Dosage des Principaux Stupfiants en Pratique Courante

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Dosage des Principaux Stupéfiants en Pratique
Courante

• Dr. P. GANDIA-MAILLY
• Laboratoire de Pharmacocinétique et Toxicologie
  Clinique
• Institut Fédératif de Biologie, Toulouse

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EPIDEMIOLOGIE
PLAN
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EPIDEMIOLOGIE
MATRICES BIOLOGIQUES
PLAN
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EPIDEMIOLOGIE
MATRICES BIOLOGIQUES
PLAN
METHODES de DOSAGE Immunochimie
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EPIDEMIOLOGIE
MATRICES BIOLOGIQUES
PLAN
METHODES de DOSAGE Immunochimie
STUPEFIANTS URINAIRES
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EPIDEMIOLOGIE
MATRICES BIOLOGIQUES
PLAN
METHODES de DOSAGE Immunochimie
ADULTERATION
STUPEFIANTS URINAIRES
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EPIDEMIOLOGIE
MATRICES BIOLOGIQUES
CONCLUSION
PLAN
METHODES de DOSAGE Immunochimie
ADULTERATION
STUPEFIANTS URINAIRES
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Epidémiologie (1)
Toxicomanie aux stupéfiants (France) Verstraete
et al, Toxicorama, X (2), 1998, 56-60

• Enquête Baromètre Santé (1995)
• 1993 personnes représentatives de la population
  (18-75 ans)
• 16 déclarent avoir pris une drogue au cours de
  leur vie
• Cannabis (4,4)
• Ecstasy et Amphétamine (0.3)
• LSD (0.2)

• Enquête effectuée pendant le premier trimestre
  1995
• 10870 jeunes (18-22 ans)
• usage au cours du premier trimestre 1995
• Cannabis (19.1)
• Cocaïne (0.7)
• Héroïne (0.6)
• Ecstasy (0.4)
• LSD (0.4)

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Epidémiologie (2)
Accidents de la route Mura et al, Toxicorama, XI
(4), 1999, 225-31

• Etude de prévalence de la consommation de
  stupéfiants chez des conducteurs impliqués dans
  un accident
• Collecte auprès de 11 experts judiciaires sur un
  an
• dosage sanguin par GC-MS
• Cannabis, Opiacés, Amphétamines, Cocaïne
• 169 accidents 84 corporels, 85 mortels
• 145 hommes, 24 femmes
• ? 70 âgés de moins de 35 ans
• Résultats
• 35 des échantillons positifs pour lune au
  moins des 4 familles
• 26 des conducteurs sous imprégnation
  cannabique
• (50 des cas positifs pour le cannabis
  montraient une consommation dalcool )

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Matrices Biologiques (1)
SANG
CHEVEUX
URINE
SALIVE
SUEUR
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Matrices Biologiques (2)
SANG

• Milieu privilégié
• Permet une approche quantitative
• Evaluation de limprégnation du sujet pour une
  substance donnée

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Matrices Biologiques (3)
URINE

• Prélèvement complémentaire au prélèvement sanguin
• Fenêtre rétrospective plus ou moins large sur le
  passé toxicologique dun individu (2 - 3 jours)
• Disponibles en quantité importante
• Métabolites
• Peu d'intérêt sur le plan quantitatif
• Dépistage des stupéfiants

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Matrices Biologiques (4) Matrices Alternatives

• Facile à prélever chez les personnes qui ne sont
  pas sous influence
• de drogues après consommation de cannabis,
  amphétamines ou cocaïne, la salive
• devient un liquide très visqueux devant être
  prétraité
• Techniques de recueil multiples crachat, gomme
  à mâcher,
• stimulation acide (jus de citron), salivette

• Concentrations plus élevées dans les crachats
  (THC)

SALIVE Verstraete et al, Annales de Toxicologie
Analytique, XV (2), 2003, 83-91
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Matrices Biologiques (5) Matrices Alternatives

• Apparition synchrone au plasma (molécule mère)
• Marqueur dune consommation récente (12 à 24
  heures maximum)
• Bonne corrélation avec les résultats sanguins
• Passage par diffusion passive et/ou sécrétion
• Risque de contamination par la fumée (cannabis)
• La salive semble être une matrice appropriée
  pour le dépistage
• des opiacés, des amphétamines et de la cocaïne
  mais pas du cannabis
• (projet ROSITA Sécurité routière - Drugwipe)

SALIVE Verstraete et al, Annales de Toxicologie
Analytique, XV (2), 2003, 83-91
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Matrices Biologiques (6) Matrices Alternatives

