SEMINARIO DE ADN

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SEMINARIO DE ADN
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REPORTE DE CASO IDENTIFICACIÓN DE CUERPOS
SEVERAMENTE QUEMADOS DE UNA COLISIÓN VEHICULAR
USANDO LA TÉCNICA RFLP (POLIMORFISMO DE LONGITUD
DE FRAGMENTOS DE RESTRICCIÓN)
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OBJETIVO

• El artículo describe el trabajo conducido por el
  Departamento de Química de Malasia, en un
  esfuerzo para identificar 13 víctimas severamente
  quemadas de una colisión en la carretera que
  involucro a un autobús de turistas y un camión de
  transporte. Usando muestras de sangre de los
  familiares como referencia, usando la técnica de
  RFLP (sistema de realzamiento químico luminoso de
  un solo locus).

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1. ANTECEDENTES

• El 3 de diciembre de 1996 en , Kuala Lumpur,
  Malasia un autobús que llevaba turistas de
  Singapur, se impactó contra un camión de
  transporte, el autobús se vio envuelto en llamas.
  Trece personas de Singapur murieron, sus cuerpos
  estaban quemados e irreconocibles.
• Estudios post-mortem de las 13 víctimas fueron
  llevados a cabo en el Hospital Kuala Lumpur,
  donde un total de 21 muestras de sangre, medula y
  tejido fueron recolectados para análisis de DNA.
  Veinticuatro muestras de sangre de referencia
  fueron subsecuentemente colectados de sus
  respectivos familiares.

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• El laboratorio de DNA en la División Forense
  del Departamento de Química en Malasia, estuvo
  oficialmente en operaciones en Noviembre de 1994.
  Este fue el primer caso de ésta naturaleza,
  complejidad y urgencia, recibido por el
  departamento. Respondiendo a la necesidad de
  análisis inmediato, un equipo de seis científicos
  oficiales identificaron positivamente a todas las
  13 víctimas a nueve días de recibir el primer
  conjunto de muestras.

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2. MATERIALES Y MÉTODOS

• METODOLOGÍA
• El DNA fue extraído de cada muestra de sangre
  liquida, medula y tejido, usando la extracción
  con fenol/cloroformo/isoamil alcohol después de
  la digestión de la proteinasa K.
• El DNA fue digerido con enzima de restriccion
  Hae III
• Se prosiguió a realizar una electroforesis en un
  gel de agarosa de 0.8 (Budowle et al. 1990).
• El DNA K562 fue usado como un marcador de
  control interno, y el DNA adenovirus digerido con
  enzima de restricción Kpn1 fue usada como
  marcador visual durante la electroforesis.

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• Un marcador de dimensión analítica compuesto de
  30 bandas con fragmentos que iban de 526 a 22,621
  pares de bases (bp), adquiridos de GibcoBRL
  (Rockville, Maryland), fue usado para determinar
  el tamaño de los alelos de cada individuo.
• El DNA analizado mediante la técnica de RFLP fue
  realizada para detectar los alelos en cuatro loci
  geneticos D2S44, D4S139, D5S110 y D10S28 en el
  fragmento Hae III usando los probes YNH24 (Luz
  GenePrint), PH30 (Aces), LH1 (Aces) y TBQ7 (Luz
  Geneprint), respectivamente. La Luz Geneprint y
  Aces fueron adquiridos del Promega (Madison,
  Wisconsin) y Bivco BRL, respectivamente.

