Pr

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Influence de la structure des chromosomes
sur lexpression des gènes
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Préparation et observation des chromosomes

• Chez la drosophile 4 paires de chromosomes

• Chromosomes polyténiques
• Glandes salivaires de larves de troisième stade

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Glandes salivaires
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Noyaux de cellules de glandes salivaires non
éclatés (X100)
5
(No Transcript)
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Chromosomes polyténiques bien étalés (x400
coloration orcéine acétique)
7
Chromosomes polyténiques bien étalés (x400 vue
en contraste de phase sans coloration)
8
W (B6, C2)
Carte de Bridges
W
Observation microscope photonique
W
Observation microscope electronique
Observation de la région du gène white sur le
chromosome X
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Constriction (C) de la partie antérieure du
chromosome X
10
Boucle de délétion
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Appariement dune délétion de la région des
gènes zeste/white avec un chromosome normal
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1
2
3
Chromosome X non délété
w
Chromosome X délétion wN
Chromosome X délétion wpn
Délétions de la région white du chromosome X
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Inversion
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Boucle dinversion sur le chromosome X
15
Exemples dinversion
16
Une inversion du chromosome X In(I)wm4
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• Pour obtenir une bonne préparation de chromosomes
• de drosophile il faut
• Cultiver les mouches à basse température
  (19/20C)
• Le milieu doit être enrichi par de la levure de
  boulangerie fraîche
• délayée dans un peu deau
• Une faible densité dindividu pour ensemencer la
  culture (5 à 10 couples)
• Prélever les larves avant leur immobilisation
  sur la paroi des flacons de
• culture, elles ne doivent pas présenter
  dappendices antérieurs plumeux.

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(No Transcript)
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Choisir des larves femelles !!!
20
La
Dissection Les larve de 3ème stade sont
prélevées et déposées sur une lame de microscope
dans du sérum physiologique. La larve est
observée sur fond noir au grossissement x10 dune
loupe binoculaire Avec des pinces fines
immobiliser la larve en la pinçant au tiers
antérieur et avec une deuxième pince tirer sur la
machoire Vous devez aboutir à la figure
suivante
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Dissection de la larve daprès
http//wwwusers.imaginet.fr/pol/4chrgean.htmProt
ocole
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(No Transcript)
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Dissection de la partie antérieure dune larve de
3ème stade
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Les glandes salivaires se présentent sous la
forme de deux tubes réunis en un canal unique au
niveau de la mâchoire (voir photo). Les glandes
sont souvent recouvertes de corps gras.
Corps gras
Glandes salivaires
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Prélever les deux glandes en essayant au maximum
déliminer le corps gras ceci sans léser les
glandes, les transporter sur une autre lame
dans de lacide acétique 45, acide lactique, et
laisser environ 30 secondes Remplacer lacide
acétique par la solution de coloration orcéine/ac
ide acétique/acide lactique (2g orcéine dans 50
ml acide acétique 50ml acide
lactique) Laisser colorer environ au moins 15
minutes Couvrir la préparation avec une lamelle
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• Eclatement des noyaux des cellules des glandes
  salivaires
• Tapoter avec la pointe dun crayon de papier sur
  la lamelle à lendroit ou se trouve les glandes
  salivaires.
• Taper fortement plusieurs fois sur la lamelle
  avec lautre extrémité du crayon
• Mettre la préparation sur du papier filtre et
  presser très fortement avec le pouce sur la
  lamelle en faisant attention à ce quelle ne
  glisse pas