PEMERIKSAAN ANGKA KUMAN Zainab, M.Si., Apt TUJUAN Mahasiswa

1
PEMERIKSAAN ANGKA KUMAN

• Zainab, M.Si., Apt

2
TUJUAN

• Mahasiswa dapat menentukan jumlah bakteri pada
  sampel yang diteliti menggunakan metode angka
  lempeng total.

3
ALAT DAN BAHAN

• Alat
• lampu spiritus
• Autoclave
• Inkubator
• Mikropipet
• Spreader

• Bahan
• Sampel air sumur, es batu, minuman dan makanan
  dll.
• NaCl fisiologis steril sebagai pengencer
• Media Mueller Hinton untuk menghitung angka
  lempeng total
• Media TBX untuk identifikasi Escherichia coli

4
METODE PEMERIKSAAN ANGKA LEMPENG TOTAL (ALT)

• Pengenceran Sampel (sample berupa cairan)
• Sampel diencerkan dg larutan NaCl fisiologis.
  Pengenceran dilakukan 10 kali, 100 kali, 1000
  kali dan 10.000 kali. Adapun cara pengencerannya
  adalah sebagai berikut
• 10 kali Sampel dipipet secara aseptic sebanyak
  0,5 ml ke dalam tabung reaksi yang telah berisi
  4,5 ml larutan NaCl fisiologis, kemudian
  dihomogenkan.
• 100 kali Diambil 0,5 ml dari pengenceran 10
  kali, ditambahkan 4,5 ml larutan NaCl fisiologis
  dan dihomogenkan.
• 1000 kali Diambil 0,5 ml dari pengenceran 100
  kali, ditambahkan 4,5 ml larutan NaCl fisiologis
  dan dihomogenkan.
• 10.000 kali Diambil 0,5 ml dari pengenceran 1000
  kali, ditambahkan 4,5 ml larutan NaCl fisiologis
  dan dihomogenkan
• Sample yang berupa sediaan padat ditimbang
  seksama sebanyak 0,5 g. Dimasukkan secara aseptic
  ke dalam tabung dan ditambah 4,5 ml larutan NaCl
  fisiologis steril (pengenceran 10 kali) campur
  homogen, pengenceran selanjutnya sama dengan di
  atas.

5
METODE PEMERIKSAAN ANGKA KUMAN

• 1. Dilakukan pengenceran 1 10, 1 100, 1
  1000, 1 10000
• dengan NaCl 0,9 steril.
• 2. Diambil 100 µl tuangkan pada media MH untuk
  masing-masing pengenceran. Kemudian ratakan
  dengan spreader berulang-ulang hingga cairan
  merata pada petri (Metode cawan sebar/spread
  plate).
• 3. Diinkubasi pada suhu 37 C selama 18-24 jam.
• 4. Dihitung jumlah koloni bakteri pada
  masing-masing petri pada berbagai pengenceran.

6
Uji angka lempeng total (ALT)
7
(No Transcript)
8
HASIL PEMERIKSAAN ANGKA KUMAN
9
CARA PENGHITUNGAN

• Hitung koloni pada masing-masing pengenceran.
• Koloni yang menumpuk tidak dapat dihitung. Cari
  petri dg koloni yang tidak menumpuk dan dapat
  dihitung.
• Jumlah koloni yg representatif adalah yang
  berjumlah antara 30-300 koloni.
• Jumlah koloni dihitung dg rumus.

10
RUMUS
Faktor pengenceran
ALT
Satuan ALT CFU/ml atau CFU/g
Jumlah koloni yg dimasukkan rumus adalah jml
koloni yang representatif
11
Identifikasi E. coli dg media TBX
100 µL sampel pada pengenceran tertentu (ALT)
inokulasi pada media TBX, ratakan
Inkubasi 18-24 jam dengan suhu 37 0C
Amati koloni yang tumbuh
Warna biru-kehijauan (Positif E.coli)
12
REAKSI YG TERJADI
13
Koloni E. coli di media TBX