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• La Tabla 1 enumera la identidad física de las
  víctimas y los tipos de muestras enviadas por los
  patólogos forenses que realizaron las autopsias.
  El DNA fue extraído de al menos una de las
  muestras de cada víctima para análisis de DNA
  usando la técnica RFLP.
• Tabla 1 Identidad física de las víctimas del
  accidente y tipos de muestras enviadas para
  análisis DNA
• Victima Edad y Genero Tipo de Muestras
• Cuerpo 1 Menor, femenino, 10-12
  años Sangre, Medula
• Cuerpo 2 Adulto, masculino, 20-40
  años Sangre, Medula
• Cuerpo 3 Adulto, femenino, gt55 años
  Sangre, Medula
• Cuerpo 4 Menor, masculino, gt 6 años
  Medula
• Cuerpo 5 Adulto, femenino, gt 55
  años Medula
• Cuerpo 6 Adulto, masculino, 20-40
  años Sangre, Medula
• Cuerpo 7 Adulto, femenino, 20-40
  años Medula
• Cuerpo 8 Menor, femenino, 10-12
  años Medula
• Cuerpo 9 Adulto, femenino, 20-40
  años Medula, musculo
• Cuerpo 10 Adulto, masculino, edad
  media Sangre, Medula
• Cuerpo 11 Adulto, femenino, 20-40
  años Medula, musculo
• Cuerpo 12 Adulto, masculino, 20-40
  años Sangre
• Cuerpo 13 Adulto, masculino, edad
  media Sangre, medula

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3. RESULTADOS Y DISCUSIONES

• La Tabla 2 muestra los tamaños de los alelos
  Hae III (en pares de bases) obtenidos al loci
  genético D2S44, D4S139, D5S110 y D10S28 de las
  muestras biológicas de las 13 víctimas.

Victimas D2S44 (YNH24) D4S139 (PH30) D5S110 (LH1) D10S28 (TBQ7)
Cuerpo 1 2636 2243 5266 3911 2035 1365 1737 1012
Cuerpo 2 2060 1456 5271 4483 3125 2186 3271 1562
Cuerpo 3 1921 1790 8684 5544 5626 1513 2119 1215
Cuerpo 4 1661 1519 8727 7734 5593 3445 2102 977
Cuerpo 5 1695 1405 9060 3039 5239 2421 2255 1683
Cuerpo 6 1928 1035 5131 3230 4357 1987 2905 1165
Cuerpo 7 2101 1988 6933 5841 7185 4583 4583 1015
Cuerpo 8 2617 2225 5231 3888 2010 1351 1723 1009
Cuerpo 9 1785 1524 8630 6823 5551 2161 2088 1207
Cuerpo 10 1819 1762 7861 6034 3037 1571 1584 968
Cuerpo 11 1910 1789 7488 4644 2980 2719 1733 970
Cuerpo 12 2719 1636 7488 6633 3436 3076 967 653
Cuerpo 13 1876 1461 9270 5317 2991 1336 1752 959
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• Se analizaron los árboles genealógicos de seis
  diferentes familias deducidas de las muestras de
  sangre de referencia. Todos los 13 cuerpos de las
  víctimas fueron subsecuentemente identificados de
  estos árboles genealógicos.
• La tabla 3 resume lo que se encontró. La ventana
  de igualación usada por el laboratorio de DNA es
  - 2.5 (eje, el tamaño máximo de diferencia
  entre dos alelos iguales es 5). Fueron llevados
  a cabo comparativos, usando el análisis bin-fijo,
  y algunos de ellos involucraban comparaciones
  intergel (Budowle 1991 Morris 1989, Endean 1989).

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TABLA 3. Muestra el resumen de lo encontrado
Número de familia Número de cuerpo
1 2
2 6
3 5
4 1,8 y 13
5 7,10 y 11
6 3, 4 ,9 y 12
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• Al comparar todos los resultados, no se
  encontraron alelos homocigotos en ninguna de las
  13 víctimas y ningún perfil adulto masculino o
  femenino fue lo suficientemente similar para
  resultar confuso o igualado con ningún otro
  donador de referencia. Este sistema cerrado fue
  relativamente derecho para identificación por
  eliminación.

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4.CONCLUSIONES

• Este caso, el primero de ésta naturaleza en
  ser manejado por el laboratorio de DNA,
  proporciona varias lecciones invaluables
• La interpretación de los resultados debieron ser
  terminados y confirmados solo después que los
  resultados de las víctimas y donadores de
  referencia fueron obtenidos y estudiados juntos.
• La buena coordinación entre el analistas de DNA y
  patólogos forenses realza el proceso de
  identificación.
• Cooperación entre gobiernos es esencial en
  facilitar la colecta de muestras de referencia

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POR SU ATENCIÓN GRACIAS