piel
• ? C. afermentans Piel
• ? C. amycolatum Piel
• ? C. xerosis nasofaringe, piel y conjuntiva?
• ? Dermabacter hominis Piel
• ? Arcanobacterium haemolyticum Piel nasofaringe?

15
Especies de Corynebacterium y Génerosrelacionados
cuyo habitat naturales diferente al hombre

• ? C. ulcerans Vaca (mastitis), caballo
• ? C. pseudotuberculosis Cabra, oveja, caballo
• ? C. kutscheri Roedores
• ? C. Grupo renale (C. renale - Vacas
  (infecciones genitourinarias)
• C. pilosum - C. cystitidis)
• ? C. bovis Vaca (ubre)
• ? C. aquaticum Agua natural y destilada
• ? Rhodococcus equi Suelo con estiércol -
  neumonía necrotizante en potros
• ? Aureobacterium spp Suelo- ambiente
• ? A. pyogenes Vacas - ovejas (infecciones
  cutáneas piógenas)
• ? Oerskovia spp Suelo, materia de
  descomposición de las plantas, geles de
  hidróxido de Al
• ? Artrhobacter spp Suelo - ambiente

16
Infecciones por Corynebacterium y organismos
relacionados

• Inmunosupresión y neutropenia
• Cateterismo
• Interrupción de las barreras muco-cutáneas
• Hemodiálisis
• IRC
• DPAC
• Tratamiento antibiótico (cepas multirresistentes)
• Otras maniobras invasivas
• Prótesis cardíacas, osteoarticular, shunt V-P

17
Corynebacterium spp con metabolismo fermentativo
no lipofílicos
18
Especies del género Corynebacteriumcon
metabolismo fermentativo, no lipofílicos
? C. striatum ? C. coyleae ? C. amycolatum ?
C. sundvallense ? C. thomssenii ? C.
singulare ? C. confusum ? C. argentoratense ?
C. minutissimum ? C. xerosis ? C. simulans
gravis mitis belfanti
? C. diphtheriae ss

• ? C. CN-1 (pigmento negro)
• ? C. ulcerans
• ? C. pseudotuberculosis
• ? C. falsenii
• ? C. imitans
• ? C. glucuronolyticum
• ? C. matruchotii
• ? C. durum

19
Corynebacterium amycolatum
Habitat piel
Especie de Corynebacterium no lipofílico más
frecuentemente aislada en clínica
Escasos reportes de infección en la literatura.
Infección de herida post quirúrgica esternal.
Riche et al. 1989. Presse Med 18
1033-1034 Vanbosterhout et al. 1992. Eur J. Clin
Microbiol Infect. Dis. 11 628-631 3 casos de
infecciones oportunistas 1) Hemocultivo de
paciente oncohematológico 2) Hemocultivo
fístula de pseudoaneurisma 3) Líquido peritoneal
de paciente con peritonitis (DPCA)
Colonia seca, blanco-grisácea, cerosa O129
R Multiresistente (solo S a glucopéptidos y
tetraciclina)
20
Corynebacterium xerosis
Mayoría de los reportes en la literatura fueron
C. striatum o C. amycolatum
Habitat piel, nasofaringe saco conjuntival
Colonia amarillenta, seca, granular O129
S Tirosina - Multisensible
Escasos reportes de infecciones en la
literatura - Infección de shunt V-P en un
infante. Pediatr Infect Dis 1993. 12
536-538 - Artritis séptica post cirugía vascular.
Rev. Infect. Dis. 1991. 13 548-549. -
Osteomielitis vertebral 1989. J. Clin. Microbiol.
27 2869-2870 - 4 casos de endocartidis asociadas
a drogadicción Neumonía y
pericarditis Cirrosis alcohólica - Infección
de pseudoquiste pancreático en paciente
alcohólico. Wood. 1993. CID 17 934-935 - PBE
en paciente alcohólico. Vettese et al. 1993. CID
17815
21
Corynebacterium striatum
S// peni, cefalosp., Imi, glicopéptidos R//
macrólidos, clinda, tetra, rifa, cipro V// genta
Habitat piel y narinas Transmisión
nosocomial
Colonia lisa y cremosa SCN TyR
O129 S CAMP V

• Endocarditis de válvula nativa y protésica
• Bacteriemia en pacientes inmunocomprometidos
  (SIDA, neutropenia)
• Infecciones del tracto respiratorio
• Aislado de catéter venoso central, líquido
  peritoneal, heridas, orina, conjuntiva, útero y
  placenta (RPM)

22
Corynebacterium minutissimum
ATB Variable ßlactámicos, macrólidos,
clinda, genta, rifa, cipro Sensible
glucopéptidos Resistente tetraciclina
Habitat piel
Colonia lisa, húmeda y brillante O129
S Dnasa TyR CAMP -
Eritrasma (discutido, proceso polimicrobiano) Esca
sos reportes de otras infecciones 1 caso de
peritonitis en DPCA 1 caso de septicemia fatal
en un paciente con leucemia mieloide 3 casos de
bacteriemia 1 caso de endocarditis en un
paciente con prolapso de válvula mitral 1
caso de absceso de mama en una mujer de 42 años
La mayoría de las cepas
23
Características diferenciales de C. striatum, C.
xerosis, C. amycolatum y C. minutissimum
C. striatum Cremosa ( SCN) S - V - Variable -

C. xerosis Seca y amarillenta S - - - Multi
S// V
C. amycolatum Seca, blanco- grisácea,
cerosa R - - - V Multi R// - V
C. minutissimum Cremosa S - V Variable - -
Colonia O129 TyR Dnasa CAMP Maltosa ATB a
glucosidasa NO3
24
Corynebacterium glucuronolyticum (C. seminale)
ATB S// bL, rifa, genta, glucopéptidos R//
quinolonas, tetra y mino (a menudo), macrólidos,
clinda (siempre)
Habitat flora del tracto genitourinario
masculino Presencia en mujer incierta
Colonias blanco-amarillentas lisas y
convexas bGUR CAMP Urea /-
(rápida 5 minutos) Esc V Lap (? C. renale
IGU en animales)
Infecciones genito-urinarias en
hombres Prostatitis y uretritis
25
Corynebacterium del grupo diphtheriae
C. diphtheriae Urea - CAMP -
C. ulcerans Urea CAMP inversa Glucógeno
C. pseudotuberculosis Urea CAMP inversa
Glucógeno -
Pyrazinamidasa - Pueden albergar el gen de la
toxina diftérica
26
Corynebacterium del grupo diphtheriae
Infección localizada (TRS) Efectos sistémicos
por la toxina (corazón, SNC, riñones)

• Cepas toxigénicas difteria

• Cepas no toxigénicas sepsis, artritis séptica,
• osteomielitis, absceso cerebral,
• endoftalmitis crónica, endocarditis

27
Corynebacterium del grupo diphtheriae

• Mastitis en ganado
• Faringitis (? difteria) con compromiso cardíaco o
  del SNC en personas expuestas a ganado o a sus
  productos (ingestión de leche cruda). Cepas no
  toxigenicas granulomas necróticos y nódulos
  pulmonares en pac inmunocompetentes

