TRANSFORMASI GEN

1
TRANSFORMASI GEN

• Ir. Makhziah, MP
• UPN Veteran Jawa Timur

2
Transformasi Gen

• Masuknya gen target (DNA rekombinan) ke dalam sel
  inang.
• Proses Transfer Gen
• Biologis
• Mekanis
• Kimia

3

• A. TRANSFER GEN SECARA BIOLOGIS
• Hasil cloning gen
• dikonjugasi, antara
• pBR322 pGV 3850
• (E. coli) (Agrobacterium)
• Jenis Agrobacterium
• Agrobacterium Tumefacient
• Agrobacterium Rhizogen

4

• Agrobacterium tumefaciens (At)
• Penyebab tumor
• CROWN GALL
• sintesis asam amino OPINE
• sumber carbon nitrogen
•  

5

• Nama Plasmid Ti (Tumor inducing)
• sifat stabil dalam At. pada suhu lt 30? C
• Segmen Ti
• Transfer DNA (T-DNA)
• Virulence (Vir)
• Konjugasi
• Replikasi plasmid

6

• 2. Agrobacterium Rhizogene (Ar)
• Penyebab Hairy Root
• Nama Plasmid Ri (Root Inducing)
• Segmen sama dg At
• Transfer DNA (T-DNA)
• Virulence (Vir)
• Konjugasi
• Replikasi plasmid

7
MEKANISME TRANSFER DNA   menginfeksi sel
tanaman Agrobacterium Eksudate

Asetosyringone (AS)

Induksi transkripsi gen-gen vir.

Aktifasi Gen vir. A
Gen vir. G
Gen vir. D Single stranded nick
Gen vir. E Lepasnya single
stranded T-DNA
Integrasi dalam sel tanaman
8
(No Transcript)
9
(No Transcript)
10
(No Transcript)
11
MEKANISME TRANSFER GEN MELALUI Ti PLASMID
12
IDENTIFIKASI TRANSFORMASI  Plasmid dimasuki gen
ketahanan antibiotik
(selectable marker)   misal
KANAMYCIN RESISTANCE b. Analisis DNA  
PCR (Polymerase Chain Reaction)
13
B. SECARA MEKANIS   a. Microinjection
Cara Immobilisasi 1. Immobilisasi
protoplas Polylisine 2. Holding
Pipette mobilization   Efisiensi Transformasi
tergantung Lokasi injeksi Bentuk fisik
DNA Konsentrasi DNA
14
TEKNIK MIKRO INJEKSI
15
MIKRO INJEKSI pada KENTANG BAWANG MERAH
Microinjection into the cell of a potato callus.
Using fine cannulae, DNA that codes for a
fluorescent protein was inserted into onion
cells. Two days after the injection, the green
dye can be seen. The integration of the foreign
DNA into the onion genome was successful
16

• b. Electroporation
•  
• Listrik tegangan tinggi ( 2500 V)
  
• Reversible Break-Down membran protoplas
  
• DNA masuk ke protoplas
•  
• Faktor-faktor yang mempengaruhi
• Voltage
• Waktu
• Umur sel/jaringan
• Bagian tanaman

17
(No Transcript)
18
(No Transcript)
19
PROSES TRANSFER GEN CARA ELEKTROPORASI
20
PERALATAN ELEKTROPORASI
21
ELEKTROPORASI PADA JAGUNG
22

• Particle Bombardment
• Digunakan untuk memasukkan DNA/ gen ke dalam
  tanaman yang sulit diregenerasikan dari protoplas
•  
• Particle
• Gold
• Coated DNA/Gene
• Tungsten
•  
• Yang digunakan gas Helium

23
(No Transcript)
24
PERALATAN PARTICLE BOMBARDMENT
25
MEKANISME PENEMBAKAN GEN by PARTICLE BOMBARDMENT
26
PENEMBAKAN GEN PADA TANAMAN PISANG
27
The End