CYTOLOGICK

1
CYTOLOGICKÁ TECHNIKA

• MUDr. Filip Wagner
• Ústav histologie a embryologie
• Lékarská fakulta UP v Olomouci

2
Zpusoby vyšetrení
cytologické vyšetrení
histologické vyšetrení
biopsie
exfoliativní cytologie
aspiracní cytologie
3
Exfoliativní cytologie

• umožnuje cytologické vyšetrení v telesných
  dutinách nebo površích
• získávání bunek
• prímým sterem (napr. na deložním hrdle)
• po mechanické iritaci speciálním kartácem
• laváží dutého orgánu
• vyšetrení bunecných sedimentu (výpotky, exkrety,
  likvor)
• otiskové preparáty (pritlacením sklícka na
  patologickou tkán vyjmutou z tela)

4
Aspiracní cytologie

• punkce provedená speciálne konstruovanými tenkými
  jehlami (FNA fine needle aspiration)
• rozetrení aspirovaného materiálu na podložní sklo
• složité morfologické hodnocení po bežném
  cytologickém barvení casto nutno doplnit
  speciální vyšetrení
• cytochemické barvení
• elektronmikroskopické vyšetrení

5
Provedení cytologie

• správná volba techniky a místa odberu
• správné provedení odberu
• príprava náteru
• fixace (je-li její provedení v postupu)
• cytologické barvení
• lze provést speciální techniky
• cytochemické barvení, imunocytochemie
• zobrazení elektronovou mikroskopií

6
Zhotovení náteru

• náter se zhotovuje na podložní sklícko pomocí
  bakteriologické klicky, tamponu nebo druhého
  podložního sklícka (se zabroušenou hranou)
• náter musí být dostatecne tenký a nesmí dojít k
  poškození bunecných elementu
• podložní sklícka musí být cistá, odmaštená,
  vypraná v etanolu

7
Fixace

• fixace vlhkého náteru etanol (96) - éterem (11)
  po dobu 30 60 minut
• izopropylalkohol 97,5 a ledová kyselina octová
  2,5

8
Barvení podle G. Papanicolaoua

1. alkohol 80, 70 - propláchnutí
2. opláchnutí destilovanou vodou
3. Harrisuv hematoxylin (6 minut)
4. opláchnutí destilovanou vodou
5. 0,25 roztok kyseliny chlorovodíkové (namocit 6x)
6. opláchnutí destilovanou vodou
7. alkohol ve vzestupné koncentraci 50, 70, 80,
   96
8. I. cytoplasmatické barvení OG 6 (2 minuty)
9. opláchnutí v 95 alkoholu
10. II. cytoplasmatické barvení EA 50 (2 minuty)
11. opláchnutí v 96 alkoholu
12. odvodnení (absolutní alkohol)
13. oplach v xylenu

9

• OG 6 Oranž G 0,5 roztok v 95 roztoku alkoholu
  s kyselinou fosfowolframovou
• EA 50 0,5 svetlá zelen, 0,5 Bismarkova hned a
  0,5 žlutý eosin v 95 roztoku alkoholu
• Bismarkova hned se v soucasnosti používá již jen
  v nekterých polychromech (EA31 a EA65)

10
Barvení dle E. Shora

• barvení Shorr SIII (1-5 minut)
• propláchnutí alkoholem 70 (asi 10x)
• propláchnutí alkoholem 93 (asi 10x)
• propláchnutí absolutním alkoholem (asi 10x)
• xylol (0,5 minuty)
• zamontování preparátu
• složení roztoku SIII
• alkohol 50 100 ml
• vodný roztok Biebrichovy cervene 0,5g
• oranž G 0,25g
• zelen FCF 0,075g
• kyselina fosfowolframová 0,5g
• kyselina fosfomolybdenová 0,5g
• ledová kyselina octová 1,0 ml