• Infecciones en ganado linfadenitis supurativa,
  abscesos y neumonía
• Infecciones en humanos son infrecuentes ?
  linfadenitis granulomatosa supurativa post
  contacto con animales y su piel o sus productos
  (lecha cruda)

28
Bacilos gram positivos con metabolismo
fermentativo
Géneros y especies relacionados
? Oerskovia spp ? Microbacterium spp ?
Cellulomonas spp ? Exiguobacterium acetylicum

• ? Actinomyces spp
• ? Dermabacter hominis
• ? Propionibacterium spp
• ? Rothia dentocariosa
• ? Arcanobacterium spp
• ? Gardnerella vaginalis

Otros Géneros
? Listeria spp ? Lactobacillus spp ?
Erysipelothrix rhusiopathiae ? Bacillus spp
29
Dermabacter hominisPruebas claves

• BGP cocoide
• Olor espermático
• Metabolismo fermentativo
• Esculina ()
• LDC () ODC ()
• PyR ()
• FAL ()
• Nitrato (-)

30
Dermabacter hominisDiferenciación con otros
bacilos gram positivos, catalasa (), metabolismo
fermentativo, esculina ()
Colonia (Gram/tipo) PyR Nitrato CAMP Lactosa Otros
Rothia dentocariosa BGP filam/rug, adh - - Manitol PIZ FAL Cto. Aerobgtanaerob
C. matruchotii BGP filam/rug, adh - - Hipurato
C. durum BGP filam/rug, adh - - - Manitol Aglu -
P. avidum BGP dift/lisa - - - B hemólisis FAL - Cto. Anaerobgtaerob
A. viscosus BGP dift/lisa - - Cto. Anaerobgtaerob Hipurato -
D. hominis Cb /lisa - - Olor espermático LDC y ODC FAL PIZ -
31
Rothia dentocariosa

• Habitat orofaringe humana y animales
• Patología
• Caries dental
• Enfermedad periodontal
• Abscesos (maxilar, cerebral, pilonidal, dental)
• Neumonía en pacientes inmunocomprometidos

Endocarditis
32
Rothia dentocariosaPruebas claves

• Metabolismo fermentativo
• BGP con ramificaciones rudimentarias
• No micelio aéreo
• Kinyoun y Ziehl-Neelsen (-)
• Esculina ()
• Nitrato ()
• PyR ()

33
Rothia dentocariosaDiferenciación con otros
bacilos gram positivos, catalasa (), metabolismo
fermentativo, esculina ()
Colonia (Gram/tipo) PyR Nitrato CAMP Lactosa Otros
Rothia dentocariosa BGP filam/rug, adh - - Manitol PIZ FAL Cto. Aerobgtanaerob
C. matruchotii BGP filam/rug, adh - - Hipurato
C. durum BGP filam/rug, adh - - - Manitol Aglu -
P. avidum BGP dift/lisa - - - B hemólisis FAL - Cto. Anaerobgtaerob
A. viscosus BGP dift/lisa - - Cto. Anaerobgtaerob Hipurato -
D. hominis Cb /lisa - - Olor espermático LDC y ODC FAL PIZ -
34
Rothia dentocariosaSensibilidad antibiótica
Sensible Penicilina (ATB de elección) Ampicilina AMS Cefalosporinas 3 Imipenem Rifampicina Eritromicina Cloranfenicol Vancomicina Variable Aminoglucósidos Quinolonas Clindamicina TMS
35
CASO CLÍNICOAlmuzara M, Mariñansky A, Valenzuela
A, Vay C. Enf Infecc Microbiol Clin, 2004.

• Paciente de sexo femenino, 22 años.
• Ingresó por fiebre las últimas 48 hs., astenia
  y deterioro del sensorio. Presentó púrpura en
  tronco y extremidades y rigidez de nuca.
• Tx cerebral hemorragia subaracnoidea e
  hipodensidades compatibles con embolia
  (confirmado con RM).
• Se tomaron 2 hemocultivos (Bactec) y LCR.
• Dx presuntivo meningitis meningocóccica.
• Tratamiento Ceftriaxona 4 g/día IV.

36
RESULTADOS DEL LCR

• Gram no bacterias.
• Tinta China negativa.
• Antígenos neumococo, meningococo, HIb,
  Cryptococcus neoformans, negativos.
• Cultivo negativo.

37
OTROS ESTUDIOS DIAGNÓSTICOS

• Electrocardiograma transesofágico prolapso de
  válvula mitral - vegetaciones de gran tamaño en
  valva anterior mitral sin absceso anular.
• Ecodoppler insuficiencia mitral.
• Diagnóstico endocarditis de válvula nativa.

38
RESULTADOS

• Agar sangre atmósfera 5 CO2 24 hs. desarrollo
  de pátina visible. Colonias definidas a las 48
  hs. blanquecinas.
• Beta hemólisis negativa.
• Catalasa positiva.
• TSI ácido.
• Lipofilicidad negativa.

39
Propionibacterium spp
ATB R// metronidazol, aminoglucósidos S//
vancomicina, beta lactamicos
Habitat piel humana, intestino, boca,
conjuntiva
Factores predisponentes Presencia de cuerpo
extraño Inmunosupresión Cirugía previa
Trauma Diabetes Obstrucción de senos o
conductos
BGP no esporulados Anaerobios facultativos
con aerotolerancia variable Células con forma
bífida o ramificada (no filamentos),
dispuestas en forma única, pares, cadenas, con
disposición de letras chinas (V, Y) No
móviles Metabolismo fermentativo Usualmente
catalasa (P. propionicum es catalasa -)
40
Propionibacterium spp
Infecciones Endocarditis de válvula
protésica Endoftalmitis postquirúrgica o
postraumática Infecciones del SNC asociadas a
shunts o postneuroquirúrgicas (meningitis,
abscesos de cerebro, empiema epidural o
subdural) Infecciones osteoarticulares
artritis protésica o post inyección de esteroides
y osteomielitis posquirúrgica P.
propionicum canaliculitis y dacriocistitis
(mujeres ancianas), abscesos y neumonía
41
Propionibacterium avidumPruebas claves

• BGP con ramificaciones rudimentarias (medio
  líquido)
• Metabolismo fermentativo
• B hemolítico
• Esculina ()
• CAMP ()
• Nitrato (-)
• PyR (-)
• Movilidad (-)

42
Propionibacterium avidumDiferenciación con otros
bacilos gram positivos, b hemolíticos de
importancia clínica
Catalasa Motilidad CAMP
Propionibacterium avidum -
Arcanobacterium haemolyticum - - Inversa
Listeria monocytogenes
43
Propionibacterium sppDiferenciación de especies
P. avidum P. granulosum P. acnes P. propionicum
Cto. óptimo Ana Aero Ana Ana Ana
Nitrato - -
Esculina - - -
Indol - - -
Catalasa -
44
Propionibacterium avidum Sensibilidad antibiótica
Sensible Penicilina Imipenem Cefalosporinas Cloranfenicol Eritromicina Clindamicina Tetraciclinas Variable Aminoglucósidos Resistente Metronidazol
45
Listeria
Hábitat ? Vegetales, animales (40 sp mamíferos,
17 sp aves), suelo, fertilizantes, agua,
crustáceos, moscas, garrapatas ? ubicuo en la
naturaleza ? Animales colonizados eliminan L.
m por heces
abono hombre
vegetales ? Contaminación de alimentos
- Productos crudos de orígen animal (carnes
rojas, pescados) frescos o frizados -
Productos lácteos crudos (leche pasteurizada y no
pasteurizada, quesos, helados) - Frutas y
vegetales crudos
46
Listeria monocytogenes Patogenia
Animales Humanos
meningoencefalitis abortos sépticos (repetición)

