Tcnicas para evaluar Inmunodeficiencias

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Técnicas para evaluar Inmunodeficiencias

• Inmunología Aplicada 1065
• Carolina Hernández Martínez
• Formación de profesores 2005
• Supervisado por Ma. Dolores Lastra

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Biometría Hemática

• Número total de eritrocitos, plaquetas,
  linfocitos, monocitos y granulocitos.
• Linfocitos B CD18,CD19, CD20, CD21, CD22, CD23,
  CD25, CD43, CD44
• Linfocitos T CD3, CD4, CD8, CD18, CD25, CD43,
  CD44
• Células NK CD56, CD16, CD18, CD43, CD44
• Neutrófilos CD11a, CD63
• Monocitos-Macrófagos CD14, CD18, CD23, CD25,
  CD43, CD44

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Función de las células T

• Pruebas cutáneas de hipersensibilidad retardada.
• Estudios funcionales in vitro.
• Respuesta linfoproliferativa.
• Produción de mediadores citocinas.
• Citotoxicidad T CD8.
• Citotoxicidad NK.

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Prueba de hipersensibilidad retardada
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Respuesta linfoproliferativa

• Consiste en cultivar linfocitos del paciente
  con los antígenos que quieren ser evaluados o
  estudiados y con varios mitógenos que se utilizan
  como control de la inmunoproliferación
  (estimulación no específica). La transformación
  blástica específica se mide por la capacidad que
  tiene el antígeno de inducir la proliferación
  linfocitaria.

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Rosetas con los eritrocitos

• Los linfocitos T presentan la característica
  de formar rosetas cuando se unen a los
  eritrocitos de carnero . Se pueden cuantificar
  los linfocitos T incubándolos con eritrocitos de
  carnero (reconocimiento de moléculas CD2 y
  CD58) y la posterior observación al microscopio
  se numeran las rosetas (entre 70 y 80 positivas
  en pacientes normales).

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(No Transcript)
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ACTIVIDAD CITOTÓXICA DE LOS LINFOCITOS T (CD
8)

• La actividad citotóxica de los linfocitos T (CD
  8) frente a una célula blanco se puede estudiar,
  midiendo la capacidad de destrucción, que un
  determinado número de linfocitos T tienen para
  destruir un determinado número de células blanco,
  al estar ambas poblaciones en contacto. Se puede
  medir mediante la liberación de Cr51 por las
  células blanco previamente marcadas.

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Citotoxicidad NK

• En esta prueba se mide la capacidad de estas
  células para matar células blanco especiales
  (K562). La citotoxicidad suele determinarse
  mediante el uso de Cr51.
• Por citometría de flujo se determina la
  actividad de estas células utilizando los
  marcadores específicos.

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(No Transcript)
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Subpoblaciones de T

• Mediante anticuerpos monoclonales se pueden
  marcar las diferentes poblaciones linfocitarias
• Linfocitos Th CD4
• Linfocitos Tc CD8
• Las mediciones obtenidas se indican en
  porcentajes de cada población.
• Se pueden utilizar otros marcadores.

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(No Transcript)
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Evaluación de la Fagocitosis
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• Índice Fagocítico. Determina la capacidad de
  fagocitar de los leucocitos, pero no el poder
  para digerir las partículas fagocitadas.
• Actividad bactericida. Complementa la prueba
  anterior y determina si las bacterias fagocitadas
  son o no destruidas por las lisozimas de los
  fagosomas de los leucocitos.

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(No Transcript)
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Prueba del NBT

• Es posible observar la reducción del nitroazul de
  tetrazolio (NBT) debido a que éste acepta un
  protón, cambiando su típica coloración amarilla
  transparente por un azul intens (azul formazán).

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Prueba de la reducción de dihidrorodamina (DHR).

• Los fagocitos reducen el DHR a un compuesto
  fluorescente en individuos sanos. Al no haber
  presencia de fluorescencia se suele tratar de una
  EGC ligada al X, pero con presencia en bajas
  cantidades, hablamos usualmente de una AR.

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Eritrofagocitosis

• Se basa en la cuantificación de la hemoglobina
  liberada por los eritrocitos que han sido
  fagocitados utilizando un espectrofotómetro.
• En una placa, se colocan una concentración
  conocida de macrófagos del paciente en seis
  pozos, se incuban. Se coloca SRBC opsonizados (es
  decir, unidos al complemento o IgG) y sin
  opsonizar, se incuban.
• Se añade el sustrato y se mide la
  absorbancia.

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Eritrofagocitosis
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• Ventana cutánea de Rebuck.
• Normalmente se presenta un acúmulo de PMN en
  las primeras 6 horas, después es sustituido por
  uno de linfocitos (poco utilizada).

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Quimiotaxia

• Se basan en medir la locomoción direccional de
  los neutrófilos hacia diversos estímulos
  quimiotácticos Cámara de Boyden.

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• Quimioluminiscencia
• Los neutrófilos emiten pequeñas cantidades de
  radiación electromagnética después de la
  ingestión de microorganismos. Durante la
  explosión respiratoria se genera oxígeno
  molecular (inestable y muy reactivo) se combina
  con bacterias u otros elementos intralisosómicos
  formando grupos carboxilo de inestabilidad
  electrónica. Cuando estos grupos regresan a su
  estado basal, emiten energía lumínica.

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(No Transcript)
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Evaluación General de la Inmunidad Mediada por
Anticuerpos Métodos Inmunológicos utilizados para
identificar anormalidades fenotípicas y
defectos genéticos y moleculares
Evaluación fenotípica Concentración de
Inmunoglobulinas en suero Subclases de IgG
Anticuerpos específicos Anticuerpos
antiproteínas Anticuerpos contra tétanos y
difteria Anticuerpos contra H influenza
Anticuerpos antipolisacárido
Isohematoaglutininas Anticuerpos contra el
polisacárido del neumococo Anticuerpos
antibacteriófago Enumeración Células B (poca
aplicación) Evaluación de la función de células
T Evaluación de defectos genéticos y
moleculares Detección de defectos moleculares
en células B y T Identificación de
anormalidades genéticas
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(No Transcript)
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Pruebas para células B

• Proteínas (Electroforesis)
• IgA,IgE
• Isohematoaglutininas AB (IgM)
• Anticuerpos antitoxoide tetánico (función IgM)
• Anticuerpos antitoxoide diftérico (función IgG)
• Anticuerpos anti candida
• Anticuerpos anti pneumococo
• Antígeno CD20 (función de células B)
• Subclases de IgG