LES AUTO-ANTICORPS EN PRATIQUE COURANTE

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LES AUTO-ANTICORPS EN PRATIQUE COURANTE

• Dr. M.Delire Pédiatrie, Immunologie
• Dr. M.P.Lallemand Biologie Clinique

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Les maladies auto-immunitaires notions générales

• Dr.M.Delire

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Physiopathologie

• Les maladies auto immunes sont la conséquence
  dune rupture de la tolérance immune aux
  antigènes du soi.
• Les mécanismes de tolérance immune sont
• ? centraux (thymus et moelle osseuse)
• ? périphériques

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Mécanismes centraux de tolérance immune

• Les lymphocytes-T auto réactifs sont éliminés au
  niveau du thymus
• Les lymphocytes-B auto réactifs sont éliminés
  avant sortie de la moelle osseuse

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Mécanismes périphériques de tolérance immune

• Les mécanismes centraux de tolérance immune sont
  incomplets, et un certain nombre de lymphocytes
  auto réactifs y échappent
• Ces lymphocytes circulants sont maintenus
  inactifs par toute une série de mécanismes
• Les maladies auto immunes peuvent donc avoir une
  origine centrale (thymus),ou périphérique

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• Les lymphocytes-T sont responsables de la grande
  majorité des maladies auto immunes, car ils sont
  nécessaires à la production dauto-anticorps par
  les lymphocytes-B
• Les lymphocytes-B sont responsables de la grande
  majorité des lymphomes et leucémies, car
  présentant un taux de mutation 1.000 fois
  supérieur à celui des autres cellules de
  lorganisme

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Causes des maladies auto immunes

• Facteurs de prédisposition génétique
• ? système HLA,
• ? anomalies du système du complément,
• ? anomalies du thymus, etc.
• Facteurs environnementaux
• ? Infections,
• ? hormones (oestrogenes, corticostéroïdes)
• ? radiations, toxines
• ? médicaments, etc..

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Exemples de relation entre phénotype HLA et auto
immunité

• HLA DR3 ? Maladie dAddison
• HLA DR4 ? Arthrite rhumatoïde
• HLA B27 ? Spondylarthrite ankylosante
• HLA DQ2 ? Hypersensibilité au gluten
• HLA DQ8 ? Diabète type I
• Etc

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Classification générale des maladies auto immunes

• 1. Maladies auto immunes systémiques dirigées
  contre antigènes ubiquitaires
• (ADN, nucléosome, histone, ANCA, etc.)
• ? lupus érythémateux disséminé,
• ? polyarthrite rhumatoïde,
• ? syndrome de Goujerot Sjögren,
• ? sclérodermie,
• ? polymysosite,
• ? vascularites

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Classification générale des maladies auto immunes

• 2. Maladies auto immunes spécifiques dorganes
  ou de systèmes (quelques exemples)
• ? thyroïdites auto immunes,
• ? diabète insulino dépendant (type I),
• ? maladie de Crohn, rectocolite hémorragique,
• ? myasthénie grave,
• ? syndrome de Guillain Barré,
• ? sclérose en plaques,
• ? etc., etc., etc,..

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Et en pratique ???
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Techniques utilisees

• Immunofluorescence
• Elisa
• RIA
• Immunodot

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IMMUNOFLUORESCENCE

• SUR CELLULES HEP-2
• Sur polynucléaires neutrophiles
• SUR COUPES DE TISSUS

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CELLULES HEP-2

• Cellules de carcinome laryngé humain
• Lames avec puits
• Mise en évidence danticorps dirigés contre le
  noyau, les nucléoles, les organites
  (mitochondries, lysosomes), les filaments
  (actine)
• Fluorescence au niveau du noyau homogène,
  mouchetée, centromérique, granulaire,
  nucléolaire, dots...
• Fluorescence cytoplasmique granulaire, fibres,
  dense

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• FLUORESCENCE AU NIVEAU DU NOYAU

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Fluorescence homogène
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Anti-centromere
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Nucleolaire homogene
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• FLUORESCENCE AU NIVEAU DU CYTOPLASME

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Anti-mitochondries
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Anti-actine
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Polynucleaires neutrophiles (ANCA)

• P-Anca
• C-Anca
• MPO et PR3

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Anticorps anti-cytoplasme ANCA

• Dépistage par IF sur polynucléaires neutrophiles
• C-ANCA et P-ANCA
• Anti-PR3 (souvent c-Anca) évocateur de la
  granulomatose de Wegener
• Anti-MPO (souvent p-Anca) sont retrouvés dans la
  maladie de Churg et Strauss, la polyangéite
  microscopique et les glomérulonéphrites
  nécrosantes pauci-immunes.
• Ces vascularites auto-immunes sont rares
  (prévalence lt 5/100.000 personnes

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COUPES DE TISSUS

• ESTOMAC / REIN
• ESTOMAC / REIN / FOIE
• ŒSOPHAGE

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ANTI-ACTINE
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ANTI-CELLULES GASTRIQUES
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Anti-mitochondries
estomac
Muscle lisse
rein
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ELISA - eiadosage immuno-enzymatique sur milieu
solide

• Utilisation de microplaques ou de  crayons 
• Automatisation possible
• Dosage de dsDNA, nucléosomes MPO, PR3

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Dot

• Le dot est un monotest constitué dune membrane
  sur laquelle sont coatés en fines lignes
  parallèles différents antigènes purifiés et
  caractérisés biochimiquement.
• Une tigette synthétique sert de support à la
  membrane coatée .
• Cette technique permet en une seule incubation du
  sérum, de tester plusieurs paramètres en fonction
  du type de dot choisi (panel dantigènes).
• La lecture du test se fait simplement à loeil nu
  ou via un scanner.