11
Barvení podle Z. Pekárka (modif.)

• oplach alkoholem 90
• oplach alkoholem 70
• oplach destilovanou vodou
• Mayeruv železitý hematoxylin (15 minut)
• oplach pod tekoucí vodou (5 minut)
• nasycený roztok kyselého fuchsinu v 96 alkoholu
  (30 sekund)
• 1 kyselina fosfomolybdenová (30 sekund)
• cytoplasmatické barvení (7-10 minut)
• smes 2 svetlé zelene v 96 alkoholu a 1 žlutý
  eosin v 96 alkoholu v pomeru 21
• oplach alkoholem 96
• oplach xylolem
• zamontování preparátu

12
Barvení dle Pappenheima

• panoptické barvení
• roztoky
• May Grünwald
• Giemsa Romanovski
• postup
• neredené May-Grünwaldovo barvivo (3 minuty)
• následne se barvivo na preparátu zredí stejným
  dílem destilované vody a nechá se pusobit 1
  minutu
• barvivo se slije a bez oplachu se prevrství
  Giemsovým roztokem /1 díl barviva na 10 dílu
  redestilované vody/ (15 minut)
• výsledky barvení
• chromatin cervenofialove, cytoplasma lymfocytu a
  monocytu svetle modre, azurová zrna svítive
  purpurove cervene, acidofilní zrna eosinofilních
  granulocytu cihlove cervene, bazofilní zrna
  modroružová, erytrocyty ružové

13
Vyšetrení moce
biochemie
cytologie
mikroskopické vyšetrení moc. sedimentu
mikrobiologie
pozor na zpusob odberu pro jednotlivé typy!
14
Mocová cytologie

• slouží pro cytologické vyšetrení bunek ve
• vymocené moci
• výplachové tekutine (z mocového mechýre,
  ledvinové pánvicky)
• tekutine získané punkcí (napr. renální cysty)
• uplatnení v uroonkologii
• skreening
• sledování nádoru
• provádí se centrifugací cerstve získaného
  materiálu (1500 3000 otácek/minutu), barvení
  metodou dle Papanicolaoua

15

• známky malignity v mocové cytologii
• makronukleóza
• prevaha jaderné hmoty nad cytoplasmou
• anizonukleóza
• nestejná velikost jader (polymorfonukleóza)
• hyperchromazie
• hrubý chromatin s nepravidelnými chromatinovými
  granulacemi
• zmeny v poctu a velikosti jadérek
• hodnocení
• petistupnové (PAP I a II negativní, PAP III
  suspektní a PAP IV a V pozitivní)
• pozor na negativní nález pri nesprávne zvoleném
  zpusobu odberu !!!

16
(No Transcript)
17
Vyšetrení sekretu v urologii
uretrální fluór

• uretrální fluór mikrobiologie
• prostatický exprimát
• získává se po krátkodobé masáži prostaty (per
  rectum), pacient si následne vytlací sekret
  smerem od korene penisu
• pro zánet svedcí více než 25 leukocytu v zorném
  poli (zvetšení 400x)
• ejakulát
• odber se provádí po asi pet dní trvající sexuální
  abstinenci
• pyospermie zvýšená prítomnost leukocytu ve
  spermatu muže svedcit pro zánety mužských adnex
• hemospermie

prostatický exprimát
ejakulát
18
Ejakulát

• analýza ejakulátu je nezbytným vyšetrením u
  mužského faktoru sterility
• je treba vyšetrit nejméne tri ruzné vzorky v
  ruzných casových obdobích
• ejakulát se získává masturbací po nejméne pet dní
  trvajícím období bez ejakulace
• ejakulát vzniká smíšením spermií se sekrety
  prostaty, semenných vácku, Cowperových a
  Littreových žlázek

19
Normální a patologický spermiogram

• hodnoty normální spermiogramu
• objem spermatu gt 2 ml
• pH 7,2 7,8
• koncentrace spermií gt 20x106 spermií/ml
• celkový pocet spermií gt 40x106 spermií
• pohyblivost gt 50 spermií s pohybem vpred
• morfologie gt 50 spermií s normálním tvarem
• vitalita spermií gt 50 spermií živých
• nekteré termíny vztahující se ke spermiogramu
• aspermie znací úplnou absenci ejakulátu pri
  orgasmu
• azoospermie v ejakulátu se nenacházejí žádné
  spermie
• oligospermie koncentrace spermií je nižší než
  20 mil. spermií / 1 ml
• astenozoospermie pohyblivost spermií nižší než
  norma (50 60)
• nekrozoospermie prítomnost jen avitálních
  spermií