• Dépôt sec qui reste sur la peau une fois que la
  sueur sest évaporée
• Facile à prélever (au niveau du front)
• Apparition plus tardive de la molécule mère que
  dans le plasma
• Marqueur dune consommation récente
• Bonne corrélation avec les résultats sanguins
• Mécanisme de passage des drogues dans la sueur
  mal élucidé
• Risque de contamination externe sur la peau
• Test rapide de dépistage de lamphétamine et le
  MDMA (Drugwipe)

SUEUR Verstraete et al, Annales de Toxicologie
Analytique, XV (2), 2003, 83-91
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Matrices Biologiques (7) Matrices Alternatives

• Facile à prélever
• Le recueil dun 2 échantillon identique est
  toujours possible
• Marqueur dune consommation chronique
• Technique de recueil
• cheveux lavés
• mèches de 40-50 cheveux
• couper au ciseau (ne pas arracher)
• 1 cm au-dessus du niveau de la racine

CHEVEUX Kintz Annales de Toxicologie Analytique,
XII (1), 2000, 49-55 Annales de Toxicologie
Analytique, XV (2), 2003, 117-22 Duhem Annales de
Toxicologie Analytique, XVI (4), 2004, 253-6
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Matrices Biologiques (8) Matrices Alternatives

• Mécanisme dincorporation dans les cheveux encore
  mal élucidé
• Diffusion passive des substances du sang vers les
  cellules en croissance du bulbe pileux
• Diffusion externe à partir des sécrétions
  sudorales et sébacées
• Liaison du xénobiotique à la mélanine
• Différence dincorporation suivant la couleur des
  cheveux (en fonction du degré doxydation de la
  mélanine) concentrations plus élevées dans les
  cheveux foncés que dans les cheveux clairs
• Les albinos incorporent tout de même les
  xénobiotiques (place de la mélanine?)
• Risque de contamination par la fumée (cannabis)
• Si décoloration des cheveux (adultération),
  possibilité dutiliser les poils pubiens

CHEVEUX Kintz Annales de Toxicologie Analytique,
XII (1), 2000, 49-55 Annales de Toxicologie
Analytique, XV (2), 2003, 117-22 Duhem Annales de
Toxicologie Analytique, XVI (4), 2004, 253-6
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Méthodes de Dosage (1)
Méthodes dOrientation (Dépistage Dosage
qualitatif) Kintz, Toxicorama, IX (2), 1997, 51-64

• Colorimétriques, Enzymatiques et Immunochimiques
  (LPTC)

• Résultats rapides compatibles avec l'urgence
  toxicologique

• Faciles à mettre en uvre, automatisables

• Défaut de sensibilité et de spécificité

• Domaine d'application limité (urine)

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Méthodes de Dosage (2)
Méthodes de confirmation (Dosage
quantitatif) Kintz, Toxicorama, IX (2), 1997,
51-64

• Chromatographiques en phase liquide ou gazeuse

• Identification et dosage du toxique en cause

• Différents couplages possibles pour la détection
  (SM)
• personnel spécialisé
• budget important
• délai de réponse long

• Technologie complexe peu adaptée à l'urgence

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Stupéfiants Urinaires Amphétamines (1)

• Famille avec de nombreux composés
• phénomène des soirées "rave-parties"
• facilité de synthèse chimique (designer's drugs)
  
• en évolution constante
• Principales substances
• Galliot-Guilley, Annales de Pharmacie
  Française,62, 2004, 62-4

phénéthylamine
amphétamine
2,5-diméthoxy-4-bromo- amphétamine DOB
3,4-méthylènedioxy-amphétamine MDA, love pill
methamphétamine
paraméthoxyamphétamine PMA
3,4-méthylènedioxy-N-méthamphétamine MDMA, ecstasy
3,4-méthylènedioxyéthylamphétamine MDEA, eve
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Stupéfiants Urinaires Amphétamines (2)

• Dépistage urinaire
• Verstraete et al, Toxicorama, IX(2), 1997,
  65-71

• Caractéristiques
• seuil à 1000 ng/mL (d-methamphétamine)
• fenêtre 1- 3 jours

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Stupéfiants Urinaires Cannabinoïdes

• Cannabis (chanvre indien)
• principe actif majoritaire ?9-THC
  (?9-tétrahydrocannabinol)
• métabolisme une centaines de métabolites
  (certains psychoactifs)
• ?9-THC ? 11-OH-?9-THC ? 11-nor-?9-THC-9-COOH

(psychoactif)
(analgésique)

• Dépistage urinaire
• calibration en ?9-THC-COOH - Seuil 50 ng/mL
• réactions croisées avec d'autres cannnabinoïdes
  (? 60)