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Feuille lecture scanner dot hepatique
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Utilité des autoanticorps en medecine generale
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• Un casse-tête pour le médecin ? ???

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Auto-anticorps non specifiques dorgane - ana
Prévalence des ANA
LED induit 100
Sclérodermie systémique 85-98
Polymyosite 40-78
S. De Gougerot Sjögren 50-95
Arthrite rhumatoïde 20-40
Arthrite psoriasique 15
Myasthénie grave 40-60
Sujet sain gt 60 ans 5-30
Hiemanta M. et al. Am Med 1996 23283-91
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Anticorps anti-mitochondries

• Retrouvés dans 95 des Cirrhoses biliaires
  primitives
• CBP femmes de 30 à 70 ans, prurit, asthénie et
  ictère.
• Lésions histologiques (nécrose des canalicules
  biliaires avec réaction inflammatoire)
• AMA pour le DD des pathologies hépatiques
  cholostatiques.

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La cirrhose biliaire primitive CBP

• Prurit (peut apparaître pour la première fois au
  cours dune grossesse). Un prurit isolé est
  fréquemment lunique symptôme inaugural !!!
• Fatigue
• Signes de cholestase (ictère , hyperbilirubinémie,
  élévation des PAL)
• Incidence CBP 10 cas/100.00 personnes
• Prédominance féminine nette
• 90 à 95 des malades sont des femmes entre 30 et
  60 ans

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CPB et serologie

• Anticorps anti-mitochondries (anti-M2)
  retrouvés pratiquement dans tous les cas
• Dautres anticorps peuvent aussi être retrouvés
  (mais toujours en association avec les
  anti-mitochondries type M2)
• - anti-centromères (association avec S. de Crest
  dans 10 à 20)
• - anti-SSA/SSB (association avec S. de Gougerot
  Sjögren)

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Anticorps anti-muscles lisses et lkm

• Unique moyen pour le diagnostic dune hépatite
  chronique auto-immune de type I (anti-actine) ou
  de
• type II (anti-LKM)
• Traitement de choix HCA corticothérapie
• Interferon a contre-indiqué?avant de traiter par
  IFNa pour une suspicion dhépatite C, il faut
  rechercher la présence des Ac-muscles lisses
  (spécificité actine !) et Ac-LKM pour écarter le
  diagnostic dHCA

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Cholangite sclerosante primitive

• ANCA dans 60 à 70 des cas mais PR3 et MPO
  négatifs
• Diagnostic différentiel des hépatites chroniques
  avec cholostase
• ? anti-actine hépatite auto immune type I
• ? anti-LKM hépatite auto immune type II
• ? anti-mitochondrie cirrhose biliaire primitive
• ? ANCA cholangite sclérosante primitive

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Quelle strategie ???
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maladies auto-immunes

• Indications recherche auto-anticorps
• Arthrite
• Raynaud
• Rash cutané
• Vasculite
• Fièvre dorigine indéterminée
• Sécheresse buccale ou oculaire
• Faiblesse musculaire proximale
• Hématurie, protéinurie
• Cytopénies
• Thromboses à répétition

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Importance des donnees cliniques

• La recherche des auto-anticorps ne doit pas
  figurer dans un bilan de base
• Signes cliniques suspects ?demande auto-anticorps
  ciblée (restriction INAMI)
• Le protocole du laboratoire doit être explicite
• Le titrage dun anticorps anti-nucléaires, la
  description de la fluorescence observée, la
  caractérisation éventuelle des antigènes reconnus
  sont incontournables, les performances du test
  doivent être documentés
• Tout anticorps détecté ? MAI

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Les limites

• La quantification des anticorps peut être
  imprécise
• Variabilité importante selon les techniques
• Ne pas confondre spécificité et valeur prédictive
  positive
• Toujours intégrer les résultats de laboratoire au
  dossier clinique

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En resume.
MALADIES SYSTEMIQUES AUTO-ANTICORPS SPECIFIQUES
CONNECTIVITES
Lupus érythémateux disséminé Nucléosomes, dsDNA, Sm, PCNA
Lupus cutané subaigu SSA
Maladie de Sjögren SSA/SSB
Sclérodermies Centromère, nucléolaire, Scl70
Syndrome de Sharp RNP
Dermatomyosite Mi-2
Polymyosite Jo1, PL12, PL7, SRP
Polymyosite/sclérodermie PM-Scl, Ku
Calibri (Corps)
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VASCULARITES
Maladie de Wegener c-Anca, PR3
Microangiopathie Glomérulonéphrite microangiopathique p-Anca, MPO
Syndrome de Churg-Strauss c-Anca, MPO
MALADIES DU FOIE
Hépatite auto-immune type I Actine, SLA
Hépatite auto-immune type II LKM1
Cirrhose biliaire primitive Mitochondries M2
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Merci pour votre attention