Microscopie photonique

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Microscopie photonique

• PRÉSENTATION DU MICROSCOPE PHOTONIQUE
• UTILISATION DU MICROSCOPE PHOTONIQUE
• AUTRES TYPES DE MICROSCOPE PHOTONIQUES
• Microscopie en fluorescence
• Microscopie en contraste de phase
• Microscopie en lumière polarisée

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PRÉSENTATION DU MICROSCOPE PHOTONIQUE

• I. Partie mechanique
• I.a Parties statiques
• 1 La potence
• 2 Pied ou socle
• 3 Platine(souvent avec un dispositif qui permet
  de déplacer la lame)
• I.b Parties mobiles
• 4 Vis macromètrique (grands déplacements)
• 5 Vis micromètrique (déplacements fins)
• 6 Vis de déplacement avant
  arrière(vernier)
• 7 Vis de déplacement droite gauche ( vernier
  )
• 8 Vis de déplacement haut-bas du condenseur
• III. Parties optiques
• 9 Oculaire
• 10 Porte oculaire
• 11 Revolver
• 12 Objectifs (moyen x 10, fort x 40 ou plus,
  parfois immersion x 100)
• 13 Préparation ( lame )
• IV. Éclairage

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UTILISATION DU MICROSCOPE PHOTONIQUE

• A) PRÉPARATION DU MICROSCOPE  
• 1) Installer le câble électrique et brancher
  l'appareil.
• 2) Remonter le tube optique et mettre le faible
  grossissement (X 10).
• 3) Ouvrir le diaphragme.
• B) OBSERVATION AU FAIBLE GROSSISSEMENT  
• 1) Placer la lame sur la platine (la préparation
  doit être au centre du trou). La fixer avec les
  valets.
• 2) En regardant dans l'oculaire, descendre le
  tube optique jusqu'à ce que l'image soit nette. 
• 3) Rechercher la zone intéressante et la
  centrer.  
• C) OBSERVATION AU MOYEN GROSSISSEMENT    
• 1) Faire tourner le revolver pour que le moyen
  grossissement (X 20) soit en face du trou de la
  platine.
• 2) Sans changer le réglage, et en regardant dans
  l'oculaire, descendre lentement jusqu'à ce que
  l'image soit nette. Centrer.
• D) OBSERVATION AU FORT GROSSISSEMENT    
• 1) Relever le tube optique.
• 2) Faire tourner le revolver pour que le fort
  grossissement (X 40) soit en face du trou de la
  platine.
• 3) En regardant latéralement, descendre
  prudemment le tube optique de façon que
  l'objectif touche presque la lamelle.
• 4) En regardant cette fois dans l'oculaire,
  régler en remontant avec la vis micrométrique
  jusqu'à ce que l'image soit nette.  

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La microscopie en fluorescence

• Le phénomène de fluorescence
• certaines substances, émettent un autre de
  fréquence plus petite (donc moins énergétique)
• ces substances sont fluorescentes si cette
  émission se situe dans le domaine de la lumière
  visible
• si l'objet n'est pas naturellement fluorescent
• injecter un marqueur fluorescent qui diffuse dans
  l'échantillon et se fixe préférentiellement dans
  certains sites chimiques. Ces marqueurs sont
  appelés fluorochromes DAPI (qui marque l'ADN et
  fluorescence en bleu)
• protéine fluorescente
  verte (GFP), très utilisés en biologie.

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Principe du microscope en fluorescence

• Fluorescences primaire et secondaire
• émettent de la lumière fluorescente par
  eux-mêmes, fluorescence primaire ou
  autofluorescence
• doivent être combinés à une substance
  fluorescente pour émettre de la fluorescence on
  parle donc de fluorescence secondaire

• Application
• viruse, bacille Koch
• acides nucleiques
• fibres de colagen
• fibres elastiques

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La microscopie en contraste de phase

• le principe du microscope à contraste de
  phase est de compenser le déphasage que
  produisent les objets de phase par laction
  dune plaque de phase. Celle-ci ramène
  létat de phase à celui qui serait donné
  par un objet damplitude et transpose ainsi
  les contrastes de phases en contrastes
  damplitudes
• lobjet transparent devient contrasté sans
  laction de colorants
• à chaque objectif correspond un diaphragme
  différent, centré sur la plaque de phase de
  lobjectif, et que lon insère au niveau du
  condenseur

• Application
• etude de la cellule in vivo
• les mouvements des cilles et flagelles
• bande des chromosomes

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Microscopie en lumière polarisée

• les microscopes polarisants permettent de
  visualiser des objets de faible contraste
• les deux rayons dus à la biréfringence peuvent
  interférer entre eux
• un des deux rayons, en traversant l'objet à
  étudier, prend du retard par rapport à l'autre,
  et l'interférence obtenue dépend de ce retard
• dans un milieu biréfringent, l'indice de
  réfraction dépend des directions de propagation
  et de polarisation du rayon lumineux
• observer des images projetées en relief
• Application
• fibres de colagenes
• fibres musculaires
• granules proteiques ou lipidiques