• Difficultés d'interprétation
• élimination très lente
• composés très lipophiles - fixation dans tissu
  adipeux - relargage pendant plusieurs jours voire
  plusieurs semaines (importance et fréquence des
  prises)
• seulement 50 à 60 de la dose éliminés après 3
  jours
• dissociation entre le témoin d'une consommation
  et l'état de l'individu

Emax 2,5h Tmax sang 1h

• Menetrey et al, Annales de Toxicologie
  Analytique,XVI(4), 2004, 231-43

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Stupéfiants Urinaires Opiacés (1)

• Métabolisme des principaux opiacés

Morphine
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Stupéfiants Urinaires Opiacés (2)

• Dépistage urinaire lAC reconnaît les molécules
  possédant un noyau morphinane
• Goullé et al, Annales de Toxicologie
  Analytique, XIV(1), 2002, 27-32

• Caractéristiques
• seuil à 300 ng/mL (morphine)
• fenêtre 1-2 jours

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Stupéfiants Urinaires Cocaïne

• Métabolisme
• différents métabolites
• ecgonine 1 - 10
• ecgonine méthylester 20 - 40
• benzoylecgonine 30 - 50 - Elimination plus
  lente (48 - 72 heures)
• Dépistage urinaire
• calibration en benzoylecgonine
• pratiquement pas de croisement avec la cocaïne
  ou l'ecgonine
• seuil 300 ng/mL
• fenêtre 1-3 jours
• Diagnostic d'une exposition au crack

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Adultération (1)
SANG
CHEVEUX
URINE
SALIVE
SUEUR
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Adultération (2)
SANG
CHEVEUX
URINE
SUEUR
SALIVE
28
Adultération (3)
SANG
CHEVEUX
URINE
?
SUEUR
SALIVE
29
Adultération (4)
SANG
CHEVEUX
URINE
?
SUEUR
SALIVE
Essuyer le front
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Adultération (5)
SANG
CHEVEUX
URINE
?
SUEUR
SALIVE
Essuyer le front
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Adultération (6)

• Shampoings
• 1 Laque qui laisse un film sur le cheveu
• non enlevé par les procédures classiques de
  décontamination
• formation dun complexe avec le stupéfiant une
  fois la matrice biologique dissoute
• interférence avec RIA

CHEVEUX
Dumestre-Toulet et al Toxicorama, XI(3), 1999,
155-66 Dumestre-Toulet Annales de Toxicologie
Analytique, XIV (1), 2002, 43-9
2 Dégradation de la mélanine
32
Adultération (7)
www.cleartest.com
www.howtopassyourdrugtest.com
33
Adultération (8)
Par dilution
Absorption dune grande quantité deau
URINE
Augmentation de la diurèse
Dumestre-Toulet et al Toxicorama, XI(3), 1999,
155-66 Dumestre-Toulet Annales de Toxicologie
Analytique, XIV (1), 2002, 43-9
Dilution du stupéfiant
Créatinine lt 5 mg/dl Gravité lt 1.001
Concentration inférieure au seuil
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Adultération (9)
Par substituttion urines propres
URINE

• Urines
• dune personne ne consommant pas de stupéfiant
• dun animal

Dumestre-Toulet et al Toxicorama, XI(3), 1999,
155-66 Dumestre-Toulet Annales de Toxicologie
Analytique, XIV (1), 2002, 43-9
35
Adultération (10)
150
www.thewhizzinator.com
36
Adultération (11)

• Par adultération in vitro
• Nitrites
• Pyridine
• Eau de javel
• Savons
• Acides/Bases
• Glutaraldéhyde

URINE
Dumestre-Toulet et al Toxicorama, XI(3), 1999,
155-66 Dumestre-Toulet Annales de Toxicologie
Analytique, XIV (1), 2002, 43-9

• Bandelettes réactives
• pH
• Créatinine
• Gravité
• Nitrites
• Glutaraldéhyde
• Pyridine
• Eau de javel

• Par adultération in vivo
• Probenecide

Exple adultacheck (Dade Behring)
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Conclusion
LPTC

• Stupéfiants couramment détectés
• Cannabis, Cocaïne, Amphétamines, Dérivés
  Morphiniques, LSD
• Type de détection et délai
• Dépistage (dès réception 30 minutes)
• Résultat qualitatif présence ou absence
• Technique immunochimique
• Dosage quantitatif (dès réception demi-journée)
• Résultat quantitatif concentration
• Technique chromatographique (LC-MS et GC-MS)
• Matrice
• Urine (dépistage et dosage quantitatif)
• Sang/Plasma/Sérum (dosage quantitatif)
• Conservation (24 heures) / Transport 4C
• Prix (TTC)
• Dépistage B120 (32,4 euros)
• Dosage quantitatif B200 (54 euros)