• Neonatos
• Listeriosis de aparición temprana (dte. 1a.
  semana de vida)
• ? prematurez, bajo peso al nacer
• - transmisión transplacentaria por sepsis
  materna
• - transmisión ascendente por colonización
  vaginal
• Listeriosis de aparición tardía (gt 1a. semana
  de vida)
• ? niños nacidos sanos ? transmisión a través
  del canal de
• parto contaminado
• Adultos inmunocomprometidos
• Ancianos, neoplasias oncohematológicas,
  neoplasias sólidas,
• HIV, SIDA, Tx, cirrosis, DBT, DPAC, terapia con
  corticoides
• Mujer embarazada
• Infecciones cutáneas y oculares (veterinarios),
  endocarditis,
• osteomielitis, infecciones pleuropulmonares,
  peritonitis, etc.

Meningoencefalitis y sepsis Abortos a
repetición ?? frecuencia 15 pac. no IC, no
embarazadas
47
Listeria monocytogenes (ß) Diferenciación con
otros géneros ß hemolíticos
48
Identificación de Listeria monocytogenes
E. faecalis - - -
L. monocytogenes (cabeza de fósforo)
Catalasa Bilis Esculina ClNa 6,5 Movilidad CAMP
49
PERFIL DE SENSIBILIDAD

• Activas penicilina , ampicilina ,
  gentamicina, imipenem , TMS, rifampicina,
  tetraciclina
• Intermedias cefalotina, ciprofloxacina,
  clindamicina
• No Activas cefotaxima, ceftazidima,
  nalidíxico, fosfomicina
• Tolerancia

50
Bacilos gram positivos con metabolismo oxidativo
Género Corynebacterium (especies no lipofílicas)
Géneros y especies relacionados
? Turicella otitidis ? Brevibacterium spp ?
Arthrobacter spp ? Aureobacterium spp ? C.
aquaticum

• ? C. afermentans ss afermentans
• ? C. auris
• ? C. propinquum
• ? C. pseudodiphtheriticum
• ? C. mucifaciens
• ? C. riegelii

Pigmento amarillo
Otros Géneros
? Actinomicetos aerobios (con excepción del
Género Dermatophilus) ? Bacillus spp ? Kurthia spp
51
Corynebacterium spp con metabolismo oxidativo no
lipofílicos
52
Corynebacterium pseudodiphtheriticum
ATB S// bL, AG, quinolonas, rifa, tetra V//
macrólidos, lincosamidas
Habitat piel, orofaringe
Colonias blanquecinas, ligeramente secas,
de bordes enteros TSI s/c NO3
Urea (rápida) Asacarolítico
Infecciones respiratorias bronquitis,
traqueobronquitis y neumonía en pacientes -
Inmunocomprometidos - Enf. Pulmonar preexistente
(EPOC) - Intubación endotraqueal - Enfermedades
de base falla cardíaca congestiva, DBT,
neoplasia 1991. Colt y Morris Rev Infect Dis 61
casos Endocarditis 1991 Morris y col Rev Infect
Dis 18 casos 50 asociada a válvula protésica.
Otras poco frecuentes ITU (discutido),
osteomielitis vertebral, infección heridas
(colonizante secundario)
53
C. afermentans ss afermentans
Aislado de hemocultivos
Habitat piel
Colonias blanquecinas, cremosas, de bordes
regulares CAMP V (60) Asacarolítico
Generalmente S// a ATB beta lactámicos
Dnasa -
Diferenciar de C. auris y T. otitidis C.
auris - Colonias ligeremente secas y
adherentes - Aislado de oído - R// a ATB b
lactámicos - Dnasa -, CAMP T. otititis -
Aislado de oído medio - Colonias cremosas ( C.
afermentans) pero en el Gram BGP
largos irregulares ramificarse (? C.
afermentans) - Dnasa , CAMP
54
Géneros relacionados con Corynebacterium con
metabolismo oxidativo
Arthrobacter
Brevibacterium
Catalasa Metabolismo O O Ciclo
coco-bacilar sí sí Motilidad V - Colonias
grandes, blanco-grisáceas grandes,
blanco-grisáceas y cremosas o
amarillo-verdosas, cremosas ?
ECN Olor no queso - transpiración Urea V
- Esculina V - Dnasa/gelatina Hábitat
piel humana, suelo alimentos (leche
rancia-queso) piel humana mucosas
y adyacentes (B. epidermidis y B.
casei) CIM penicilina baja
elevada Tipo de infección vaginitis,
endoftalmitis, osteomielitis, peritonitis
(DPCA), ITU, bacteriemia en HIV septicemia,
bacteriemia en hemolizados, meningitis,
colonización de shunt Otras Tirosina ClNa
6.5
55
Actinomicetos aerobios

• BGP
• Filamentosos y con ramificaciones
• Pueden presentar ácido resistencia parcial
  (géneros Nocardia, Rhodococcus, Gordona,
  Tsukamurella y Mycobacterium)
• Pueden presentar micelio aéreo (géneros Nocardia,
  Streptomyces, Actinomadura, Amycolata,
  Amycolaptosis, Nocardiopsis, Saccharomonospora,
  Saccharopolyspora y Thermoactinomyces)
• Hábitat ubicuos en el ambiente, ampliamente
  distribuídos en el suelo, agua fresca, agua
  marina y participan de la descomposición de la
  materia orgánica vegetal
• Patógeno oportunista en humanos y animales

56
Género Nocardia

• BGP aerobios filamentosos y ramificados
• Parcial AR (Kinyoun )
• Micelio aéreo
• Catalasa
• Metabolismo oxidativo
• Lisozima resistente
• Lento desarrollo (48 - 72 hs crecimiento
  visible), colonias secas (yeso) de color blanco,
  amarillo ? anaranjado)

57
Género Nocardia

• Infecciones en el huésped inmunocompetente
  colonización piel y TRS, I. ocular (exógena), I.
  cutánea (micetoma, linfocutánea o superficial)
• Infecciones en el huésped inmunocomprometido
  infecc. ocular, inf. pulmonar invasiva e
  infección diseminada (cerebro, riñón, hígado,
  bazo y menos frecuentemente piel, hueso,
  articulación, ojo)
• Factores de riesgo Tx renal, Tx cardíaco, Tx
  hepático, Tx MO, HIV, granulocitopenia,
  neoplasia, terapia inmunosupresora
• Terapia antibiótica TMS (de elección) y amika,
  imipenem, cefalosporinas 3ra., quinolonas,
  eritro, clinda, tetra y minociclina (drogas
  alternativas)