20
Gynekologická cytologie

• onkologická cytologie predstavuje duležitou
  screeningovou metodu a je duležitou metodou pri
  diagnostice cervikálních lézí
• hormonální cytologie je funkcní cytologií,
  zameruje se na zmeny epitelu pochvy v reakci na
  hormonální stimulaci

onkologická cytologie
hormonální cytologie
21
Metodika gynekologické cytologie

• odber materiálu
• z exocervixu napr. vatovou štetickou, platinovou
  klickou nebo jinými speciálními nástroji
• z kanálu deložního pomocí kartácku
• natrení na podložní sklícko
• fixace (95 alkoholem)
• standardní barvení dle Papanicolaoua
• hodnocení (Bethesda systém)

22
Bethesda systém - cytodiagnostika

• od roku 1988 (do té doby platilo v gynekologické
  cytologii hodnocení podle Papanicolaoua)
• základem popisná diagnostická terminologie
• kvalita náteru (optimální, suboptimální,
  nehodnotilný)
• popis infekce (koky, gardnerely, smíšená bakt.
  flóra)
• hormonální stav (odpovídá/neodpovídá veku a
  cyklu)
• bunecné zmeny dlaždicového epitelu
• bunecné zmeny žlázového epitelu

23
(No Transcript)
24
(No Transcript)
25
Cytologická diagnostika respiracních onemocnení

• mikroskopické vyšetrení sputa (mikrobiologie,
  cytologie)
• cytologické vyšetrení materiálu odebraného behem
  bronchoskopie (kartácky )
• biopsie postiženého plicního parenchymu (lepší
  dg. výtežnost)
• bronchoalveolární laváž
• vyšetrení punktátu (pleurální a perikardiální
  výpotek, fluidothorax )

26
Bronchoalveolární laváž

• behem bronchoskopie aplikováno 150 300 ml
  fyziologického roztoku do segmentálního bronchu a
  jeho opetovná aspirace
• získává se tak výplachová tekutina z alveolu a
  bronchiolu
• bunecný rozpocet (lymfocyty, polymorfonukleáry,
  eosinofily)
• nádorové bunky
• hodnocení makrofágu krystalická telíska
  (silikóza), hemosiderin (plicní hemoragie)
• nález specifických bunek napr. Langerhansovy
  bunky s Birbeckovými granuly (histiocytóza X)

27
Vyšetrení ascitu

• biochemie (rozlišení exsudát transsudát)
• mikrobiologie
• cytologie
• detekce nádorových bunek
• prognóza nemocných s maligním onemocnením a
  nádorovými bunkami v ascitu

28
Cytologie plodové vody

• fyziologe
• amniová tekutina produkována amniem a mocovým
  traktem plodu
• voda je plodem polykána a je do ní vymešována moc
• cytologický obraz
• bunky dlaždicového epitelu (bazální,
  intermediární, povrchové)
• blížící se porod povrchové epitelie ve
  shlucích, bezjaderné šupiny squamy tvorí
  mázek
• bunky urogenitálního a trávicího traktu a bronchu
  plodu
• Kittrichova zkouška
• prukaz plodové vody
• barvení squam Nilskou modrí oranžove sg.
  zralosti plodu

29
Cytologie likvoru

• v 1 mm3 likvoru se fyziologicky nachází
• nekolik deskvamovaných bunek
• maximálne 2 5 lymfocytu

30
Nátery periferní krve a sternální punkce

• barvení dle Pappenheima (diferenciál)
• barvení brilantkresylovou modrí (retikulocyty)
• zhotovení náteru periferní krve

31
periferní krev
32
periferní krev
33
sternální punkce
34
Cytologická barvení v histologii

• barvení podle Heidenheina
• jádrová barvení
• barvení jádrovou cervení
• barvení galocyaninem
• Feulgenova nukleární reakce

35
Díky za pozornost ?