Crit

1
Critères didentification dun Staphylococcus
Bouillon special pour la recherche de la
staphylocoagulase
Composition
Digestion papaïnique de viande de boeuf 500
mL Hydrolysat de gélatine 20 mL Citrate
trisodique 3 g Eau distillée 480 mL
Source de C et N
Source minérale
Bouillon CŒUR CERVELLE
Composition
Infusion de cervelle deveau 200 g Infusion de
cœur de bœuf 250 g Peptone de gélatine
10 g NaCl 5 g Phosphate disodique
2,5 g Glucose 2 g Eau distillée qsp 1 L
Source de C et N
Source minérale
Recherche de lenzyme après 24 heures
dincubation dans ces bouillons à 37C.
2
Recheche de la staphylocoagulase
0,25 mL de bouillon cœur cervelle 5 gouttes
0,25 mL de plasma oxalaté
Incuber à 37C pendant 30 min à 1 h
Bouillon cœur cervelle
Tube stérile
Plasma oxalaté
Incliner délicatement le tube
Prise en masse du mélange ? présence de la
Sptaphylocoagulase
Le milieu reste liquide ? absence de la
Sptaphylocoagulase
3
Recherche de la thermonuclease
0,5 mL de bouillon cœur cervelle 10 gouttes
Porter au bain-marie à 100C pendant 15 min
Bouillon cœur cervelle
Tube stérile
1 goutte de milieu non chauffé
1 goutte de milieu chauffé
Puits formé à laide dune pointe de micropipette
Incuber 4 heures à 37C
ADN au bleu de touluidine
4
Lecture
Cas n1
Mise en évidence des produits dhydrolyse de
lADN sur bouillon normal ? présence dune
activité DNase normale
Cas n2
Mise en évidence des produits dhydrolyse de
lADN après passage à 100C ? présence de la
thermonucléase
Absence de produits dhydrolyse de lADN après
passage à 100C ? absence de la thermonucléase
Mise en évidence des produits dhydrolyse de
lADN sur bouillon normal ? présence dune
activité DNase normale
Identification de Staphylococcus aureus
entérotoxique
Cas n3
Si test négatif pour les deux bouillons ? il ne
sagit pas dun Staphylococcus aureus
Ce nest pas un Staphylococcus aureus
entérotoxique
5
Pastorex Staph

• Le réactif Pastorex Staph contient des
  particules de latex qui permettent la recherche
  simultanée sur les Staphylococcus
• du facteur daffinité pour le fibrinogène (RF),
  désigné sous le nom de coagulase liée,
• de la protéine A qui possède une affinité pour
  le fragment Fc des IgG
• des antigènes polysaccharidiques capsulaires des
  Staphylococcus résistants à la méticiline
  (antibiotique)

Toute agglutination du réactif test en présence
dune souche de Staphylococcus permet
didentifier Staphylococcus aureus.
Émulsionner les colonies pendant 10
secondes. Prendre une pipette pour chaque test.
Mode opératoire
Lame ou plaque dagglutination
1 goutte de témoin négatif
1 goutte de réactif test
Lecture
Présence dune agglutination en moins de 40 s ?
test positif Identification de Staphylococcus
aureus
Absence dagglutination ? test négatif
6
Schéma explicatif
Ac anticapsulaire
Protéine A

S aureus acapsulé
bille de latex
fibrinogène
Facteur daffinité pour le fibrinogène
IgG
Reconnaissance de la protéine A et du facteur
daffinité pour le fibrinogène ? Agglutination
7
Ag capsulaire

S aureus capsulé (METI R)
Reconnaissance de lAg de capsule ? Agglutination