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Dénombrement en surface après filtration sur
membrane

• Quand réaliser cette technique?

MORSA Sandrine sources http//membres.lycos.fr/ea
ndreux
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Cette méthodologie est utilisée quand...

• Les liquides alimentaires ont une faible
  concentration en micro-organismes.
• Le dénombrement est réalisé sur un grand volume.

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1. Principe

• Léchantillon est filtré sur une membrane capable
  de retenir les micro-organismes
• Cette membrane est ensuite déposée sur un milieu
  de culture permettant le développement des
  micro-organismes recherchés

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2. Matériel nécessaire
Godet
membrane
filtre
base
bouchon
tuyau à vide
fiole à vide
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3. Montage de lappareil

• Travailler dans des conditions aseptiques
• Flamber la base et le support filtre
• Laisser refroidir
• Poser STERILEMENT la membrane stérile
• Flamber le godet
• Laisser refroidir
• Poser le godet sur la base

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4. Technique de Filtration

• Verser doucement le liquide (pour une répartition
  plus homogène, commencer par verser de leau
  stérile)
• Faire le vide sans brutalité
• Bien rincer avec de leau stérile
• Sécher la membrane (faites plusieurs vides)
• Débrancher le tuyau à vide

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5. Mise en culture

• Retirer la membrane
• Déposer la membrane, face quadrillée vers le
  haut, sur le milieu de culture sec dune
  épaisseur minimale de 5mm
• Incuber
• Stériliser le matériel