Diapositive 1

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Gènes de la famille GABARAP estrogéno-dépendant,
rôles dans le système nerveux central et
loncogenèse
Fabrice Tolle
Laboratoire de Biochimie, Biologie Moléculaire,
EA 3922, IFR 133 Équipe  Estrogènes, Expression
génique et Pathologies du SNC  UFR Sciences et
Techniques, Université de Franche Comté BESANCON
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Objectif du projet de thèse est double
Expression de gec1 et GABARAP dans le cerveau de
rat et au cours de loncogenèse
Régulation in vitro et in vivo de lexpression du
gène gec1/GABARAPL1
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Estradiol-17b (E2)
Développement et progression cancers (sein,
prostate et utérus)
Effet sur la plasticité, formation des
terminaisons nerveuses, neuroprotecteur.
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Modulation dexpression de gènes cibles
Fixation à lADN
Récepteurs aux estrogènes (ER)
E2
E2
Récepteurs nucléaires
Gène gec1 régulé positivement par les estrogènes
GEC1
E2
ER
ER
Gec1
Expression du gène
Code la protéine GEC1 Apparentée à GABARAP (GABAA
receptor associated protein)
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Récepteur GABAA
Protéines du cytosquelette
Protéines GEC1 et GABARAP
Rôle dans la transmission de linflux nerveux
Rôle dans le maintien de la cellule
Intérêt de GEC1 ET GABARAP dans le système
nerveux central ?
Étude de leurs expressions
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Gec1 Abondamment exprimé dans le
cerveau Peu ou pas exprimé dans divers tissus
cancéreux
Gabarap Peu exprimé dans le cerveau Peu exprimé
dans différents tissus cancéreux
OBJECTIF DE TRAVAIL DOUBLE
Étudier lexpression de gec1 et gabarap au cours
de loncogenèse dans le SNC
Étudier lexpression des gènes de la famille
Gabarap in vivo dans le SNC
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Transcription
Traduction
ARNm (simple brin)
ADN (double brin)
Protéine
Étude de lexpression dun gène
Taux dARNm
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ARNm
Hybride ARN/ADNc
Transcription inverse
Ces hybrides ARN/ADNc sont la base de toute notre
étude
Étudier lexpression dun gène
Évaluer le nombre de copies en ARNm présent dans
les cellules du tissus
Quantité infime
Besoin damplification
PCR
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La PCR
Technique articulée autour dun cycle répété X
fois
A chaque cycle, la quantité initiale dADN est
doublée
2 techniques pour estimer les quantités dADN
Méthode semi quantitative par visualisation de
lADN À laide dun agent intercalant fluorescent
Méthode quantitative par suivi de lévolution en
temps réel grâce à un appareil (LightCycler,
Roche) couplé à un ordinateur
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Implication de gec1 et de gabarap dans la genèse
et/ou progression de tumeurs ?
Modèle détude les méningiomes
tumeur de la dure mère
incidence annuelle de 6 pour 100000
25 tumeurs intracrâniennes
2X chez la femme que chez lhomme
après la ménopause
Tumeurs bénignes (grade I de lOMS)
10 à 25 qui sont localement invasives et qui
vont récidiver (grade II et III de lOMS)
A prédominance masculine
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Étude de lexpression de gec1 et gabarap dans les
méningiomes
Protocole de collecte et détude (avec accord des
patients) (Dr Gabriel Viennet, anatomo-pathologist
e au CHU de Besançon)
Approbation du Comité dÉthique
Méningiome
Diagnostic
(labo danatomo-pathologie)
Etude de gec1 et gabarap
(Laboratoire de Recherche)
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Étude de lexpression de gec1 et gabarap dans
les méningiomes
55 exploitables
Collecte en 2005-06
67 méningiomes (Grade I)
gabarap
Exprimé de façon ubiquitaire
Analyse par RT-PCR semi quantitative
Perte dexpression dans 32 des cas
gec1
Perte dexpression dans 30 des méningiomes
provenant de femmes
Perte dexpression dans 44,5 des méningiomes
provenant dhommes
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Étude de lexpression de gec1 et gabarap dans
les méningiomes
Attente dautres campagnes de collectes (60
méningiomes par an)
Confirmer les résultats
Perte dexpression de gec1
Sexe des patients
Grade des tumeurs
gec1 nouveau marqueur génétique de cancérisation ?