58
Género Rhodococcus

• Estrechamente relacionado con los géneros
  Nocardia, Mycobacterium y Corynebacterium
• Integrado por 12 especies
• R. equi (hombre)
• Catalasa
• Presenta ciclo coco-bacilar
• Parcial AR (Kinyoun )
• Metabolismo oxidativo
• Hábitat saprófito del suelo

59
Rhodococcus equi
Hábitat animales (caballos, vacas, cerdos)
(neumonía necrotizante en potros) Suelo
con estiércol

• Características culturales y bioquímicas
• Buen desarrollo en medios habituales AN - AS
• Desarrollo 24 - 48 hs
• Colonias medianas mucoides con pigmento rosa ?
  salmón
• Caseína, xantina, e hipoxantina - tirosina v
• Glucosa (por metabolismo (O), 14 días)
• CAMP (S. aureus ATCC 25923)

60
Rhodococcus equi

• Patógeno oportunista (Tx renal, HIV, neoplasias
  sólidas o enf. oncohematológicas, alcoholismo,
  terapia inmunosupresora (corticoides o
  quimioterapia)
• Fiebre y síntomas respiratorios en gt 75 de los
  casos ? neumonía cavitada, abscedificada de larga
  evolución ? TBC like
• Otras infecciones ? endoftalmitis y abscesos
  subcutáneos postraumáticos (también en pacientes
  inmunocompetentes), bacteriemia asociada a
  catéter (NPT o catéter venoso central), artritis
  séptica, peritonitis en DPCA, infección pulmonar
  diseminada (cerebro, hígado, bazo, piel)
• Las infecciones están asociadas con la exposición
  a animales (caballos) o suelo contaminado
• Patógeno intracelular ? difícil de erradicar
• Antibióticos más activos eritro y rifa
• Tratamiento antibiótico prolongado (2 a 6 meses)
  resección quirúrgica

61
Rhodococcus equiSensibilidad antibiótica
Sensible AMC / AMS Imipenem Aminoglucósidos TMS V
ancomicina Eritromicina (3) Rifampicina
(4) Tetracilina (4)
Variable Ampicilina Cefalotina Penicilina Oxacili
na Clindamicina Quinolonas (16-18 R//)
?
gt 50 R
Droga de Elección Eritro o Rifa Tratamientos
prolongados 2 a 6 meses
62
Micobacterias de rápido crecimiento

• TSI sin cambio
• Kinyoun y Ziehl-Neelsen positivos
• Micelio aéreo negativo
• Lisozima resistente
• Aril sulfatasa (3 días) positiva
• M. Fortuitum Nitrato (), quinolonas S, fox S
• M. Chelonae Nitrato (-), quinolonas R, fox R

63
Micobacterias de rápido crecimiento

• Patógenos oportunistas
• Infecciones de heridas post traumáticas y
  postquirúrgicas
• Infecciones asociadas a catéteres
• Infecciones pulmonares crónicas
• Osteomielitis post fractura expuesta
• Pseudobrotes ( contaminación d los canales de
  succión de los fibrobroncoscopios)

64
Bacilos gram positivosKinyoun positivo
Pigmento rosado-salmón CAMP
Rhodococcus equi
Micelio aéreo
65
Especies de Corynebacterium lipofílicas
1) Con Metabolismo Oxidativo
2) Con Metabolismo Fermentativo

• ? C. urealyticum
• ? C. jeikeium
• ? C. afermentans ss lipophilum
• ? C. lipophiloflavum

? C. kroppenstedtii ? Corynebacterium grupo
F1 ? Corynebacterium grupo G ? C. macginlenyi ?
C. accolens ? C. diphtheriae ss intermedius
66
C. jeikeium
Habitat piel del paciente internado
(región inguinal, rectal, axilar, urogenital)
Multiresistente - S// glicopéptidos,
pristinamicina - V// Ery - Tetra - Rifa
-Quinolonas
Ambiente inanimado hospitalario.
- Glucosa - NO3 / Urea -

• Endocarditis de válvula nativa o protésica
• Meningitis asociada a shunt
• Infecciones osteoarticulares post-quirúrgicas
• Sepsis en pacientes oncohematológicos
• Peritonitis (DPCA)

Factores predisponentes - Inmunocompromiso
neoplasias, neutropenia, SIDA - Cateterismo y
maniobras invasivas - Hospitalización
prolongada - Terapia con ATB de amplio espectro -
Interrupción barrera cutánea (DPCA) -
Dispositivos protésicos
67
C. urealyticum
Ureasa positiva rápida Lipofílico
multiresistente Asacarolítico
Habitat piel
Enfermedad infecciosa ITU cistitis
incrustada alcalina infección
urinaria sin litiasis
pielonefritis pieloureteritis Infecciones
localizadas en otros sitios, muy poco
frecuentes bacteriemia, endocarditis,
osteomielitis, infección de Heridas y TCS
Factores predisponentes Inmunocompromiso
Manipulación urológica Anomalías del TU Tx
renal Hospitalización prolongada Tto. ATB
previo IU recurrente
68
Bacilos gram positivos aerobios
Catalasa -
No b hemolíticos Propionibacterium
propionicum A. schaalii Actinomyces
spp Lactobacillus spp Erysipelothrix
rhusiophatiae Rothia dentocariosa
b hemolíticos L. monocytogenes (CAMP ) A.
haemolyticum (CAMP inv. ) Gardnerella
vaginalis A. pyogenes A. turicensis
69
Géneros Actinomyces, Arcanobacterium
yActinobaculum spp

• BGP rectos o ligeramente curvos y filamentos
  delgados con ramificaciones verdaderas con
  frecuencia pueden disponerse en forma difteroidal
  (Y, V, T, empalizada) en el mismo preparado.
• La proporción de formas difteroides y
  filamentosas varía de acuerdo a la especie
• No ácido resistentes
• No esporulados
• No móviles
• Anaerobios facultativos (mayoría de las especies
  crecen en atmósfera enriquecida en CO2 salvo A.
  bovis, A. meyeri, A. israelii y A. gerencseriae)

70
Géneros Actinomyces, Arcanobacterium
yActinobaculum spp

• Metabolismo fermentativo
• Catalasa negativa (con excepción de A. neuii, A.
  viscosus y A. naeslundii)
• Las colonias maduras pueden variar desde rugosas
  y secas a lisas o mucosas con una variación en el
  diámetro de 0.5 a 5 mm., de color blanco a
  blanco-grisáceo o blanco crema. Algunas especies
  pueden presentar a o b hemólisis
• Hábitat intestino y membranas mucosas y flora
  normal de la cavidad oral humana y de animales
• ATB sensibles a ATB b lactámicos. Resistentes a
  metronidazol

71
Actinomyces, Arcanobacterium y Actinobaculum
sppPresentaciones clínicas de las infecciones

• Actinomicosis clásica A. israelii, A. meyeri, A.
  naeslundii, A. odontolyticus y A. viscosus. La
  localización más frecuente es la cervico-facial,
  luego la abdominal, torácica y otras. Se
  caracteriza por lesiones granulomatosas crónicas
  que llegan a ser supurativas con formación de
  abscesos y senos de drenaje, con descarga de
  gránulos de azufre macroscópicos de color blanco,
  amarillo o marrón.
• Abscesos de diversa localización
• Enfermedad periodontal y caries dental
• Raras infecciones del SNC, endocarditis y
  hepatitis

