??? ???? (Gene theraphy

1
??? ????(Gene theraphy )

• ????(gene theraphy )??????????????,???????
  ?????????????????????
• ???????,????????

2

• 1???????????
• ?????????????,???????????????????????,??????
  ??,?????????(???)
• 2?????????????????
• ????????,???????????????,??????????????
• ?????DNA???????????????????,????????????????
  ?????

3
? ?

• ????????????,??
• ???????
• 1?????????
• 2????????

4
1?????????

• ????????????????????(???,???????)?????????????
  ??????,?????????,???????????????

5
????????

• 1)?????????????????
• 2)????????,?????????
• 3)????????????????,????????
• (????????????????????????????????????3-5?,??????)

6
2.???????(somatic cell gene therapy)

• ?????????????,????????,??????????????????
  ???

7
? ?

• (1)???????????????,?????,???????
• (2)?????????,?????????,?????????,???????
• (3)????,?????,?????????????????
• (4)??????????????????

8
?????

• (1)?????????,?????????
• (2)????????????????

9
???????(The methods of gene therapy)

• ????????????????
• ????
• ??Gene????

10
1???????????

• ???????????????????
• ??
• ???
• ?
• ? ?
• ?
• ? ?
• ?
• ??????

11
2????????

• ??????,?????????????

12
(1)???

• ??????
• ?????????????,?????DNA
• ????,???????????,?????
• ???????,??????????????
• ?,???????
• Ca2(PO4)2DNA ? ??????
• ( Ca???? 125 mmol, DNA ????
• 50ug/ml? PH 7.0)
• ?
• ????2030min
• ?
• ????????? 524h

13
(2)????

• 1?????(electroporotion)
• ????????????,????
• ?????????????????
• ?DNA?????,?????
• ??
• ?? ??????????
• ????
• DNA????

14
2??????(microinjection )

• ???????????????????
• ?????

15
?????????

• ????
  DNA
  
• ???
  (??)
• 
  
• 
  ?????
  
• 
  ??
• 
  ???
• 
  ? ?
• 
  
  
  
  
• ????????
• (?????????????,????????)

16
(No Transcript)
17

• clone sheep Dolly
• ??? ?? ?
• ????
  ?? Dolly
• ??? ?? ??

18
3?????(liposome)

• ?????????????????
• ???,??????,???????,??DNA?????,?????
• DNA ???
  ????
• PEG
• ????

DNA
??
19
4.?????

• ????(homologus recombination)???????????????
  ??????????????
• ??????????????????
• ??? ???

20
???????????????
???,??????????????neo??(???????),?????????neo
???????,????????????,????????????
d
ß
??????
Xha I
BstXI
Xha I
C
XhaI
BstXI
?ß
??????????
neo
d
?ß
ß
neo
????
21
5.?????????(Viral mediated transfer)

• ????????(vector),????????????????,???????????

????
????
22

• ?????(RNA)
• ???????
• DNA??
• 1)?????(retrovirus)
• ?????????????????,???????,????RNA
  ????????DNA??,????????????(provirus),?????????????
  ?RNA,??????????????????????
• ????????????????????????,??????????

23
(No Transcript)
24
?????????(Mo-MLV)?????

• LTR
  LTR
• ? gag pol env
• U5 R U3
  U5 R U3
• U3???,R???,U5???????
• ???????,gag ????,pol????, env?????

25
?????????

• ?????????,?????100
• ??????????????????
• ??????,??????????????

26
? ?

• ?????????,??????7kb????
• ??????????????,???????????????,?????????????????,
  ??? ????????????
• ???????????,??????????
• ??????????,??????????,?????,??????????,??LTR??
  ?????

27
????????

• ??????Gene????,?????????
• 1)?????,???????????????
• 2)??????????????,
• ??????,?????,????????,???????
• 3)????????????

28
???????

• ???T????????????????????
• ??,?????ß?????????????????????
• ?C?????????????????? ?????

29
?????????????

• ?? ?????????????????,????????????,??????????

30
???????????????

• ?????????????,????????
• 1????????????
• 2??????????(????????)
• 3????????(?????????????,??Gnen????)

31
??Gene?????????

• ???Gene????????,?????
• ????Gene????????????
• ??,???????????????
• ??????????????,???
• ???????????????,??
• ??????????,Gen??????
• ?,????????????,????
• ???????????????

32
??Gene????????

• ???Gene??????????,????Gene?????????????????????

33
??????

• ???????,?????????,Gene???????
• ?????????,???Gene???????????
• ??????????????????
• ???????????,???????????

34
??????

• 1???????????????(??Gene??????)?
• ADA???-?????,??????????(ADA)???

35

• ADA-Gene vector (?????)
• ???? ??T Ly C IL-2??C??
  
• ??
• ??????
• 10?
• Gene??
• ??????
• 12?????10??
• ????ADA???????25
• 
  

36
2??????

• XR ,?????????,????????Xq26.3q27.2?????,???,?????,
  ?????????????????1/30 000?
• ????????????F???????

37

• ??????? F?cDNA ???
• 5 LTR F? neo SV PSO LTR 3
• ???????(CHO )?F???
• ?????????????????(????)?F???
• ?91?,????????????????(????)????????F?????,F???????
  ????5?
• ?????????????

38
3??????????

• ??Gene????????????,?????????????,????????TIL,???
  ????,?????????????,????????????

39
????????????????????

• ?IL-2 Gene ?TNF-Gene
• (??2) (??????)
  
• ???????
  
• ??
• TIL(?????????)
• ??????
• TIL????????,???????????? ????

40
4??????????

• ????(???)?????????????(????)????????,??????
  ????????????????,????????(???????????)????????????
  ?????????,??????????

41

• ?
• ???? ????
  
  
• ??
• ????

???? ?? Gene??? ? ????? ??

????
42

• ??
• ??????
  ??????
• HSV Gene-TK
  
• (????????,????????) GeneTK
• GCV(?????)
  
• 
  TdR
• P
  p
• GCV---p
• ??DNA??
  ?????
• ??????
• ??????/??(?????)

43
5?????????

• ???????????????RNA?DNA?????,??Gene??????,????????
  ???????Gene?????mRNA ?????????.

44
??????

• DNA
  DNA
• RNA
  RNA
• 
  
  
• 
  ??RNA
• 
  
• 
  ????

45
???????

• ??RNA????
• Vector Cell ??RNA ??mRNA
• ??RNA/DNA?????
• ???????RNA
• ???? Cacl2????,?????,??????????

46
??????????? ? ????(20?,??0.5?,?10?)
??????( 20?,??0.5?,?10?) ?????(10?,??1?,?10?)
??????(10?,??2?,?20?) ???????(5?,??10?,?50?)
?????????????
47
??????
??????