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Étude de lexpression des gènes de la famille
Gabarap dans le SNC
Modèle détude le rat
Extraction du cerveau
Section suivant un plan médian du cerveau
Référence
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Étude de lexpression des gènes de la famille
Gabarap dans le SNC de rat
Analyse par PCR en temps réel
gec1 est le gène de la famille Gabarap le plus
exprimé dans le cerveau
dans tronc et diencéphale
GEC1 rôle fondamental dans le cerveau ?
(Mansuy-Schlick, Tolle et al, 2006)
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Étude de lexpression des gènes de la famille
Gabarap dans le SNC de rat
Mise au point dune technique de PCR en temps réel
Mise au point dune technique de micro dissection
cérébrale
1ère étude discriminante de lexpression des
différents membres de la famille Gabarap dans les
différentes aires de cerveau
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Valorisation et reconnaissance des travaux
Publications internationales
Vernier-Magnin S., Nemos C., Mansuy V., Tolle F.,
Guichard L., Delage-Mourroux R., Jouvenot M.
Fraichard A. Analysis of the guinea pig
estrogen-regulated gec1/GABARAPL1 gene promoter
and identification of a functional ERE in the
first exon . Biochim. Biophys. Acta., 2005, 1731
23-31. Mansuy V., Tolle F., Delage-Mourroux
R., Risold P-Y., Jouvenot M. et Fraichard A.
Specific distribution of gabarap, gec1/gabarap
Like 1, gate16/gabarap Like 2, lc3 messenger RNAs
in rat brain areas by quantitative real-time PCR.
Brain Res. 2006, 1073-1074C 83-87.
Publication locale
Tolle F. Gec1, gène estrogéno-dépendant 
Importance dans le cerveau et implication dans le
processus de cancérisation. Lauréat du Prix ADOC
2006 de lécole doctorale  Homme Environnement
Société  Publié dans le livre ADOC 2006,
regroupant tous les lauréats des différentes
écoles doctorales Bisontines.
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Communication lors de Forums
Mansuy V., Fraichard A., Boireau W., Tolle F.,
Nemos C., Jouvenot M. et. Delage-Mourroux R.
GEC1 nouvelle protéine codée par un gène
estrogéno-dépendant et potentiellement impliquée
dans le transport du récepteur GABAA. Forum des
jeunes chercheurs, juin 2004, Besançon
(CO) Tolle F., Mansuy V., Delage-Mourroux R.,
Risold P-Y., Jouvenot M. et Fraichard A. Profils
dexpression des gènes de la famille GABARAP
(GABAA Receptor Associated Protein) dans
différentes aires cérébrales de Rat. Forum des
jeunes chercheurs, juin 2005, Dijon (CA) Tolle
F. Gec1, gène estrogéno-dépendant  Importance
dans le cerveau et implication dans le processus
de cancérisation. Lauréat du Prix ADOC 2006 de
lécole doctorale  Homme Environnement
Société  Forum des métiers et de jeunes
chercheurs, juin 2005, Besançon (CO) Berthier
A., Tolle F., Mansuy-Schlick V., Fraichard A.,
Delage-Mourroux R., Jouvenot M. Effet de la
surexpression de gec1 sur le phénotype et le
potentiel prolifératif de cellules de cancer du
sein (MCF-7). Forum des jeunes chercheurs de la
SFBBM, septembre 2006, Clermont-Ferrand (CA)
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Conditions pour faire une thèse
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MERCI