72
Actinomyces, Arcanobacterium y Actinobaculum
sppPresentaciones clínicas de las infecciones

• A. europaeus abscesos, úlceras, TCS, ITU
• A. graevenitzii especímenes respiratorios
• A. radingae abscesos, líquido articular,
  onfalitis
• A. turicensis abscesos, sangre, vagina, heridas,
  colecistitis, apendicitis, otitis media, ITU, etc
• A. bernardiae abscesos, sangre, oído, úlceras de
  pie, secreciones oculares, artritis séptica
• A. pyogenes abscesos, sepsis, úlceras,
  apendicitis, cistitis
• A. schaalii sangre, orina
• A. haemolyticum faringitis en adolescentes,
  abscesos, infecciones del SNC, osteomielitis,
  endocarditis

73
Actinomyces sppS. Palombarani y col. Hstal de
Clínicas. UBA. 2004.

• Identificación de 45 aislamientos
• Morfología
• Características culturales
• Catalasa

Resultado Negativo Resultado Positivo
TSI Vancomicina SPS MRS
Metabolismo Lipofilicidad CAMP ß-
Glucosidasa Urea - Hipurato Reduc. Nitrato
Manitol, Lactosa
74
Actinomyces spp S. Palombarani y col. Hstal de
Clínicas. UBA. 2004.
Identificación de especies catalasa negativa, ß-
hemolíticas
-CAMP (-) -ONPG (-) -PYZ () -XILOSA (-)

• A. bernardiae (1)
• A. radingae (2)
• A. turicensis (1)

-CAMP (-) -ONPG () -PYZ () -XILOSA ()
-CAMP (-) -ONPG (-) -PYZ (-) -XILOSA ()
75
Actinomyces spp S. Palombarani y col. Hstal de
Clínicas. UBA. 2004
Identificación de especies catalasa negativa, no
ß- hemolíticas
Esculina Pigmento NO3 ONPG Urea ? -
Glucosidasa ? -Fucosidasa ß- NAG PYR PYZ

• A europaeus (7)
• A. radingae (5)
• A. odontolyticus (6)
• A. israelii (5)
• A. turicensis (3)
• A. bernardiae (2)
• A. graevenitzii (3)
• A. funkei (1)
• A. urogenitalis (1)

76
Actinomyces spp S. Palombarani y col. Hstal de
Clínicas. UBA. 2004
Identificación de las especies catalasa positiva
Metabolismo Pigmento Lipofilicidad Movilidad Escul
ina Nitratos Urea Hipurato CAMP Manitol Lactosa Xi
losa ?- Glucosidasa PYZ ODC
Actinomyces neuii ss neuii (1) Actinomyces
neuii ss anitratus (1) Actinomyces viscosus (4)
77
Actinomyces spp
Sitios de aislamiento vs especies de
Actinomyces spp ( n 45)
27 aislamientos, flora única 18 aislamientos,
con flora acompañante
Hstal de Clínicas. UBA. 2004
78
Actinomyces spp
Valores de CIM ( µg/ml)
A. odontolyticus(4) A. bernardiae (3) A.
europaeus (3) A. graevenitzii (3) A. radingae
(3) A.sp (2) A. funkei (1) A. neuii ss neuii
(1) A. turicensis (1) A. urogenitalis (1) A.
viscosus (1).
79
CASO CLÍNICOMelero M, Campos A, Benetucci A,
Famiglietti A., Vay C.Medicina (Buenos Aires),
2002.

• Paciente de sexo masculino, 38 años de edad
• Fiebre 38-39 ºC de 10 días de evolución.
• Dentadura mal conservada.
• Soplo diastólico. Eco Transesofágico válvula
• aórtica con vegetación y abscesos
• perivalvulares. Insuficiencia aórtica con
• estenosis.

80
ESTUDIO MICROBIOLÓGICO

• 2 Hemocultivos ( Bact-Alert)

81
RESULTADOS

• Hemocultivos 20 hs
• Gram bacilos gram-positivos, pleomórficos.
• Agar Columbia 5 sangre, 5 CO2 Colonias
  pequeñas definidas a las 48 hs. Hemólisis alfa.

82

• Catalasa Negativa
• TSI (SH2) Positivo
• No crece MRS

83

• CIM penicilina 0,008 ug/ml
• CIM ceftriaxona 0,063 ug/ml
• CIM vancomicina 64 ug/ml
• Tratamiento Ceftriaxona IV 2g/día.
• A los 42 días, con buena evolución y HC
• control negativos, se realizó reemplazo
• valvular con prótesis mecánica.
• Paciente Carnicero!!!!!!!

84
Erysipelothrix rhusiopathiae
85
Erysipelothrix rhusiopathiae
Habitat ampliamente distribuído en la
naturaleza (R// ? Ta. y ph alcalino) Parásito de
mamíferos (cerdos), aves y peces ? contaminación
de suelos y agua con heces y orina ? erisipela
en cerdos
ATB S// b Lactámicos R// glucopéptidos - AG V//
Eritro, cloran , tetra, cipro Droga de elección
Penicilina
BGP delgado, filamentoso, pleomórfico,
catalasa - TSI H con SH2 Vanco R BE
- ClNa VP Sacarosa - (? E.
tonsillarum)
- Enfermedad ocupacional - Carniceros, matarifes,
pescadores, veterinarios - Celulitis localizada
erisipeloide - Sepsis, artritis o endocarditis
(IC)
86
Erysipelothrix rhusiopathiaeDiferenciación con
otros géneros
E. rhusiophatiae - - F - -
Lactobacillus - - - F -
Listeria - - - F -
Kurthia - - O -
Bacillus - F/O - V
Formación de Esporas Catalasa SH2
(TSI) Metabolismo Cto. En MRS Motilidad
87
Lactobacillus spp

• BGP largos, a veces corineformes o cocobacilares,
  a veces forman cadenas (similares a Leuconostoc,
  Estreptococos)
• No esporulados
• Movilidad poco común (por flagelos peritricos)
• Catalasa -
• Metabolismo fermentativo
• Capnofílicos, algunos anaerobios estrictos
• No reducen NO3- a NO2-
• No pigmentan la mayoría

88
Lactobacillus spp

• Crecen en caldo MRS
• No producen SH2
• Algunas especies producen gas de glucosa
• Forman parte de la flora normal de la boca,
  tracto GI y vagina de muchos animales y del
  hombre
• Vancomicina resistente (la mayoría de las
  especies)
• En AS colonias pequeñas, opacas, algunas
  rugosas, otras secas, a o g hemolíticas
• Aislados de bacteriemia con o sin endocarditis,
  abscesos (intraabdominales, viscerales, PPB,
  cabeza y cuello, TGF), heridas, peritonitis,
  infección pulmonar (neumonía con o sin empiema),
  meningitis

