Citogen

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Citogenética no diagnóstico pré-natal
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Histórico

• Painter (1923) 48 cromossomos
• Tijo Levan (1956) colchicina e choque
  hipotônico 46 cromossomos
• Lejeune (1959) s. Down trissomia do 21
• Steele Breg (1966) cariotipo em células do LA
• Drets Shaw (1970) bandeamento G anomalias
  estruturais
• Décadas de 80 FISH
• Década de 90 SKY e CGH

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A filosofia do diagnóstico pré-natal é oferecer a
um casal sob risco a possibilidade de ter uma
criança normal, mesmo que a chance de ocorrer
algum defeito seja extremamente elevada
(Milunsky, 1973)
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Importância do diagnóstico

• Direito dos pais
• Reduz ansiedade
• Auxilia no aconselhamento genético
• Início do luto
• Rede de suporte
• Palnejamento econômico
• Intervenção terapêutica

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Indicações

• Idade materna avançada
• Filho anterior com cromossomopatia
• Trasnlocação balanceada de um dos pais
• Testes de triagem anormais
• Exames do pré-natal alterados
• Filho anterior falecido com MFC sem diagnóstico
• EIM

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O procedimento invasivo para diagnóstico
pré-natal só deve ser indicado quando o risco
para a anomalia for maior do que o risco de perda
fetal pelo procedimento
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CONSENTIMENTOINFORMADO
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Aconselhamento genético

• Diagnóstico correto
• Estimativa de risco para o caso
• Diagnóstico disponível risco? Sensibilidade?
  especificidade?
• Decisões decorrentes do resultado

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Exames invasivos

• Punção de VC (11-13 sem)
• Amniocentese precoce (12-14 sem)
• Amniocentese tradicional(15-18 sem)
• Cordocentese (gt 18 sem)

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Dificuldades

• Artesanal
• Treinamento de pessoal
• Estudo de células vivas
• Qualidade da coleta

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Insucesso de culturas

• Coleta inadequada
• Quantidade insuficiente
• Contaminação
• Células inviáveis
• Variação na estufa (temperatura ou CO2)
• Reagentes/tóxicos

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Coleta de material

• LA
• 2 seringas estéreis e descartáveis
• Mínimo 20 ml
• Deixar o material na seringa
• Não usar seringa BD
• Consentimento informado

• PVC
• 10 mg de vilo aspirado em seringa com meio de
  cultura e heparina
• Consentimento informado

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Coleta de material

• Sangue de cordão
• 5 ml em seringa heparinizada
• Manter na seringa
• Consentimento informado

• Restos fetais (aborto)
• Coleta de forma asséptica
• Manter em SF estéril ou meio de cultura
• Rotina

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PVC

• Após 20 anos redução dos problemas
• Menor risco de perda gestacional
• Menor risco de anomalias por disrupção
• Menor contaminação
• Maior confiabilidade
• Melhor qualidade do exame

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LA

• Menor risco de perda fetal
• Melhor qualidade de bandas
• Menor risco de contaminação materna
• Menor risco de pseudomosaicismo
• Maior volume de LA
• Crescimento celular mais rápido
• Sobrenadante utilizado em vários estudos

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Cariotipo normal com anomalias sexuais

• 46 XX em homens SRY está no X
• 46 XY em mulheres perda do SRY feminilização
  testicular
• Pseudohermafroditismo tecido gonadal de um sexo
  e genitália ambígua
• Hemarfroditismo verdadeiro presença de ovário e
  testículo ou ovotestis cariotipo 46 XX/46 XY

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Alteração de cromossomos sexuais

• Numérica
• Turner
• Klinefelter
• Estruturais do cromossomo X
• Estruturais do cromossomo Y

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Alterações numéricas de autossomos

• Trissomias
• Cromossomo 20 é comum em aborto espontâneo
• Polipliodias
• Triploidia 18 dos abortos espontâneos (3n69)
• Tetraploidia 7 dos abortos espontâneos (4n96)
• Cromossomo marcador

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FISH

• Resultado com 24-48 horas
• Identifica 90 das anomalias cromossômicas (13,
  18, 21, X, Y)
• Não detecta mosaicismos, translocações

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PCR

• Com apenas 1 ml de LA em 24 h se detecta
  trissomias 13, 18, 21 e cromossomos X e Y
• Usa marcadores polimórficos alélicos de STR
  (small tandem repeats)
• O produto amplificado é quantificado e as
  intensidades relativas calculadas em um software

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Hibridização genômica comparativa (HGC)

• Técnica de citogenética moleculardesenvolvida
  para rastrear ganho ou perda cromossômica em
  tumores
• DNA teste (verde) hibridiza com DNA referência
  (vermelho). As imagens dos sinais fluorescentes
  são capturadas. A razão verde/vermelho é
  quantificada

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HGC

• Vantagens
• Análise de todo geneoma em um só teste
• Rapidez 9até 72 horas)
• Desvantagens
• Alto custo
• Não detecta mosaicismos, translocações balanceadas

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Questões éticas

• Risco de perda gestacional
• Interrupção da gestação
• Lei
• Autorização judicial

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