89
Lactobacillus sppClasificación (Otto
Kandler-Norbert Weiss)
Grupo I Homofermentativos obligados
Grupo II Heterofermentativos facultativos
Grupo III Heterofermentativos obligados
ADH -1 - Gas glucosa - - 45
C -2 d Gluconato - 3 4 Ribosa - 3
4
1. Puede haber excepciones L. jensenii 2. L.
casei ss rhamnosus crece a 45C 3. Puede haber
excepciones 4. Puede haber excepciones
Especies más frecuentes de aislamiento
clínico Grupo I L. delbrueckii - L.
acidophilus - L. salivarius Grupo II L. casei
ss casei - L. casei ss rhamnosus - L.
plantarum Grupo III L. brevis - L. (W) confusus
- L. fermentum
90
Arcanobacterium haemolyticum
Cuadro Clínico

• Faringitis en adultos jóvenes (10-30 años) que
  puede manifestarse con rash cutáneo
  escarlatiniforme
• Abscesos retrofaríngeos
• Infección de tejidos blandos, infecciones mixtas
  de heridas asociadas a traumatismo
• Otras infecciones menos frecuentes
  osteomielitis, endocarditis

Características bioquímicas destacables

• BGP catalasa negativa
• b hemólisis (sangre humana), g hemólisis (sangre
  ovina)
• CAMP inversa
• a manosidasa

91
Arcanobacterium haemolyticum
Sensibilidad antibiótica
Sensible Penicilina Cefalexina Cefuroxima Cefotax
ima Azitromicina (CIM90 0.006) Eritromicina
(CIM90 0.006) Ciprofloxacina Vancomicina
Resistente TMS Variable Tetraciclina
Tolerancia Penicilina ? Tto.
Elección Macrólidos
92
Arcanobacterium haemolyticum Diferenciación con
otros BGP ß hemolíticos catalasa -
CAMP - Almidón Hipurato BE ClNa
Mot. CAMP inversa - Xilosa Gelatina
a manosidasa - CAMP inversa - Xilosa

• G. vaginalis
• L. monocytogenes
• A. pyogenes
• A. turicensis

A. haemolyticum CAMP inversa Gelatina
- Xilosa - a manosidasa BE - , ClNa - , Mot. -
93
Arcanobacterium haemolyticum. Identification and
susceptibility testingto nine antimicrobial
agents
Almuzara Marisa de Mier Carmen Barberis
Claudia Mattera Josué Famiglietti Angela Vay
Carlos. Laboratorio de Bacteriología. Facultad
de Farmacia y Bioquímica. Hospital de Clínicas.
Universidad de Buenos Aires. Argentina
11th. European Congress of Microbiology and
Infectious Diseases. 2000.
94
Results
13 strains were isolated from throat and others
from DBT foot ulcers, bone, urethral
discharge, peritonsillar abscess, pleural fluid
and loquia. In none of the throat samples were
isolated beta haemolytic streptococci
simultaneously with Arcanobacterium
haemolyticum. 3 strains were isolated from a
mixed culture one of them from pleural fluid of
a patient with traumatic hemothorax, other from
urethral discharge and the other from a loquia
from spontaneous abortion. All the strains grew
well on human blood agar (colony size 0.5 mm
after 24 hours incubation) and exhibited a
narrow 1 mm zone of beta haemolysis were as at 48
hours the colony diameter was 1 mm with a beta
haemolysis zone of 3 5 mm. On sheep blood agar
overnight colonies were tiny and little and no
beta haemolysis was observed. Gram stain showed
asporogenous, pleomorphic gram positive rods. The
biochemical profiles are shown in Table 1. All
the strains were positive for alpha mannosidase,
pyrazinaminidase, and reverse CAMP, and negative
for gelatin hydrolysis and xylose
fermentation. All these tests allow its
differentiation from Arcanobacterium pyogenes. 13
strains gave positive Pyr test using disks
whereas only 6 strains gave positive with Pyr
test / APY CORYNE. Bacitracin inhibition zones
were between 8 14 mm. The biocodes obtained by
API CORYNE were 2010360, 2110360, 2130360,
2210360, 2230360, 2310360, 2510360, 2530360,
6010360, 6110360, 6130360, 6330360, and
6530361. Antimicrobial susceptibility is shown in
Table 2.
95
Biochemical characteristics of 19 strains
ofArcanobacterium haemolyticum
Test or characteristic Catalase Nitrate
reduction Urea hydrolysis Esculin
hydrolysis Gelatin hydrolysis DNA
hydrolysis a-mannosidase test Lancefields Group
B antigen Reverse CAMP reaction Fermentation
of Glucose Maltose Sucrose Mannitol Xylose Ribose
Glycogen Assayed for the following enzymes (API
CORYNE) Alkaline phosphatase Pyrazinamidase Pyrro
lidonyl arylamidase ß-glucuronidase ß-
galactosidase a- glucosidase N-acetil-ß-glucosamin
idase
N of positive strains/total 0 / 19 0 / 19 0 /
19 0 / 19 0 / 19 19 / 19 19 / 19 15 / 19 19 /
19 19 / 19 19 / 19 2 / 19 0 / 19 0 / 19 19 /
19 0 / 19 11 / 19 19 / 19 6 / 19 6/ 19 5 /
19 17 / 19 8 / 19
Result - - - - - V V - - - V V V
V V V
Positive 0 0 0 0 0 100 100 79 100 100 100 11 0
0 100 0 58 100 32 32 26 89 42
96
Antimicrobial susceptibility of 19 strains
ofArcanobacterium haemolyticum
Antimicrobial agent Penicillin Cephalotin Cefur
oxime Erythromycin Azithromycin Tetracycline Clind
amycin Ciprofloxacin Vancomycin
N of susceptible strains/total ( susceptible
strains) a 18/19 (94.7) b 19/19 (100) c 19/19
(100) 19/19 (100) 19/19 (100) 19/19 (100) 13/19
(68) 19/19 (100) 19/19 (100) 19/19 (100)
MICs range (µg/ml) 0.004 0.25 0.004
0.064 0.032 0.5 0.004 0.25 lt 0.004 0.25
64 0.004 0.032 0.25 0.5 0.25 - 0.5
MICs 50 (µg/ml) 0.016 0.016 0.125 0.004 lt
0.004 0.5 0.008 0.25 0.25
MICs 90 (µg/ml) 0.032 0.032 0.25 0.032 lt
0.004 32 0.016 0.5 0.5
a according to NCCLS interpretative standars
(2000) b the categorie for staphylococci was
applied c the categorie for Listeria
monocytogenes was applied.
97
Bacilos gram positivos regulares
Esporas Bacillus spp Esporas -
BGP regulares
catalasa
Metabolismo
- SH2 (TSI)
Oxidativo Kurthia spp
Fermentativo Listeria spp
- Lactobacillus spp
Erysipelothrix
98
Género Bacillus

• BGP regulares esporulados
• Aerobios o anaerobios facultativos
• Catalasa usualmente
• Motilidad por flagelos peritricos (mayoría de
  las especies)
• Metabolismo fermentativo o respiratorio
• Crecen en amplios rangos de temperatura (hasta
  75C) y pH (2 a 10)
• Colonias grandes, grises o blancas, de bordes
  irregulares, con b hemólisis (B. anthracis no
  presenta b hemólisis)
• Hábitat suelo, agua, polvo. Algunas especies
  forman parte de la flora normal del intestino
  humano y de animales

99
Bacillus spp. Patogenicidad

• ? Patógeno obligado Bacillus anthracis
• ? Patógenos oportunistas la mayoría de las
  especies

? Débil poder patogénico ? Requieren tanto de una
puerta de entrada como de un sistema inmune
comprometido para producir enfermedad ? Tipo de
infección predominante (excluyendo la
bacteriemia) la neumonía, muchas veces con
complicaciones sépticas ? Modo de transmisión
por inhalación de esporas ? Especies más
frecuentes 1 B. cereus, 2 B. subtilis.
Otras especies (menos frecuentes) B. circulans,
B. pumilis, B. licheniformis, B. coagulans,
B. sphaericus
100
Género Bacillus

• Patologías B. anthracis ? antrax cutáneo,
  respiratorio y gastrointestinal
• B. cereus ? intoxicación alimentaria e
  infecciones oportunistas infecciones locales
  en quemados, infecc. heridas postraumáticas o
  postquirúrgicas, endolftalmitis postraumática
• Infecciones en IC
  bacteriemia con o sin endocarditis, infecciones
  del
• SNC (meningitis, absceso
  de cerebro e infecciones asociadas a
  shunts) ATB resistentes a penicilina(no B.
  anthracis) y cefalosporinas (hasta las
• de 3a. Generación).
• Sensibles a aminoglucósidos,
  eritro, clinda, cloranfenicol, quinolonas y
• vancomicina

101
Bacillus sppFactores predisponentes para la
bacteriemia

• ? Neoplasias
• ? Drogadicción EV
• ? Hemodiálisis
• ? Cateterización
• ? Diabetes
• ? Trauma
• ? Neutropenia

102
Anthrax

• ? Etiología Bacillus anthracis
• ? Infección primaria en herbívoros (ganado,
  ovejas, cabras, caballos) por ingestión de
  esporas del suelo.
• ? Anthrax humano
• ? por contacto directo o indirecto (pelo,
  piel, lana) con el animal
• infectado forma típica
• ? por exposición intencional forma atípica
  (anthrax cutáneo o
• respiratorio)
• ? Tres formas clínicas
• ? Cutánea
• ? Inhalatoria
• ? Gastrointestinal
• ? Transmisión hombre - hombre y animal - animal
  (misma especie) extremadamente infrecuente

103
Criterios de laboratorio para la identificación
de Bacillus anthracis

• Identificación presuntiva
• 1) A partir de la muestra clínica
• - Coloración de Gram Bacilos gram positivos
  en cadenas cortas
• - Tinta china cápsula
• - Esporas generalmente ausentes (a menos que
  la muestra sea expuesta al O2 atmosférico)
• 2) A partir del cultivo (AS ovina)
• - Gram BGP no capsulados en cadenas largas
• - Verde de malaquita esporas ovales,
  centrales o subterminales que no ensanchan la
  célula
• - Morfología colonial colonia gris o blanca,
  adherente, lisa o ligeramente convexa con
  proyecciones en forma de coma desde el borde de
  la colonia (cabeza de Medusa)
• Cuando la colonia se levanta con el ansa tiene la
  apariencia de una yema de huevo batida
• - Inmóvil
• - No hemolítico
• - Lecitinasa
• - Sensible a penicilina 10 U 15 - 20 mm

104
Criterios de laboratorio para la identificación
de Bacillus anthracis

• Identificación definitiva
• ? Presencia de la cápsula (Tinta china o
  MFadyean)
• ? Sensibilidad (lisis) al fago gamma
• ? Detección de anticuerpos (contra Ag capsular o
  polisacáridos
• de pared celular) por fluorescencia directa
  sobre el material
• clínico (DFA)
• ? PCR para gen de la toxina de B. anthracis y/o
  de la cápsula
• ? Inoculación ratón - cobayo (muerte)

105
AnthraxTratamiento antibiótico

• ? ATB de elección
• - Ciprofloxacina
• - Doxyciclina (no meningitis)
• ? ATB alternativos
• - Penicilina
• - Amoxicilina
• - ß lactamasa inducible puede activarse
  durante el tratamiento
• - Pobre penetración en macrófagos
• ? Duración del tratamiento 60 días

Niños Embarazo Lactancia
106
Diferenciación entre B. anthracis y otras
especies de Bacillus
107
Bacilos gram positivos aerobios pigmentados
Metabolismo oxidativo
Kinyoun Positivo Rhodococcus Nocardia Gordonia Ts
ukamurella Mycobacterium
Kinyoun Negativo Corynebacterium
aquaticum Aureobacterium spp Brevibacterium spp
Metabolismo fermentativo
Oerskovia spp Microbacterium spp Cellulomonas
spp Exiguobacterium acetylicum
108
Bacilos gram positivos aerobios pigmentados

• Bacteriemia en hemodializados
• Bacteriemia asociado a catéter ( LMA, HIV,
  neutropenia)
• Bacteriemia asociada a NPT (Oerskovia)
• Endolftalmitis ( Microbacterium, Oerskovia)
• Peritonitis asociada a DPAC
• Meningitis asociadas a shunts
• Infección de heridas y PPB

109
Género Exiguobacterium

• BGP, catalasa
• Pigmento amarillo oro a naranja
• Metabolismo fermentativo, no lipofílico
• Móvil por flagelos peritricos
• Oxidasa (la mayoría de las cepas)
• Esculina
• Presenta ciclo coco-bacilar
• 2 especies E. acetylicum (ex Brevibacterium
  acetylicum)
• E. aurantiacum (no aislada de especímenes
  clínicos)
• Se desconoce si forma parte de la flora habitual
  humana
• Aislado de piel, heridas y LCR

110
Género Oerskovia

• BGP, no AR, que forma micelio sustrato ramificado
  que fragmenta en formas cocoides y bacilares. No
  forma micelio aéreo
• Catalasa
• Metabolismo fermentativo. Móvil por flagelos
  peritricos
• Pigmento amarillo
• Motilidad V
• Esculina
• 2 especies O. turbata (xantina -, hipoxantina -,
  CAMP -)
• O. xanthineolytica (xantina , hipoxantina ,
  CAMP inversa )
• Hábitat suelo, materia orgánica de
  descomposición vegetal, aguas residuales, geles
  de hidróxido de aluminio
• Causa de meningitis, endoftalmitis, infección
  articular protésica, bacteriemia asociada a
  catéter, peritonitis asociada a DPAC,
  colecistitis gangrenosa post endoscopía,
  pionefrosis, infección de PPB, bacteriemia
  asociada a NPT contaminada
• ATB más activo (in vitro) vancomicina

111
Género Cellulomonas

• Bacilo gram positivo
• Catalasa (excepto C. fermentans)
• Motilidad V
• Metabolismo fermentativo
• Esculina
• Celulasa (excepto C. hominis)
• NO3 , Xilosa
• Colonias cremosas, de borde entero, blanquecinas,
  que se tornan amarillas después de 3 días o son
  amarillas desde el comienzo
• Hábitat suelo
• Formado por 8 especies pero sólo 1 especie C.
  hominis es de aislamiento clínico humano
  (bacteriemia)
• Todas las cepas testeadas son sensibles a Vanco,
  Tetra y Rifa

112
Género Microbacterium

• Bacilo gram positivo
• Catalasa (mayoría de las cepas, pero han sido
  descriptas cepas catalasa - )
• Motilidad V ( M. arborescens y M. imperiale son
  las únicas especies móviles)
• Metabolismo fermentativo
• Esculina
• Pigmento amarillo (excepto M. arborescens y M.
  imperiale que tienen pigmento naranja)
• NO3 - (mayoría de las cepas), xilosa v ? ?
  Cellulomonas
• Hábitat medio ambiente
• Aislado de sangre (septicemia, endocarditis,
  bacteriemia asociada a catéter) y de muestras
  oculares (endoftalmitis exógena)
• Sensible a la mayoría de los antibióticos
  (excepto Penicilina G y aminoglucósidos

113
Aureobacterium spp

• Bacilos o cocobacilos gram positivos
• Catalasa
• Esculina V
• Metabolismo oxidativo
• Motilidad (mayoría de las cepas)
• Gelatina y caseína
• Pigmento amarillo (pálido ? intenso) de aparición
  precoz
• Hábitat productos lácteos y medio ambiente
• Aislado de sangre (FOD, bacteriemia en pacientes
  con LMA, hemodiálisis crónica, sepsis fatal por
  picadura de insecto o abrasión de la piel
  contaminada con suelo), infecciones de PPB
  (absceso epidural, herida profunda abdominal,
  celulitis en pacientes con porfiria cutánea), LCR
• A. resistens es resistente a vanco (CIM 32 mg/ml)
  pero sensible a teico

114
CASO CLÍNICOVay C et al. Congreso Argentino de
Microbiología, 1998.

• Paciente de sexo masculino, 19 años de edad.
  Deficiente mental, sordomudo autista.
• Antecedentes IRC terminal secundaria a una
  malformación urinaria por reflujo, hemodiálisis
  desde 1993.
• 1995-1997 se colocaron y removieron 7
  catéteres por oclusión por trombos.
• Se colocó un catéter doble lumen permanente
  por vía gonadal para acceder a la vena cava
  inferior.

115
CASO CLÍNICO

• Se registraron varios episodios de bacteriemia
  por S. aureus oxacilino-resistente.
• Recibió vancomicina IV 1g/5 días.
  malformación urinaria por reflujo, hemodiálisis
  desde 1993.
• Octubre 1997 Escalofríos, fiebre e
  hipotensión.
• Se tomaron dos retroculltivos cuantitativos.

116
Resultados

• Recuento de colonias gt 100/ml de sangre

• Frascos Bact-Alert Positivos en 20 hs.
• Gram Bacilos gram-positivos difteroides
• AS 24hs Colonias puntiformes no definidas
• AS 48-72 hs colonias blanco grisáceas.
• AS después de las 72 hs colonias grandes,
  bajo convexas, 3 mm diámetro, amarillas.

117
Pruebas bioquímicas

• Metabolismo oxidativo
• Catalasa positiva
• Pigmento amarillo
• No lipofílico
• Movilidad positiva
• Esculina positiva
• Gelatina
• DNAsa

118
Sensibilidad Antibiótica y Tratamiento

• CIM ( dilución caldo)
• Peni-ampi-cipro 2 ug/ml
• Vanco-TMS 16 ug/ml
• Teico 0,5 ug/ml
• cefalo-eritro-azitro 32 ug/ml
• ceftriaxona 64 ug/ml
• amica-genta 128 ug/ml

• Tratamiento
• se interrumpió vancomicina.
• Se utilizó ampicilina vo 2g/día 4 semanas.
• Hemocultivos control negativos.

119
Aureobacterium sp
120
Sensiblidad a los Antimicrobianos de
Aureobacterium spp
Antibiótico Funke et al. 13 cepas CIM µg/ml Funke et al. 13 cepas CIM µg/ml Funke et al. 13 cepas CIM µg/ml Nolte et al 1 cepa CIM µg/ml Colaert et al 1 cepa difusión Vay et al 1 cepa CIM µg/ml
Rango 50 90
Ciprofloxacina 0.5-32 2 8 gt 2 R 2
Clindamicina 0.25-16 4 8 gt 2 ND ND
Eritromicina lt 0.125-16 lt 0.125 0.5 gt 4 S 32
Gentamicina 1-64 8 64 6 S gt 128
Penicilina lt 0.125-16 0.5 1 1 S 2
Rifampicina lt 0.125-326 1 8 lt 1 ND gt 4
Tetraciclina 0.125-2 0.5 2 ND S ND
Cefalotina ND 16 S 32
Ceftriaxona ND 16 S 64
Amicacina ND gt 32 ND 128
Vancomicina lt 0.125-4 0.5 4 gt 16 S 16
teicoplanina ND0 ND ND 0.5
ND no determinado
Bacteriología. Hospital de Clínicas. UBA.
121
Leifsonia aquatica

• Bacilo gram positivo
• Catalasa
• Motilidad
• Pigmento amarillo (que desarrolla lentamente
  dentro de los 3 a 4 días)
• Metabolismo oxidativo, oxidasa , ciclo coco-
  bacilo
• Dnasa
• Gelatina -, caseína -
• Esculina V
• Hábitat agua
• Descripto como agente de bacteriemia, meningitis,
  peritonitis asociada a DPAC e ITU
• Frecuente sensibilidad intermedia a vancomicina
  (CIM 8mg/ml) ? mecanismo desconocido

122
Bacilos gram positivos Pruebas de sensibilidad
antibiótica
123
Corynebacterium spp
124
MEDIO DE CULTIVO

• Mueller Hinton Tween 80
• LIPOFÍLICAS
• Mueller Hinton 5 sangre carnero
• Mueller Hinton ? NO LIPOFÍLICAS

125
CONDICIONES DE INCUBACIÓN

• Tiempo 24 hs. (48)
• Temperatura 35 C
• Atmósfera aire ambiente

126
PUNTOS DE CORTE

• No hay puntos de corte definidos para
  Corynebacterium
• Aproximación ? puntos de corte
  estafilococos

127
PUNTOS DE CORTE PENICILINA
Criterio CIM (µg/ml) CIM (µg/ml) CIM (µg/ml)
Criterio Sensible Intermedio Resistente
Listeria ? 2 - -
Estreptococo ? 0,12 0,25-2 ? 4
Estafilococo ? 0,12 - ? 0,25
128
CATEGORIZACIÓN DE ERRORES

• Very Major Falsa Sensibilidad
• Major Falsa Resistencia
• Minor Valor intermedio cuando el
  resultado es sensible o resistente
• Very Major lt 1
• Major lt 5

129
DIFUSIÓN VS. DILUCIÓN VARIACIÓN DE ERROR

• Martínez-Martínez, 1995

ATB Error Error Error
ATB V. Major Major Minor
General 1,5 0,5 4,2
Vancomicina 0 0 0
Ciprofloxacina 0,8 0,8 8,8
Tetraciclina 3 0 6,7
Eritromicina 4,4 0,7 0,7

• Weiss, 1996

ATB Error Error Error
ATB V. Major Major Minor
Vancomicina 0 0 0
Eritromicina 0 0 5
130
DIFUSIÓN VS. DILUCIÓN VARIACIÓN ERROR POR PTO.
CORTE PENICILINA